微生物标本接种.ppt

微生物标本接种.ppt

《微生物标本接种.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物标本接种.ppt（85页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

a,1,微生物检验标本采集与接种,a,2,内容,血培养尿培养痰培养脓液脑脊液前列腺STD厌氧培养,a,3,血培养,增菌培养商品血培养瓶成人瓶、儿童瓶、中和抗生素瓶无菌操作采集血标本接种到培养瓶后，轻轻混匀以防血液凝固。

立即送检，切勿冷藏。

采血量成人采血量是1020ml，儿童15ml。

血液和肉汤之比为1:

51:

10。

35培养5-7天,a,4,a,5,a,6,体积%阳性血培养结果vs.采集的套数,%,99%,89%,80%,真阳性,20ml/套,MayoClinicStudy,a,7,用于培养的血液体积,a,8,采集血培养时间的重要性,9%+,14%+,9%+,11%+,发热高峰前12-2.5小时,发热高峰前2.5-0.5小时,发热高峰期间,发热高峰后1-12小时,166病人,105病人,199病人,258病人,Thomsonetal.1991.ASCP.MayoClinicStudy,a,9,立即获得足够血液并且开始抗生素治疗,从不同部位获得2-3套血培养（40-60ml血液）最好在5分钟内采集,#1,#2,a,10,确定检测阳性的培养时间,阳性报警时间,a,11,随着时间推移败血症病原菌的变迁,%住院患者血培养阳性结果,#1pathogen,FromUW,MadisonandG.WashingtonUniv.,St.Louis,a,12,血培养存在的主要问题,如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并在瓶中生长这些细菌（主要为凝固酶阴性葡萄球菌）引起导管相关性败血症（住院患者血培养第一位）医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染和皮肤定植菌“污染”相区分，因此他们用万古霉素治疗患者,a,13,皮肤凝固酶阴性葡萄球菌定植于输液管,a,14,皮肤不是无菌的;定植细菌“污染”血培养,a,15,葡萄球菌在塑料CVC表面生长形成生物膜,a,16,污染细菌,血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下列细菌阳性:

凝固酶阴性葡萄球菌棒状杆菌微球菌丙酸杆菌芽孢杆菌,a,17,血培养污染vs.皮肤消毒,%污染,StudiesfromBaylor,Nashville,&France,a,18,血培养,一旦提示阳性结果，涂片行革兰染色，根据镜检结果决定转种羊血平皿及巧克力平皿上，并分别放置普通培养箱及CO2烛缸内3537孵育培养需氧和兼性厌氧菌；转种布氏血琼脂，厌氧环境培养厌氧菌；转种沙保罗培养基，培养真菌。

将革兰染色结果立即向临床电话初级报告。

待细菌鉴定及药敏结果出来后再向临床发出最终报告。

a,19,血液培养,【特别提醒】厌氧菌从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少，不推荐每个病人常规增加一个厌氧血培养，但如果必要，选用其配套的厌氧培养基来培养厌氧菌。

营养苛刻的细菌（FastidiousBacteria）布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长，并且尽管可以在三天内分离到，但是推荐培养21天，且有必要进行末次接种。

HACEK群细菌嗜泡沫嗜血杆菌（Haemphilusaphrophilus）、放线共生放线杆菌（Actinobacillusactinomycemcomitans）、人心杆菌（Cardiobacteriumhominis）、侵袭埃肯菌（Eikenelluscorrodens）和金氏杆菌（Kingellakingae）与细菌性心内膜炎有关，常规血培养基中可以分离，但培养14天和进行肉汤末次接种会更有效。

a,20,血培养,常规血液培养基不能分离钩端螺旋体。

分枝杆菌（Mycobacteria）使用常规血培养基不能分离。

导管头培养导管头是为了明确细菌来源。

最常用的方法是半定量的方法，方法是用5cm长的导管末端部分在血液琼脂平板上滚动4次。

培养物出现15个以上的菌落，提示有潜在的导管相关性感染。

a,21,导管相关感染的诊断,敏感性和特异性检测管腔内的&外周细菌不需要移走导管可靠性和可重复性易操作快速回报感染的微生物可以分离对患者安全,关键点:

患者必须有菌血症,a,22,检测导管相关感染,移走导管MakiRoll（半定量）超声波降解和稀释（定量）通过管腔抽吸（定量）保留导管管腔刷定量培养（CVC&外周血）达到阳性的时间（CVC&外周血）,a,23,哪部分用于培养,a,24,Maki滚动法,a,25,导管尖阳性培养结果,a,26,苛养菌不要放置常规血培养5天,由如下微生物引起的可疑的败血症或心内膜炎:

霉菌（组织胞浆菌,镰刀菌,等等秕糠马拉癣菌军团菌属巴尔通体新型隐球菌Q-热惠普尔病支原体属其他病原菌,3分离管,咨询ID医生,血清Ag凝集+分离培养,a,27,干预措施可以减少导管相关性感染,手消毒用洗必泰进行皮肤消毒在穿刺过程中完全无菌操作锁骨下静脉穿刺移去不必要的中央静脉插管,血管内导管相关性感染预防指南.MMWRRecomRep2002:

51（RR10）1-29,a,28,尿道感染,每年850万例尿路感染,90%为女性1/2.5个妇女在一生中会得UTI下行性感染：

血流肾脏膀胱（金黄色葡萄球菌，酵母菌，结核分枝杆菌）上行性感染：

尿道膀胱肾盂血流,a,29,AnatomyofUrinaryTract尿路的解剖图,侧面图,膀胱,耻骨,子宫颈,尿道,输卵管,卵巢,子宫,阴道,直肠,肛门,a,30,综合病症,尿道炎或急性尿路综合征膀胱炎-膀胱的炎症肾盂肾炎-肾脏的炎症,Age年龄5102030/60,有症状的无症状的,a,31,尿路感染病原菌,a,32,大肠埃希菌与膀胱上皮细胞相互作用,伞状粘附,膀胱上皮细胞,a,33,尿液运输方法,无需冷藏,a,34,有症状妇女的尿路感染诊断性试验,a,35,尿液革兰染色-革兰阴性杆菌,a,36,传统的尿培养,使用校准过的接种环（0.001or0.01ml）垂直插入装有尿液的无菌容器中在琼脂平板上分区划线：

血平皿，麦康凯平皿或CLED平皿大多数尿路病原菌能在血平皿上生长麦康凯平皿有鉴别功能，为革兰阴性杆菌的选择性培养基,a,37,尿培养的划线方式,第一区=50,000cfu/ml第二区=75,000cfu/ml第三区=100,000cfu/ml,沿中心线向下=50,000cfu/ml长向边缘=100,000cfu/ml,a,38,尿培养的培养基,5%血平皿（美国用羊血，欧洲用马血）伊红美兰平皿（EMB）大肠埃希菌为金属绿麦康凯平皿LFvsNLF胱氨酸-乳糖-低电解质平皿（CLED）显色平皿（BBL公司的CHROMagar，HardyBluEcoliBiplate）CUTI（Oxoid公司）;CPSID2（生物梅里埃公司）;UriSelect（Biorad公司）;Rambach;others,a,39,蛋白胨，酵母提取物，色原物,科玛嘉显色培养基（BBL）,大肠埃希菌,肠球菌,无乳链球菌,腐生葡萄球菌,a,40,同样的接种物在科玛嘉显色培养基（BBL）上生长,大肠埃希菌，肠球菌和变形杆菌在血平皿上生长,CHROMagarOrientation（BBL）,a,41,chromIDCPS-生物梅里埃公司的产品快速鉴定大肠埃希菌，变形杆菌和肠球菌,可分离所有尿道病原菌更好的可操作性更好的鉴定能力更高的可靠性,a,42,尿培养,【操作步骤】1培养皿放置至室温，先充分摇匀尿液2用1l定量接种环或用微量移液器无菌吸取10ul尿液接种于羊血平皿和MAC上，然后用无菌接种环划线涂布，置35，最好在510co2环境下，孵育1824小时3次日观察结果，根据诊断标准进行诊断，阳性结果做细菌鉴定和药敏。

a,43,尿培养,【定量标准】用1l接种环，结果1000cfu/ml；用10l接种环，结果100cfu/ml。

菌计10万cfu/ml，继续鉴定和药敏。

降低标准的情况：

幼儿、儿童或男性的确定的尿路感染，其尿标本定量也可10万cfu/ml；插导管的患者、最近用过抗生素者、大量喝水者、伴发脓尿和有症状者、有尿路阻塞或由于血源性传播而患有肾盂肾炎者，其尿标本定量也可10万cfu/ml；患有尿道综合征的性活跃的年轻女性，其尿标本定量也可100cfu/ml。

a,44,评价尿培养的标准,a,45,尿培养-注意事项,标本留取严格执行无菌操作。

不要将尿液标本接种于增菌肉汤培养基中。

清洁中段尿标本不要进行离心处理。

尿液标本原则上不做厌氧培养。

尿液收集后应立即送检，不能送检者可置48冰箱储藏，储存时间24小时。

患者应在用药前或停用抗生素后至少三天留取尿液，尿液中勿加防腐剂。

a,46,痰培养-操作步骤,取适量痰液化剂放入痰标本盒内混匀放置30分钟，用无菌环挑23环标本，分区划线接种于羊血平皿或沙保培养基上、Mac置35孵育1824小时,巧克力平板5co235孵育1824小时。

观察结果，根据细菌生长情况进行鉴定及药敏。

挑取脓液部分涂片，革兰染色镜检。

判断标本是否合格。

a,47,痰培养-操作步骤,痰标本涂片染色显微镜检查的分类：

判断标准比较简单的方法就是确定鳞状上皮细胞数量：

细胞数10/低倍视野，说明混有痰液。

细胞数/低倍视野WBC10鳞状上皮细胞25不合格WBC1025鳞状上皮细胞25不合格WBC25鳞状上皮细胞25不合格WBC25鳞状上皮细胞1025可接受WBC25鳞状上皮细胞10合格WBC25鳞状上皮细胞25可接受?

a,48,用革兰氏染色来评估呼吸道标本是否合格,10鳞状上皮细胞/LPF拒收！

弹性纤维，中性粒细胞多，鳞状上皮细胞少，有代表性的好标本,a,49,形态学鉴别要诀球菌,革兰阴性双球菌肾型豆子样，平行纵轴排列=奈瑟菌属,a,50,实际革兰氏染色,革兰阴性双球菌：

在生殖道标本或脑脊液中多为奈瑟菌属；在下呼吸道分泌物中提示为卡他莫拉菌,革兰阳性双球菌提示肺炎链球菌,a,51,形态学鉴别要诀球菌,革兰阳性球菌成对，成链较小、拉长的、从不4联排列=链球菌属,革兰阳性球菌呈堆排列，通常很圆，细胞较大，不拉长，可成对，但链不超过4个细胞。

可能因脱色过度呈革兰阴性。

但如果不是肾型话不可能为革兰阴性菌。

a,52,链状的革兰阳性球菌：

提示链球菌短链，6个细胞，提示肠球菌或B群链球菌；肺炎链球菌,血培养中长链的革兰阳性球菌（6个细胞）提示化脓链球菌或草绿色链球菌,革兰氏阳性球菌,a,53,更多的革兰氏染色形态学,呈堆或四联排列的革兰阳性球菌提示葡萄球菌,a,54,革兰阳性杆菌的形态学鉴别要诀,革兰氏阳性杆菌可以很规则，如果是需氧菌则非常可能是芽胞杆菌属，如果是厌氧则非常可能是梭菌属。

如果很小，可能是不呈链状的李斯特菌属，如果呈链状则很可能是乳酸杆菌属。

革兰阳性不规则的杆菌（多形态），一端比另一端粗。

常相互吸附或呈篱笆样排列=棒状杆菌属或丙酸杆菌属,a,55,细胞内细菌,a,56,革兰阴性双球菌,a,57,多形态提示混合厌氧菌感染,a,58,外型奇特的酵母菌，不像米老鼠的耳朵或白色念珠菌椭圆形孢子。

报告“真菌成分和酵母样细胞”。

不要遗忘革兰阴性杆菌。

a,59,痰培养-特别提醒,洋葱伯克霍尔德菌是一种重要的呼吸道致病原，可引起囊性纤维化。

常规培养基中生长良好。

诺卡菌（Nocardiaspp）诺卡菌是一种重要的呼吸道致病菌。

培养的标本应立即进行实验室检查，如果延迟时间不长，4保存也可以接受。

标本革兰染色检查，可以发现小的革兰阳性菌，外观呈分枝状、丝状或球状。

没有特异的培养诺卡菌的培养基，可用心浸液沙氏葡萄糖琼脂、脑心浸液琼脂、羊血琼脂或胰蛋白大豆琼脂。

25-37孵育3周，37更好。

鼻咽部金黄色葡萄球菌确定金黄色葡萄球菌带菌者，用聚酯头拭子从前鼻孔取鼻咽分泌物，接种5羊血，35孵育2d。

a,60,痰培养-特别提醒,鼻咽部脑膜炎奈瑟菌采集鼻咽拭子标本，接种血琼脂、巧克力琼脂或MTM培养基，5CO2的潮湿环境，35孵育72h。

喉A群链球菌喉部标本最常用于诊断A群链球菌喉炎，标本接种血琼脂510CO2环境，35孵育48h。

a,61,脑脊液-操作步骤,将脑脊液标本经