干旱胁迫对小麦幼苗的影响Word下载.doc

干旱胁迫对小麦幼苗的影响Word下载.doc

《干旱胁迫对小麦幼苗的影响Word下载.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《干旱胁迫对小麦幼苗的影响Word下载.doc（9页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

1.21玉米种子发芽率的测定

各取50粒吸胀的玉米种子→沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半粒），进行下列实验：

其中50个半粒进行TTC染色（30℃水浴20min），另50个半粒进行曙红染色（室温染色10min）洗净后观察。

根据两种方法的染色情况，分别计算发芽率。

1.22小麦幼苗脯氨酸含量的测定

分别取0.1g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3ml3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2ml3%SSA洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积。

测定：

上清液各2ml→分别加入2ml冰乙酸和2ml茚三酮试剂→煮沸15min→冷却后→5000rpm离心10min（若没沉淀可省略次步骤）→分别测定A520,

将测得的结果用公式

Procontent=（umol.g-1FW）

计算出正常和干旱生长小麦的胚芽鞘的脯氨酸含量。

1.23小麦幼苗MDA含量的测定

分别取0.1g实验组和对照组→加入3ml10％TCA（和少许石英砂→充分研磨→用2ml10％TCA洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积。

分别取上清液各2ml→加入0.6%TBA（用10%TCA配制）2ml→煮沸15min→冷却后→5000rpm离心10min→分别测定OD450和OD532

将测得的D450和OD532的数据带入下列公式

OD450=C1x85.4OD532=C1x7.4＋C2X155000

求解方程得：

C1/（mmol/L）=11.71OD450

C2/（umol/L）=6.45OD532—0.56OD450

计算出C1可溶性糖的浓度，C2为MDA的浓度。

1.24小麦幼苗H2O2测定

分别取0.51g实验组和对照组→加入3ml0.3%TCA和少许石英砂→充分研磨→用2ml0.3%TCA洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积。

分别取上清液各4ml→加入0.1%Ti（SO4）2[用20%（v/v）H2SO4配制]1ml→摇匀→5000rpm离心10min→OD410

将测得的OD410值带入下列公式

H2O2content=（umol.g-1FW）

计算出H2O2酶的含量。

1.25小麦幼苗抗氧化酶的测定

1、分别取0.1g实验材料→加入少许石英砂和3ml提取液（50mmol/LPBS,pH6.0,内含0.1mmol/LEDTA,1%PVP）→充分研磨　→转入离心管中→用2ml提取液洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积→用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。

2、POD测定：

取POD反应混合液（10　mmol/L愈创木酚，5mmol/LH2O2,用PBS溶解）2.95ml，加入酶液50ul（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，每过1min记录一次在A470的读数值。

3、PPO测定：

取PPO反应混合液（20mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.9ml，加入酶液0.1ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，每过30s记录一次在A410的读数值。

以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U），则：

将测得的A470和A410数据带入公式

PODactivities=（umol.g-1FW）的

PPOactivies=（U.g-1FW）

计算出PPO和POD的值

1.26小麦幼苗GSH的测定

分别取0.1g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3ml5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2ml5%TCA洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积。

上清液各1ml（空白用5%TCA代替）→分别加入2ml0.1MPBS（pH=7.7）→1ml2mMDTNB→25℃5min→测定A412

将测得的A412值带入公式

GSHcontent=（umol.g-1FW）

将GSH的值计算出来

1.27小麦幼苗ASA的测定

•ASA的提取：

分别取0.2g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3ml5%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2ml5%TCA洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积。

•测定：

上清液各0.8ml（空白用5%TCA代替）→分别加入0.8ml0.15MNaH2PO4（pH=7.4）和蒸馏水→摇匀→分别加入0.8ml5%TCA、44%磷酸和4%联吡啶→摇匀→加入3%FeCl30.8ml→37℃15min→测定A525

•ASAcontent=（umol.g-1FW）

2、结果与分析

发芽率的测定：

TTC染色法：

44个具有活力。

曙红染色法：

分别计算两种方法的发芽率：

TTC法44/50×

100%=88%；

曙红染色法44/50×

100%=88%。

用两种方法测得的种子发芽率是一样的，都为88%,说明这一批种子的生命活力较高。

脯氨酸含量测定：

组别

A520

V总

V显

V用

Procontent

干旱组

1.842

4.8ml

6ml

2ml

0.08187mol.g-1FW

对照组

0.018

5.3ml

0.00088mol.g-1FW

计算结果为干旱组脯氨酸含量为0.08187mol.g-1FW，对照组脯氨酸含量为0.00088mol.g-1FW.实验组与对照组比较，可以看出实验组的脯氨酸含量是对照组的93倍。

MDA含量的测定：

数据

OD532

OD450

结果

C1

C2

0.303

1.367

16.007mmol/L

1.189mol/L

0.029

0.038

0.445mmol/L

0.166mol/L

由上表可知干旱组的MDA的浓度为1.189mol/L，对照组的MDA的浓度为0.166mol/L，干旱组为对照组的7倍左右，说明当遇到干旱胁迫时小麦幼苗中MDA含量比正常生长的含量高。

H2O2测定：

组别

OD410

H2O2content

3.8ml

3.8ml

4ml

0.980

0.14mol.g-1FW

4.7ml

4ml

4.2ml

0.202

0.0356mol.g-1FW

上述计算结果得到干旱组中H2O2为0.14umol.g-1FW，对照组中H2O2为0.0356umol.g-1FW，干旱组为对照组的4倍左右，说明当遇到干旱胁迫时小麦幼苗中H2O2含量迅速成倍上升。

抗氧化酶的测定

POD

4.6ml

0.05ml

3ml

PPO

0.1ml

POD在不同时间的A470值：

时间和结果

组别

1min

2min

3min

4min

PODactivities（t=4min）

1.22

1.61

1.86

2.565

0.0456

umol.g-1FWmin-1

1.03

1.528

1.789

2.202

0.0342

PPO在不同时间的A410值：

时间和结果

0.5min

1min

1.5min

2min

PPOactivities（t=2min）

0.041

0.082

0.118

0.147

3250.7U.g-1FW

0.042

0.109

0.132

2790.7U.g-1FW

由上表可知当小麦幼苗遭受干旱胁迫时，抗氧化酶（POD,PPO）含量有明显上升。

GSH的测定

A412

GSHcontent

4.3ml

1ml

0.207

0.0026umol.g-1FW

4.3ml

0.024

0.00031umol.g-1FW

由上述计算结果可知受到干旱胁迫的小麦幼苗的胚芽鞘中GSH含量是正常生长的8倍左右，表明遭受干旱胁迫时小麦幼苗中GSH含量迅速上升。

ASA的测定

W

A525

ASAcontent

4.4ml

5.6ml

0.8ml

0.2g

0.106

0.00098umol.g-1FW

5.2ml

0.00026umol.g-1FW

由上述计算结果可知受到干旱胁迫的小麦幼苗中ASA的含量是正常生长的4

倍左右，表明遭受干旱胁迫时小麦幼苗中ASA含量迅速上升。

3、讨论

测定玉米发芽率时所用的两种方法：

TTC染色法和曙红染色法测得发芽率均为88%。

TTC染色法的染色部位是胚，染色较深，能清晰判别胚的死活，曙红染色法的染色部位是胚乳，着色较浅。

实验中玉米用两种方法