GPC操作步骤Word下载.docx

GPC操作步骤Word下载.docx

《GPC操作步骤Word下载.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《GPC操作步骤Word下载.docx（22页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

超声15min，恢复到室温后才可利用。

2.分析操作步骤

2.1.开机及平稳进程

2.1.1.打开空调，使室内温度维持在25℃左右。

2.1.2.打开电脑及仪器（包括输液泵LC-20AD、自动进样器SIL-20A、检测器RID-10A、柱温箱CTO-20A）。

在打开仪器的时候，通常操纵器最后开。

若是操纵器装在输液泵内部，那么该输液泵最后开。

2.1.3.运行LCsolution。

双击电脑桌面

，打开LCsolution程序，点击第一个图标。

Login窗口点击OK，无密码。

2.1.4.点击“InstrumentParametersView”中“Normal”，设定方式参数。

仪器参数窗口设定方式参数：

流动相流速（pumpaflow）：

1ml/min

测按时刻（time）：

大于溶剂峰出峰时刻2-3min

柱温（oventemperature）：

40℃（与检测器温度相同）

选中Advanced窗口，pump，pressure：

max：

8mPa（参照柱子说明书，两根柱子串联那么相加）

点击Download按钮，显现对话框选择是，将参数下载到仪器。

“InstrumentParametersView”中“Advanced”为各设备的运行参数，参考相关说明书制定。

2.1.5.输液泵排气：

逆时针拧开LC-20AD排液阀，按purge按钮，3min后自动终止，顺时针拧紧排气阀。

排液阀拧开不要超过180度，不然反而容易在purge时引入气泡。

2.1.6.进样器冲洗：

按自动进样器上purge按钮，25min后自动终止；

自动进样器清洗液利用与流动相相同溶剂，可是去除添加的盐和酸等物质。

2.1.7.平稳GPC柱：

待终止后，按（InstrumentOn/Off）使仪器依照方式参数开始运转，一样60min左右基线能够走平。

能够与步同时进行。

2.1.8.示差检测器平稳

2.1.8.1.按Rflowon/off键冲洗参比池。

2.1.8.2.20min后，按Rflowon/off键停止冲洗，反复点击3-4次以排除池内气泡。

2.1.8.3.调零，等基线平稳后检查balance值，若是大于50，就进行光路平稳，若是小于50，没必要进行。

2.1.8.4.在仪器监视窗口查看检测器能量应处于6000和9000之间，不然在面板上调剂电压使之座落在该范围内。

能够在步流动相完全置换色谱柱中溶液后开始进行。

2.1.9.待基线大体稳固，按ZerosDetectorA键调零。

2.2.分析操作进程

2.2.1.放入样品瓶，记录放置孔号。

样品架应推倒底，瓶垫应该白色朝上。

2.2.2.编辑批处置表

2.2.2.1.右边助手烂点击“Batchprocessing”

2.2.2.2.New；

2.2.2.3.输入第一个样品进样器孔号（Vial#），右键filldetail；

2.2.2.4.跳出窗口中依次填入行数（由第1行到第6行）、第一个样品孔号

（2）与重复次数（1次）；

点击“OK”；

2.2.2.5.依次输入samplename（样品名）、sampleID（样品编号）；

2.2.2.6.methodfile列中输入方式文件（*.lcm文件），左键选定列，右键单击，选择filldown向下填充；

2.2.2.7.确信数据文件保留地址及名称；

2.2.2.8.输入进样体积：

50μl-100μl（标样浓度高则进样量少，低那么进样量多；

所有的标准品和代测样品应该采纳相同的进样体积）；

2.2.2.9.保留批处置文件。

2.2.3.运行批处置表。

点击Batchstart按钮，开始进样。

测试进程中可按助手栏中“Pause”暂停，插入样品后保留批处置表，按restart；

也可按“Stop”停止，对话框弹出选择“停止这一针分析”和“停止那个样品表的分析”。

手动进样器点击singlestart进行单次进样。

2.3.分析完冲洗及关机进程

2.3.1.第二天将会再次利用

2.3.1.1.点击仪器操纵栏图标，停止温控。

2.3.1.2.使流动相以min流速流入填充柱，直至柱温冷却至室温；

2.3.1.3.点击“intrumenton/off”

2.3.1.4.依次关闭程序、电脑和仪器。

2.3.2.仪器长时刻不用

2.3.2.1.点击仪器操纵栏图标，停止温控。

2.3.2.2.换上保留溶剂，以min流速流入填充柱，时刻为3-4倍方式时刻，直至柱温冷却至室温；

2.3.2.3.点击“intrumenton/off”

2.3.2.4.将填充柱从仪器上拆下，两头用堵头堵住，放置在包装盒中。

2.3.2.5.依次关闭程序、电脑和仪器。

柱子的利用和保藏应该依照柱子利用说明书来操作。

改换溶剂时注意缓冲盐不要析出和溶剂之间的互溶性。

3.分子量计算进程

以sample目录下的演示文件为例介绍分子量校正曲线制作及操作进程。

3.1.校正曲线制作

第一双击桌面LCsolution图标，单击GPCPostrun，打开GPCPostrunAnalysis窗口。

所有的操作均在该窗口中进行。

1．双击数据资源治理器窗口GPC_Data-001文件，打开GPC标准品数据文件。

（001,002,003,004均为分子量标准品数据文件，每一个标准品数据文件中含有两个不同分子量的标准品，因此有两个峰。

005为未知品数据文件）

2．单击工具栏DataAnalysisParameters图标

显现DataAnalysisParameters窗口，利用如下图的积分参数。

单击DataAnalysisParameters窗口中的Program图标。

设定积分时刻程序，确保只有标准品的峰被积分出来。

通常将溶剂峰开始时刻20min输入Time列，在Command列当选择IntegrationOff，如此溶剂峰就不被积分。

设好后单击OK按钮。

单击DataAnalysisParameters窗口的Advanced按钮。

设定为5000，单击OK按钮。

单击确信。

3．单击助手栏ApplytoMethod按钮。

给方式文件取个名字GPC_test，单击保留按钮。

显现SelectMethodParameters窗口，直接单击OK按钮。

单击如下图的按钮，关闭GPC_Data-001数据文件。

提示是不是保留数据文件，选择是。

4．单击数据资源治理器窗口Method标签，显示方式文件。

双击适才保留的GPC_test方式文件，显现方式文件编辑窗口。

5．窗口中显示了以前的分子量校准曲线信息，先将以前的信息清除掉。

（若是没有以前的信息，跳过这一步）单击校准表查看窗口Edit按钮，切换到编辑模式。

选中所有列，鼠标右键单击，选择DeleteRow，删除所有行。

单击View按钮，切换到查看模式。

显现对话框，直接单击确信。

如此就将以前的信息清除掉了。

6．单击工具栏DataAnalysisParameters图标。

显现数据分析参数编辑窗口，选择Curve类型为三次方曲线。

单击GPCCalculation标签。

采纳窄散布校正法时，在上图QFactor一栏输入RQF值（Q因子比）。

采纳普适校正法时，在上图Viscosity栏中输入标样的α和K值。

并点击CalibrationCurve标签，选中Mark-Houwink，点击settings，输入样品的α和K值。

将GPCCalculation选项打勾。

显现窗口，直接单击确信。

7．单击ChromatogramView窗口的Multiview标签，切换到显示多色谱图界面。

单击DataExplorerer窗口的Data标签，显示所有的数据文件。

选中001-004这四个数据文件。

将选中的四个数据文件拖到MultiView窗口中，同时显示四个色谱图的八个峰。

8．单击校准表查看窗口的Edit按钮，切换到编辑模式。

单击校准表查看窗口右下角的Pickup按钮。

显现GPCMethodEdit窗口，单击Allpeaks按钮选择所有积分出来的峰。

单击New按钮，新建校准表。

校准表中显现所有峰的保留时刻，检查确认是不是正确。

输入各个峰所对应的分子量。

单击View按钮。

CalibrationCurveView显现制作好的校准曲线图谱和方程。

9．单击工具栏Save按钮，保留方式文件。

显现对话框，单击是。

3.2.样品平均分子量计算

1．双击打开未知品数据文件GPC_Data-005。

单击Method标签。

将适才保留的GPC_test方式拖到右边的色谱图窗口中，加载方式参数。

显现选择方式参数对话框，直接单击OK。

2．单击工具栏MolecularWeightDistribution按钮。

查看分子量计算结果。

3．单击助手栏DataReport按钮查看数据文件中的报告。

显示包括在数据文件中的报告。

单击File菜单，打开报告格式文件，能够修改报告格式。

选择CalculationResults目录。

（该目录中寄存的都是针对单个GPC数据文件的报告模板）

选择如下图的报告格式文件。

（共有四种不同格式的报告格式文件可供选择）

单击助手栏Preview按钮。

在打印前预览报告。

单击打印按钮，就能够够打印出报告。