编制说明检验检疫标准管理信息系统Word文档格式.docx

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为了防止生产厂利用其它菌冒充沼泽红假单胞菌，或者有效活菌数达不到标准要求，保护产品生物安全，保护消费者权益，制定本标准。

根据最新《伯杰氏系统细菌学手册》第二版（Bergey'

sManualofSystematicBacteriology,secondedition），沼泽红假单胞菌属于细菌域（Bacteria）、变形菌门（Proteobacteria）、α-变形杆菌纲（Alphaproteobacteria）、根瘤菌目（Rhizobiales）、慢生根瘤菌科（Bradyrhizobiaceae）、红假单胞菌属（Rhodopseudomonas）。

依据分类学研究成果的积累，手册对包括红假单胞菌属在内的许多菌种的分类地位进行大幅度调整,本标准依据《伯杰氏系统细菌学手册》第二版对沼泽红假单胞菌进行鉴定，手册中对该菌描述如下：

沼泽红假单胞菌单个细胞呈杆状到卵形，偶尔轻微弯曲，0.6-0.9×

1.2-2.0μm，以亚极生鞭毛运动，营芽生繁殖。

母细胞在位于鞭毛相反的一端产生一个细管，管长为原来细胞的1.5—2.0倍。

管的末端膨大，子细胞成长，产生一个哑铃状的菌体。

然后发生不对称分裂。

年幼的单个细胞很会运动。

在老培养物亦个特征：

单个细胞以鞭毛端相互连在一起，形成玫瑰状标识和簇。

在某些复杂的培养基中，单个细胞可长达10μm，形状不规则。

光合膜象叶一样出现在细胞膜下并与之平行；

芽生细管中无叶状结构。

细胞液的颜色为红色至棕红色。

活细胞在375、468、493、520-545、589、802和860-875nm处有吸收峰。

光和色素为菌叶绿素a（被叶绿醇酯化）和正常的螺菌黄质系的胡萝卜。

在有少量酵母膏，以氢、硫化物和硫代硫酸盐作为电子供体营光能自养生活。

能以多种有机物营光能异养生长。

在黑暗中微氧至厌氧环境出现化能生长。

厌氧环境中能发酵一些底物。

硫酸盐可作为唯一的硫源。

氮源可以是氨、四氧化二氮、某些氨基酸或者对于几个菌株，还可能是硝酸盐。

所需的生长因子是对-氨基苯甲酸，而对某些菌株是生物素。

酵母膏有显著刺激生长的作用。

存在带10个异戊二烯单元的泛醌（Q-10）

中温淡水细菌，最适温度：

30-37℃，最适pH6.9（pH范围：

5.5-8.5）

沼泽红假单胞菌属于不产氧光能紫色细菌（AnoxygenicPhototrophicBacteria,简称APPB）。

该类细菌能在厌氧条件下通过光合作用生长，但不产氧。

它们的另一个主要特征是含有光依赖的菌绿素a或b和各种类胡萝卜素。

APPB在分类上分属α-变形菌纲（Alphaproteobacteria）、β-变形菌纲（Betaproteobacteria）、γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）。

紫色非硫细菌（purplenonsulfurbacteria，简称PNSB）隶属于α-变形菌纲和β-变形菌纲；

紫色硫细菌隶属于γ-变形菌纲。

紫色硫细菌在光合作用时需要还原性硫化物作为电子供体。

沼泽红假单胞菌属于PNSB。

三、标准制定依据

由于是专一性分离鉴定一种菌，本标准采用先选择性增菌，可见生长后，再用琼脂平板分纯，然后鉴定菌种的实验策略。

（一）培养基选择依据

本标准的选择性增菌培养基采用JohannesF.Imhoff教授在《伯杰氏系统细菌学手册》及《Theprokaryotes:

ahandbookonthebiologyofbacteria:

Proteobacteria:

AlphaandBetaSubclasses》中推荐的AT培养基。

（注：

Imhoff教授是当今光合细菌分类学领域的权威学者，手册中光合细菌方面的首席编辑）。

AT培养基适宜绝大多数PNSB生长。

根据Imhoff教授推荐，苯甲酸特别适合作为沼泽红假单胞菌选择性增菌的碳源。

故选择性增菌培养基配方中用苯甲酸钠代替通用的乙酸钠，生长因子只添加沼泽红假单胞菌需要的对-氨基苯甲酸和生物素，得出M-AT培养基（modifiedATmedia）。

光和细菌分离培养基是一款近年研制适合包括沼泽红假单胞菌在内多种光合细菌快速生长的培养基。

经实验证实，与多种常见培养基比较，沼泽红假单胞菌在该培养基上长得快，2d即可得到结果；

且长得充分，得到的平板菌落数多。

（二）鉴定项目制定依据

1．根据《伯杰氏系统细菌学手册》介绍，隶属于β-变形菌纲的PNSB有三个属、5个种，它们的一些特征如表1所示。

表1.光合营养的β-变形菌纲不同特征

菌种

特征

Rhodocycluspurpuresu

Rhodocyclustenuis

Rubrivivaxgelatinosus

Rhodoferaxfernementans

Rhodoferaxantarcticus

细胞形态

半圆到圆

弯曲杆菌

直至弯曲杆菌

运动

—

＋

粘液形成

颜色

紫色紫罗兰至紫罗兰

棕红色或紫色紫罗兰

棕色

桃棕色

利用苯甲酸

注：

+:

绝大数菌株阳性；

－：

绝大数菌株阴性

从表1可以看出，通过增菌液的苯甲酸利用、菌液和菌落颜色、菌落形态、镜检等完全可以把沼泽红假单胞菌与光合营养的β-变形菌纲的细菌区分开。

2．根据《伯杰氏系统细菌学手册》介绍，隶属于α-变形菌纲的PNSB分散在三个目中：

红螺菌目（Rhodospirillales）、红细菌目（Rhodobacterales）和根瘤菌目（Rhizobiales）。

（1）红螺菌目（Rhodospirillales）中的PNSB隶属八个属，有12个种。

除了Rhodopilaglobiformis外，其它菌的菌体都是螺旋状。

Rhodopilaglobiformis嗜酸，最适pH为4.8-5.0。

（2）红细菌目（Rhodobacterales）中的PNSB隶属三个属：

红细菌属（Rhodobacter），Rhodobaca和Rhodovulum。

红细菌属（Rhodobacter）的种属于淡水菌，而Rhodobaca和Rhodovulum则是真正的海洋菌，生长时需要盐。

a）Rhodobaca属就一个种Rhodobacabogoriensis，分离自非洲肯尼亚的soda湖，最适pH9.0（范围：

7.5-10.0），最适温度39℃（范围：

30-45℃），需1-2%的NaCl。

该菌在本标准的M-AT培养基中无生长。

b）小红卵菌（Rhodovulum）属含菌绿素a和球形烯（spheroidene）系列的类胡萝卜素。

光照培养下一般显黄-绿色至黄褐色。

各个种的一些特征如表2所示。

表2.Rhodovulum属各个种的特征

R..sulfidophilum

R.adriaticum

R.euryhalinum

R.iodosum

R..robiginosum

R.strictum

－

NaCl（%）

1-6

2.5-7.5

0.5-12

2.5-5

0.8-1.0

利用：

苯甲酸

柠檬酸

甲酸

±

葡萄糖

酒石酸

nd

（＋）

绝大数菌株阴性；

：

菌株间可变；

（＋）弱生长或只微氧生长；

nd:

未检测

从表2可以看出，通过增菌液的低盐浓度、苯甲酸利用，菌液和菌落颜色、外加碳源利用等完全可以把沼泽红假单胞菌与小红卵菌（Rhodovulum）属各个种区分开。

c）红假单胞菌（Rhodopseudomonas）原有的一些种现在被划分到Rhodobacter和Rhodovulum。

Rhodobacter属各个种的一些特征如表2所示。

表3.Rhodobacter属各个种的特征

R.capsulatus

R.azotoformans

R.blasticus

R.sphaeroides

R.veldkampii

粘液产生

从表3可以看出，通过运动、粘液产生、碳源利用生化实验可以把沼泽红假单胞菌与红细菌属（Rhodobacter）区分开。

（3）根瘤菌目（Rhizobiales）中的PNSB隶属七个属12个种，其中包括红假单胞菌属，红假单胞菌属共有四个种（根据16SrDNA基因序列分析，有学者认为“Rhodopseudomonascryptolactis”更应属于Rhodoplanes属）。

大多数根瘤菌目中的PNSB原本被认为是红假单胞菌属的种。

随着16SrDNA等技术的发展，它们被分划到不同属中，当然也有新发现的菌种加入。

绿芽菌属（Blastochloris）属（两个种）含菌绿素b，培养物为绿色至橄榄绿；

其它各个种含菌绿素a，为粉红色、红色至棕红色。

各个种的一些特征如表4所示。

表4.Rhizobiales目各个种的特征

Rhodopseudomonaspalustris

“Rhodopseudomonas

cryptolactis”

Rhodopseudomonasjuliac

Rhodopseudomonas

rhenobacensis

Rhodomicrobiumvannielii

Rhodobiumorientis

Rhodobiummarinum

Rhodoplanesroseus

Rhodop