牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用.docx

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牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用

牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用

（作者:

___________单位:

___________邮编:

___________）

作者：

周添浓，刘丹丹，唐立海，

王艳，刘亮锋，赖平，肖细姬，叶木荣

【摘要】　　目的研究牛大力对小鼠急性肝损伤的保护作用。

方法采用四氯化碳腹腔注射、56度红星二锅头酒灌胃诱导小鼠急性肝损伤模型,观察牛大力对小鼠血清AST，ALT活性及肝组织匀浆MDA含量、肝脏指数、胸腺指数的影响。

结果牛大力能降低模型小鼠血清中AST，ALT活性，减少肝匀浆MDA含量，降低肝脏指数，提高胸腺指数。

结论牛大力有保肝的作用。

【关键词】牛大力急性肝损伤四氯化碳

　　Abstract：

ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofRadixmillettiaeSpeciosaeonacuteliverinjuryinmice.MethodsThemodelofacutehepaticdamagewereinducedbyipCCl4andig56°starErguotouwine.TheAST,ASTlevelsinserumandMDAcontentinliverhomogenatewereobserved.ResultsRadixMillettiaeSpeciosaecoulddecreasetheASTandALTactivitiesinserum,MDAcontentinliverhomogenateandtheliverindex，increasethethymusglandindex.ConclusionRadixmillettiaeSpeciosaehasprotectiveactiononacuteliverinjuryinmice.

　　Keywords：

RadixmillettiaeSpeciosae；Acuteliverinjury；CCl4

　　牛大力RadixMillettiaeSpeciosae，考证于《陆川本草》，又名猪脚笠、山莲藕，为蝶形花科植物美丽崖豆藤MilletiaspeciosaChamp的干燥根。

性味甘，平，功能补脾益气、强筋活络、清热解毒润肺。

民间常用于治疗慢性支气管炎，慢性肝炎、咳嗽等。

本文通过观察牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保肝作用，为该药临床用药提供依据。

现报道如下。

　　1材料与仪器

　　1.1受试动物SPF级KM小鼠,由广州中医药大学实验动物中心提供。

合格证号：

SCXK粤2003-0001。

　　1.2受试药物牛大力，购于广州致信中药饮片有限公司，批号070701。

药物制备：

取牛大力干燥药材，用10倍体积的蒸馏水浸泡1h，加热煮沸2h，趁热过滤；残渣再加6倍体积的蒸馏水，加热煮沸1h，合并两次滤液，浓缩至1g生药·ml-1浓度备用，用时加蒸馏水稀释至所需浓度。

　　1.3药品与试剂四氯化碳（CCl4），广东光华化学厂有限公司，批号20041030；联苯双酯滴丸，北京协和药厂产品，批号06040204；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）试剂盒，丙二醛（MDA）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号：

20080419，20080419，20080417。

　　1.4仪器UNICO7200光栅分光光度计，尤尼柯上海仪器有限公司；WPABiowaveⅡ紫外分光光度计；LDZ5型离心机，北京医用离心机厂；AnkeTGL-16G高速离心机，上海安亭科学仪器厂；隔水式电热恒温水浴锅，上海跃进医疗器械厂。

2方法

　　2.1牛大力对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用

　　2.1.1动物分组及给药取KM小鼠84只，18～22g，适应性喂养3d后，随机分为6组，分别是空白对照组，模型对照组，阳性对照组，牛大力高（20g·kg-1·d-1）、中（10g·kg-1·d-1）、低剂量（5g·kg-1·d-1）给药组，每组14只。

阳性对照组给予联苯双酯，给药剂量为45mg·kg-1·d-1，空白对照组和模型对照组给予等容积蒸馏水，灌胃给药1次/d，连续12d。

　　2.1.2CCl4诱导小鼠急性肝损伤动物模型的建立［1］各组小鼠于末次给药后1h，除空白对照组腹腔注射等量生理盐水外，其余各组各鼠均腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液10ml·kg-1。

小鼠腹腔注射CCl4后，禁食不禁水16h，眼眶静脉取血，3000r·min-1离心10min分离血清,取血清测定相关指标，同时处死小鼠，取肝脏、脾脏、胸腺并称其体重；取部分肝组织作相关检测。

　　2.1.3检测项目

　　血清按试剂盒所述方法测谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）；按肝脏重量/体重（g·100g-1），脾脏重量/体重（mg·g-1），胸腺重量/体重（mg·g-1），分别计算肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数；并切取0.3g肝脏加3ml生理盐水［肝脏：

生理盐水的比例为1:

10（M/V）］制成100g/L匀浆，按试剂盒说明操作，采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。

　　2.2牛大力对小鼠急性酒精中毒肝损伤的保护作用

　　2.2.1动物分组及给药

　　取KM小鼠72只，18～22g，雌雄各半，随机分为6组，分别是空白对照组，模型对照组，阳性对照组，牛大力高（20g·kg-1·d-1）、中（10g·kg-1·d-1）、低剂量（5g·kg-1·d-1）给药组，每组12只。

阳性对照组给予联苯双酯，给药剂量为60mg·kg-1·d-1，空白对照组和模型对照组给予等容积蒸馏水，灌胃给药1次/d，连续12d。

　　2.2.2小鼠急性酒精中毒肝损伤动物模型的建立［2］

　　各组小鼠于末次给药后1h，除空白对照组腹腔注射等量生理盐水外，均以15ml·kg-1体重56度二锅头酒灌胃［4，5］,6h后,再次给药，12h后眼眶静脉采血，3000r·min-1离心10min分离血清，测定生化指标；同时处死小鼠，取肝脏、脾脏、胸腺并称其体重；取部分肝组织作相关检测。

　　2.2.3检测项目

　　血清按试剂盒所述方法测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）；按照肝脏重量/体重（g·100g-1），脾脏重量/体重（mg·g-1），胸腺重量/体重（mg·g-1），分别计算肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数；并切取0.3g肝脏加3ml生理盐水［肝脏∶生理盐水的比例为1∶10m/V］制成100g/L匀浆，按试剂盒说明操作，采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。

　　2.2.4统计学方法采用SPSS11．5统计软件进行分析。

用单因素方差分析进行统计学显著性分析。

组间差异显著性采用单因素方差分析中的LSD方法进行多重比较检验。

　　3结果

　　3.1牛大力对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用

　　3.1.1对CCl4所致急性肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响与空白对照组比较,模型对照组小鼠血清AST,ALT水平明显升高,有显著的统计学差异（P0.01），说明CCl4致急性肝损伤模型建立成功；阳性对照药联苯双酯显著降低AST,ALT水平（P0.01），牛大力各剂量组均能降低血清中AST,ALT的水平；与模型对照组比较，牛大力高剂量能明显降低AST水平（P0.01），效果优于中、低剂量；牛大力高、中、低剂量均明显降低ALT水平（P0.01或P0.05）。

提示牛大力水提液有保肝作用，能对抗CCl4致小鼠急性肝损伤导致的AST,ALT水平的升高。

结果见表1。

表1牛大力对CCl4所致急性肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响（略）

　　3.1.2牛大力对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝组织MDA含量的影响

　　与空白对照组比较，模型对照组小鼠肝组织匀浆的MDA水平明显升高，有显著的统计学差异（P0.01），表明造模成功；与模型对照组比较，连续给药12d后，45mg·kg-1剂量的阳性药联苯双酯能显著降低小鼠的MDA水平（P0.01）；牛大力高、中、低剂量组均能明显降低MDA水平（P0.01或P0.05），低剂量组效果较高、中剂量好。

提示牛大力水提液有抗肝细胞脂质过氧化的作用，能对抗CCl4所致的急性肝损伤。

结果见表2。

表2牛大力对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝组织MDA含量的影响（略）

　　3.1.3牛大力对CCl4所致急性肝损伤小鼠脏器指数的影响模型组小鼠肝脏指数明显高于正常对照组（P0.01）、脾脏指数高于正常对照组，但无统计学差异（P0.05），胸腺指数低于正常组（P0.05），说明CCl4会使小鼠肝脏和脾脏肿大，胸腺萎缩，使肝脏、脾脏指数增大，胸腺指数减少；与模型组比较，牛大力各剂量组均能减小肝脏、脾脏指数，增加胸腺指数；其中低剂量明显减小肝脏指数（P0.05），效果明显于高、中剂量；中剂量明显增大胸腺指数，有显著差异性（P0.05）；但牛大力高、中，低剂量对脾脏指数的影响效果均不明显，无统计学差异（P0.05）。

说明牛大力水提液能抑制CCl4所致的肝脏、脾脏肿大和胸腺萎缩。

结果见表3。

表3牛大力对CCl4所致急性肝损伤小鼠脏器指数的影响（略）

　　3.2牛大力对小鼠急性酒精中毒肝损伤的保护作用

　　3.2.1牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响与空白对照组比较,模型组小鼠血清ALT,AST水平明显升高（P0.01）,说明急性酒精中毒肝损伤模型建立成功；与模型对照组比较，阳性药联苯双酯显著降低血清中AST，ALT的水平；牛大力各剂量均能降低血清中AST，ALT的水平,高、中剂量可明显降低AST的水平（P0.01），低剂量效果不明显（P0.05）；牛大力高剂量可明显降低ALT的水平（P0.01），效果明显于中、低剂量。

提示牛大力水提液有保肝作用，能对抗急性酒精中毒肝损伤导致的ALT,AST水平的升高。

结果见表4。

表4牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响（略）

　　3.2.2牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠肝组织MDA含量的影响与空白对照组比较，模型对照组小鼠肝组织匀浆的MDA水平明显升高（P0.01），表明造模建立成功；与模型对照组比较，连续给药12d后，60mg·kg-1剂量的阳性药联苯双酯能显著降低小鼠的MDA水平（P0.01）；牛大力高、中、低剂量组均可显著降低肝组织MDA水平。

提示牛大力水提液有抗肝细胞脂质过氧化的作用，能对抗急性酒精中毒所致的肝损伤。

结果见表5。

表5牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠肝组织MDA含量的影响（略）

　　3.2.3牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠脏器指数的影响模型组小鼠肝脏、脾脏指数高于正常对照组，肝脏指数增大明显（P0.01），胸腺指数低于正常对照组，有统计学差异（P0.05），说明酒精中毒能使小鼠肝脏和脾脏肿大，胸腺萎缩；与模型对照组比较，牛大力高、中、低剂量组均能抑制肝脏肿大，胸腺萎缩，但对脾脏影响不明显；牛大力高剂量组效果明显，肝脏指数减小，胸腺指数增大，有显著差异性（P0.01或P0.05）；中、低剂量组效果不明显，无显著差异性（P0.05）。

结果见表6。

表6牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠脏器指数的影响（略）

　　4讨论

　　肝脏在各类物质的代谢中起重要作用，亦是容易生成自由基及过氧化脂质的场所［3］。

许多研究显示,肝组织细胞的损伤与自由基毒性反应关系极为密切。

　　CCl4引起肝损伤模型是传统的肝毒模型,CCl4对肝损伤的毒性作用是通过脂质过氧化作用进行的,CCl4在肝微粒体细胞色素P450酶激活下产生活性自由基CCl3+,CCl3+可进一步与氧反应,形成具有更强反应活性自由基CCl3O,这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合,也可与肝细胞膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化,损伤肝细胞膜的结构和功能,使膜通透性升高,导致细胞肿胀坏死［4，5］；过多的自由基CCl3O一方面导致肝细胞内SOD过度消耗，MDA大量产生，致使SOD活性下降,MDA是脂质过氧化代谢产物大量增加［6］，另一方面,自由基的积累更加剧了肝细胞的损伤,肝细胞破损后释放ALT，AST［4］,因而AST，ALT，SOD和MDA水平的变化成为最常用的判定药物护肝作用及药物抗氧化作用的重要指标。

　　酒的主要成分是乙醇，体内少量乙醇可在ADH和ALDH作用下代谢生成CO2和H2O排出体外。

但如果一次过量的饮酒，使乙醇在体内不能及时氧化代谢，乙醇则可通过酶或非酶系统产生氧自由基，引起脂质过氧化，并形成脂质过氧化物［7］。

有研究表明，给大鼠服用过量乙醇会导致肝脏损伤，其损伤机制之一就是通过激活氧分子，使肝组织发生脂质过氧化。

乙醇的脂质过氧化作用可直接损害肝细胞膜，导致肝脏出现一系列功能紊乱,表现在脂质过氧化产物MDA大量的增加，SOD活力的降低，肝细胞破损后大量释放ALT，AST。

　　实验结果显示，CCl4、酒精可引起小鼠血清中ALT，AST明显升高,说明本实验所建立的急性肝损伤模型成功；CCl4、急性酒精中毒肝损伤模型中，肝细胞浆脂质过氧化产物MDA明显升高,表明肝细胞内脂质过氧化是CCl4、酒精所致急性肝损伤模型的重要终末肝损伤机制,牛大力水提液各剂量组能使血清中ALT，AST活性向正常水平恢复；能降低肝细胞浆内脂质过氧化物MDA的含量,可见抗肝细胞内脂质过氧化是其抗急性肝损伤的重要机制之一。

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