双水杨醛乙二胺西佛碱铁配合物与牛血清白蛋白相互作用模式的研究大学论文.docx

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双水杨醛乙二胺西佛碱铁配合物与牛血清白蛋白相互作用模式的研究大学论文

闽南师范大学

毕业论文

双水杨醛乙二胺西佛碱铁配合物与牛血清白蛋白相互作用模式的研究

Researchtheinteractationmodebetweenferrous-BISsalicylideneethylenediamineandBSA

姓名：

学号：

系别：

化学与环境科学系

专业：

应用化学

年级：

10级

指导老师：

2014年1月10日

摘要

双水杨醛乙二胺西佛碱和铁（Ⅱ）-双水杨醛乙二胺西佛碱配合物（配合物1）的合成，并对配合物1进行红外表征。

用荧光光谱及紫外吸收光谱方法，研究该配合物1与牛白蛋白（BSA）的相互作用。

研究表明配合物1对BSA猝灭作用属于静态猝灭，根据Stern-Volmer方程,计算了配合物1与BSA间的结合常数Kq，用Van.tHoff方程计算了热力学参数；乙醇和EDTA为探针以及透析法推测了配合物1-BSA复合物透析过程中生成新的物质。

关键词：

双水杨醛乙二胺西佛碱；亚铁离子；荧光光谱；牛血清白蛋白；EDTA

Abstract

TheSynthesisofBISsalicylideneethylenediamineSchiffbaseandFe（Ⅱ）-BISsalicylideneethylenediamineSchiffbase.AndthestructuresofFe（Ⅱ）-BISsalicylideneethylenediamineSchiffbasewereconfirmedbyinfrared.WereseachedtheinteractationwiththecomplexesandBSAbyUVandmolecularfluorescenceanalysis.ThestudyshowsthatthequenchingeffectonBSAbelongstostaticquenching.WecalculatedthebindingconstantKqofthecomplexesandBSAaccordingtotheStern-VolmerequationandcalculatethethermodynamicparameterswiththeVan.THoffequation.WeusedEthanolandEDTAasprobetospeculatethenewsubstancesfromthedialysisprocess.

Keywords:

BISsalicylideneethylenediamineSchiffBase;Fe（Ⅱ）;fluorescencespectrum;BSA;EDTA

目录

中文摘要I

英文摘要I

前言1

1实验部分1

1.1仪器与试剂1

1.2亚铁－双水杨醛乙二胺西佛碱配合物（配合物1）的合成1

1.3配合物1与牛血清白蛋白（BSA）相互作用荧光测定2

1.3.1配合物1与BSA相互作用常温荧光测定2

1.3.2配合物1与BSA相互作用变温荧光测定2

1.3.3配合物1与BSA相互作用同步荧光测定2

1.4配合物1与BSA相互作用紫外测定2

1.5EDTA对配合物1-BSA复合物的相互作用的影响测定2

1.5.1EDTA对配合物1-BSA复合物的作用紫外测定2

1.5.2双水杨醛乙二胺西佛碱与BSA相互作用的荧光测定3

1.5.3EDTA对配合物1-BSA复合物的作用荧光测定3

1.5.4Fe（edta）配合物对双水杨醛乙二胺西佛碱-BSA复合物的作用荧光测定3

1.6乙醇对配合物1-BSA复合物的作用荧光测定3

1.7采用透析法对配合物1-BSA复合物的相互作用结果的测定3

2结果与讨论4

2.1亚铁－双水杨醛乙二胺西佛碱配合物红外光谱表征4

2.2配合物1与BSA相互作用的荧光分析4

2.2.1配合物1与BSA相互作用常温荧光分析4

2.2.2配合物1与BSA相互作用荧光猝灭方式分析5

2.2.3用静态猝灭法对配合物1与BSA的相互作用进行分析6

2.2.4配合物1与BSA之间的作用力类型分析8

2.2.5配合物1与BSA相互作用同步荧光分析8

2.3配合物1与BSA相互作用紫外表征9

2.4EDTA对配合物1-BSA复合物的相互作用的影响的分析10

2.4.1EDTA对配合物1-BSA复合物的相互作用的影响的荧光分析10

2.4.2EDTA对配合物1-BSA复合物的相互作用的影响的紫外分析10

2.5乙醇对配合物1-BSA复合物的相互作用的影响的荧光分析12

2.6配合物1与BSA相互作用模式图12

2.7采用透析法对配合物1-BSA复合物的相互作用结果的分析13

2.7.1配合物1与BSA作用透析后产物红外光谱表征13

2.7.2透析法对配合物1-BSA复合物的相互作用结果的分析14

3结论15

参考文献16

致谢18

前言蛋白质是生物体的重要组成部分，是生命活动的物质基础。

血清白蛋白常作为一种模型蛋白质用于生物医用材料研究领域[1,2]，可与许多内源及外源性化合物结合起到存储与转运作用[3,4]，即在体内起着酸度保持、金属离子、氨基酸、脂肪酸、药物等的贮存、运载等重要的作用[5]，是基础科学研究中最常用的药物靶蛋白之一[6]。

从不同角度研究以白蛋白为代表的蛋白质与具有生物活性小分子之间的相互作用，已成为一个非常活跃的研究课题[7]。

牛血清白蛋白（BSA）肽链含有582个氨基酸残基，在λex=280nm时，BSA的内源荧光主要来源于19个酪氨酸和2个色氨酸残基。

酪氨酸的荧光主要通过能量转移给色氨酸而发出，2个色氨酸分别位于134位和212位，其发射峰特征、能量转移及荧光寿命等指标可以对蛋白质分子中荧光生色基团的结构及其所处的微环境提供有效的信息[8,9]。

本文利用荧光光谱法和紫外吸收光谱法研究了铁（Ⅱ）—双水杨醛乙二胺西佛碱配合物（配合物1）与牛血清白蛋白（BSA）相互作用的机理；利用透析法以及乙醇、EDTA为探针推测配合物与BSA相互作用模式。

1实验部分

1.1仪器和试剂

试剂：

牛白蛋白（BSA）（生化试剂）国药集团化学试剂有限公司

水杨醛（AR）国药集团化学试剂有限公司

乙二胺（AR）广东汕头市西陇化工厂

六水合硫酸亚铁铵（AR）广东汕头市西陇化工厂

EDTA（AR）国药集团化学试剂有限公司

乙醇（AR）西陇化工股份有限公司

仪器：

LS-55荧光分光光度计（美国PE公司）

UV-2550紫外分光光度计（Shimadzu公司）

1.2亚铁-双水杨醛乙二胺西佛碱配合物

（1）的合成

取乙二胺5.6mL和17mL水杨醛溶解于50mL甲醇中，在冷水浴中搅拌30min，静置15min，减压抽滤，用乙醇洗涤，在常温下干燥6h，得亮黄色固体粉末，再取2.5g固体用40mL乙醇重结晶、抽滤，在常温下干燥4h，得黄色晶体即为双水杨醛乙二胺西佛碱。

取双水杨醛乙二胺西佛碱1.000g溶解于40mL甲醇中，再加入硫酸亚铁铵1.000g，回流1h，冷却，过滤，干燥，得淡粉色固体即为Fe（Ⅱ）—双水杨醛乙二胺西佛碱配合物（配合物1）。

1.3配合物1与BSA相互作用荧光测定

1.3.1配合物1与BSA相互作用常温荧光测定

称取0.048g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.8）配制溶度为1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液，并加入不同体积的配合物1溶液，定容。

以λ=292nm为激发波长，记录300~450nm范围的荧光光谱。

1.3.2配合物1与BSA相互作用变温荧光测定

称取0.048g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.8）配制溶度为1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液，并加入不同体积的配合物1溶液，定容。

将该系列溶液分别于25,30,35和40℃下，以λ=290nm为激发波长，记录300~450nm范围内的荧光光谱。

1.3.3配合物1与BSA相互作用同步荧光测定

称取0.049g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=7.0）配制溶度为1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液，并加入不同体积的配合物1溶液，定容。

以λ=292nm为激发波长，测定△λ=15nm和△λ=60nm时的同步荧光光谱。

1.4配合物1与BSA相互作用紫外测定

称取0.024g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.9）配制溶度为1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的配合物1溶液，并加入不同体积的BSA溶液，定容。

以配合物1溶液为参比液，记录200~500nm范围内的紫外吸收光谱。

1.5EDTA对配合物1-BSA复合物的相互作用的影响测定

1.5.1EDTA对配合物1-BSA复合物的作用紫外测定

称取0.048g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，称取0.039gEDTA用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.8）溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.8）配制溶度为1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液和3.00mL配合物1溶液，再加入不同体积的EDTA溶液，定容。

以配合物1与BSA混合液为参比液，记录200~500nm范围内的紫外吸收光谱。

1.5.2双水杨醛乙二胺西佛碱与BSA作用的荧光测定

称取0.032g双水杨醛乙二胺西佛碱溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.8）配制溶度为1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液，并加入不同体积的双水杨醛乙二胺西佛碱溶液，定容。

以λ=280nm为激发波长，记录300~450nm范围的荧光光谱。

1.5.3EDTA对配合物1-BSA复合物的相互作用的影响荧光测定

称取0.048g配合物1溶解并定容于100mL容量瓶中，称取0.039gEDTA用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.8）溶解并定容于100mL容量瓶中，用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.8）配制溶度为1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液和3.00mL配合物1溶液，再加入不同体积的EDTA溶液，定容。

以λ=280nm为激发波长，记录300~450nm范围的荧光光谱。

1.5.4Fe（edta）配合物对双水杨醛乙二胺西佛碱-BSA复合物的作用荧光测定

称取0.032g双水杨醛乙二胺西佛碱溶解并定容于100mL容量瓶中，称取0.016g六水合硫酸亚铁铵和0.030gEDTA配制摩尔比为2:

1的Fe（edta）配合物溶液，用HAc-NaAc缓冲溶液（pH=6.8）配制溶度为1×10-4mol/L的BSA溶液，然后于一系列10.00mL的容量瓶中加入1.00mL的BSA溶液和5.00m