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抑菌活性测定示范论文
学校代码：
10410
序号：
本科毕业论文
6种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌的室内毒力测定
学院：
农学院
姓名：
程珊梅
学号：
20060138
专业：
园艺
年级：
2006级
指导教师：
向妙莲
二0一0年三月
摘要：
采用生长速率法进行了6种化学杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌的室内毒力测定，结果表明：
参试的6种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌茵丝抑制效果差异很大，代森联的抑菌效果最佳，抑制中浓度（EC50）为2.680μg/ml；波尔多液的抑菌效果最弱，EC50为322.290μg/ml；其它四种杀菌剂恶唑菌铜、福美双、代森锰锌、丙森锌的EC50依次为3.270μg/ml、4.150μg/ml、19.930μg/ml、203.078μg/ml。
关键词：
杀菌剂；南丰蜜桔黑斑病菌；毒力
ToxicityMeasurementofsixFungicidesonPhomacitricarpaofNanfengMandarin
Abstract:
Thetoxicitiesof6fungicidestoPhomacitricarpaMcAlpineofNangfengMandarinweretestedinthelaboratorywiththemethodofmyceliumgrowthrate.TheresultsshowedthattheMetiramwhoseEc50was2.680μg/mlshowedthebestwhileBordeauxwastheworstanditsEc50valuewas322.290μg/ml.Theother4fungicides,Famoxadone,Thiram,Mancozeb,Propineb,whoseEc50were3.270μg/ml,4.150μg/ml,
19.930μg/ml,203.078μg/ml.
Keywords:
fungicides;PhomacitricarpaMcAlpineofNanfengMandarin;toxicity
目录
1．材料与方法1
1.1材料1
1.1.1供试菌株1
1.1.2供试杀菌剂1
1.2方法2
1.2.1干热灭菌玻璃器皿2
1.2.2制作PDA培养基2
1.2.3湿热灭菌2
1.2.46种供试杀菌剂对黑斑病菌的抑菌效果测定2
1.2.5数据统计3
2结果与分析3
2.16种杀菌剂对柑橘黑斑病菌的抑制作用3
2.26种药剂对黑斑病菌的毒力测定5
3.讨论5
参考文献7
致谢8
6种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌的室内毒力测定
南丰蜜桔品质优良，果实皮薄、无核或少核、色泽金黄、风味独特、质量上胜而深受广大消费者欢迎[1]。
近年来，随着南丰蜜桔栽培历史的悠久和产业化的扩展，南丰蜜桔黑斑病不断蔓延，日趋严重，成为制约南丰蜜桔果品质量的重要病害。
目前除了必要的农业防治措施外，药剂防治是减轻该种病害的重要措施[2]。
如何选择防治南丰蜜桔黑斑病的高效药剂成为亟待解决的问题。
本文选择6种杀菌剂进行室内毒力测定[5,6,7]，筛选出对南丰蜜桔黑斑病菌抑菌效果显著的杀菌剂，为进一步研发防治南丰蜜桔黑斑病的制剂，更好控制该病害发生提供科学依据。
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1供试菌株
供试菌株为本实验室保存的柑橘黑斑病菌。
1.1.2供试杀菌剂
表16种供试杀菌剂
Tab.1sixfungicides
代号
名称
有效成份
剂型
生产厂家
1
大生
80%代森锰锌
80%可湿性粉剂
美国陶氏益农公司
2
安泰生
70%丙森锌
70%可湿性粉剂
德国拜耳作物科学公司
3
易保
68.8%恶唑菌酮
锰锌
68.8%可湿性
粉剂
美国杜邦公司
4
西安美邦甲托
70%甲基硫菌灵、福美双
70%超微可湿性
粉剂
西安美邦药业有限公司
5
品润
70%代森联
70%水分散粒剂
德国巴斯夫股份有限公司
6
波尔多液
80%波尔多液
80%可湿性粉剂
美国仙农有限公司
1.2方法
1.2.1干热灭菌玻璃器皿
将做好棉塞的试管、洗净干燥后的培养皿、容量瓶等玻璃仪器先用牛皮纸或报纸包好，放入干燥箱，关上箱门，接通电源，然后将温度调至165℃左右。
当温度升至设定温度时开始计时（此期间要注意T变化，尽量使160℃≤T≤165℃,不能超过170℃），恒温1.5小时后可关闭电源。
由于电热恒温干燥箱内温度很高，故不可立即打开箱门，须在箱门上写上注意事项，防止别人打开。
温度降至室温时可打开，开箱前要先读温度计的数值。
1.2.2制作PDA培养基
称取洗净削皮的马铃薯200克、17~20克琼脂、10~20克葡萄糖备用。
马铃薯切成小块装入烧杯，琼脂剪碎装入烧杯，两烧杯分别加入500毫升蒸馏水并进行水浴加热。
马铃薯煮烂时用干净的双层纱布进行过滤，滤液与溶解的琼脂混合，加入葡萄糖，混匀用蒸馏水定容至1000毫升。
将做好的培养基分装到试管或锥形瓶中，用牛皮纸包好，待湿热灭菌用[3]。
1.2.3湿热灭菌
锅底先加水至环形管水平，放上铝锅，锅内摆放需灭菌的仪器（其中包括盛有培养基的试管及锥形瓶、装有蒸馏水的锥形瓶、洗净包好的酒杯等）。
最好在上层覆盖一些报纸吸水，从而使仪器的包装纸尽量保持干燥。
盖上锅盖，旋阀门时两手对称同时均匀用力，关上放气阀。
温度升至108℃时打开放气阀，降到0℃时关上放气阀（重复此操作一次）。
温度上升至121℃时开始计时，通过电源开关控制121℃≤T≤126℃,30分钟后关闭电源。
当温度降低至0℃时打开放气阀，放完气即可开锅。
不可等它完全冷却，否则很难打开。
1.2.46种供试杀菌剂对黑斑病菌的抑菌效果测定
采用菌丝生长速率法[4]测定6种药剂对南丰蜜桔黑斑病菌生长的抑制效果。
每种杀菌剂各称取5克，用无菌水配制成0.1g/ml，依次取1ml药液加入到9ml灭菌水中摇匀后,分别量取1ml倒入培养皿（每皿中有9ml温度降至50℃左右的灭菌培养基），摇匀制成PDA[4]含药平板培养基。
每种杀菌剂稀释100×、1000×、10000×、100000×、1000000×、10000000×（浓度分别为10000，1000，100，10，1，0.1μg/ml）6个浓度梯度，另设以不含药剂培养基为对照，每个浓度重复3次。
在无菌条件下，将平板培养基的柑橘黑斑病菌用直径为7mm的打孔器取相同菌龄的菌饼，然后将菌饼用接种针接入带药的培养基中央，设不含药培养基为对照，在25℃的气候箱中培养，10天后，用十字交叉法测量各菌落直径，计算药剂浓度对黑斑病菌生长的抑制率，求出毒力回归方程，计算药剂抑菌有效中浓度EC50。
生长抑制率=[（对照组菌丝净生长量－处理组菌丝净生长量）/对照组菌丝净生长量]×100%
1.2.5数据统计
根据不同浓度的药剂处理对菌落的生长抑制结果（见表2），对表2进行一元回归统计分析，以浓度的对数值为x，以抑菌率的几率值为y值，得出表3的毒力回归方程,并求出EC50和各自的相关系数。
相关系数是回归模型中用来衡量两个变量之间相关程度的指标，所以获得相关系数后应进行相关系数检验，确定显著水平与自由度后，查相关系数临界表，找到相应的相关系数临界值,若求得的相关系数的绝对值大于显著水平为0.01的相关系数临界值,一般认为回归方程是高度可信的;若大于显著水平为0.05的相关系数临界值,则认为回归方程是可信的；若小于显著水平为0.1的相关系数临界值则不可信,不能作为预测模型。
2结果与分析
2.16种杀菌剂对柑橘黑斑病菌的抑制作用
从表2可知，6种杀菌剂在各浓度梯度下对黑斑病菌均有一定的抑制作用。
当用最大浓度10000μg/ml处理时，80%代森锰锌、68.8%恶唑菌铜锰锌、70%代森联对黑斑病菌抑菌率高达100%；80%波尔多液的抑菌率最低，为78.1%。
同时，随药剂浓度的降低，抑菌率呈下降趋势。
以浓度从10000μg/ml稀释至10μg/ml为例，70%甲基硫菌灵福美双抑菌效果变化最小，下降39.2个百分点，68.8%恶唑菌铜锰锌次之为40.2个百分点，70%代森联和80%代森锰锌分别为42.1个百分点和60.7个百分点，70%丙森锌的抑菌效果下降最明显，抑菌率下降了69.5个百分点。
表26种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌生长抑制效果
Tab.2 Theinhibitionof6fungicidesonPhomacitricarpa
杀菌剂
菌落直径（cm）
抑菌率（%）
抑制机率值
浓度（μg/ml）
浓度对数
0.00
100.00
8.0900
10000
4
0.48
78.57
5.7928
1000
3
80%代森锰锌
0.95
57.59
5.1918
100
2
1.36
39.30
4.7287
10
1
1.46
34.82
4.6064
1
0
1.71
23.67
4.2801
0.1
-1
2.24
0.00
-
0
-
0.10
90.50
6.3100
10000
4
0.46
54.50
5.1150
1000
3
70%丙森锌
0.73
27.00
4.3900
100
2
0.79
21.00
4.1900
10
1
0.80
20.50
4.1750
1
0
0.95
5.00
3.3600
0.1
-1
1.00
0.00
-
0
-
0.00
100.00
8.09
10000
4
0.14
90.07
6.2942
1000
3
68.8%恶唑菌铜锰锌
0.54
61.70
5.3010
100
2
0.57
59.80
5.2414
10
1
0.78
44.68
4.8636
1
0
1.03
26.95
4.3885
0.1
-1
1.41
0.00
-
0
-
0.15
92.30
6.4317
10000
4
0.18
90.77
6.3262
1000
3
70%甲基硫菌灵福美双
0.32
83.59
5.9736
100
2
0.92
53.10
5.0816
10
1
1.22
37.40
4.6788
1
0
1.81
7.17
3.5319
0.1
-1
1.95
0.00
-
0
-
0.00
100.00
8.09
10000
4
0.04
97.56
6.9752
1000
3
70%代森联
0.55
66.46
5.4184
100
2
0.69
57.90
5.1986
10
1
0.81
50.61
5.0183
1
0
1.37
16.46
4.0284
0.1
-1
1.64
0.00
-
0
-
0.47
78.09
5.7736
10000
4
0.94
56.18
5.1554
1000
3
必备
1.47
31.47
4.5141
100
2
（80%波尔多液）
1.57
26.81
4.3843
10
10
1.77
17.48
4.0644
1
1
1.85
13.75
3.9075
0.1
-1
2.14
0.00
-
0
-
注:
菌落直径=平均菌落直径-转接菌柄直径（7mm）;浓度（μg/ml）=0时表示对照。
2.26种药剂对黑斑病菌的毒力测定
经一元回归统计分析,70%代森联的毒力最强，68.8%恶唑菌铜锰锌次之,EC50分别为2.680μg/ml和3.270μg/ml；西安70%甲基硫菌灵福美双EC50为4.150μg/ml；80%代森锰锌EC50为19.930μg/ml；70%丙森锌EC50为203.078μg/ml。
以80%波尔多液的毒力最弱，EC50为322.290μg/ml。
因此，这六种药剂对柑橘黑斑病病原菌的毒力大小依次为：
70%代森联>68.8%恶唑菌铜锰锌>西安70%甲基硫菌灵福美双>80%代森锰锌>70%丙森锌>80%波尔多液。
表36种杀菌剂对柑橘黑斑病菌的毒力回归方程
Tab.3Toxicityregressequationsof6fungicidesagainstPhomacitricarpa
杀菌剂
毒力回归方程
抑制中浓度EC50（μg/ml）
相关系数
80%代森锰锌
y=0.4008x+4.4791
19.930
0.9646
70%丙森锌
y=0.5077x+3.8284
203.078
0.9387
68.8%恶唑菌铜锰锌
y=0.4307x+4.7783
3.270
0.9182
70%甲基硫菌灵福美双
y=0.5844x+4.6386
4.150
0.9840
70%代森联
y=0.6091x+4.7389
2.680
0.8792
80%波尔多液
y=0.3638x+4.0875
322.290
0.9626
注：
r0.01=0.9172，r0.05=0.8114
3.讨论
由于人们日益追求农产品的经济效益，近年来化学农药的使用量日益增多。
据统计，全世界每年使用近200万t农药，我国占33.4万t。
化学农药不仅杀死了有益农田微生物，破坏了农业生态系统，还滞留于土壤、水体、农副产品和
畜产品中，对人类健康造成严重的威胁。
另外长期使用农药使许多病虫害产生耐药性，导致了农药的使用频率和剂量逐年增加的恶性循环。
但同时农药又是防治农作物病虫杂草及鼠害的有力武器,是农作物丰收的重要保障，所以必须正确选择农药。
总的原则是低毒、高效、低残留。
本文六种杀菌剂对柑橘黑斑病的室内毒力测定结果表明：
70%代森联与68.8%恶唑菌铜锰锌对柑橘黑斑病的毒力最强，且随着溶度的降低，其对柑橘黑斑病菌的抑制作用下降的较慢，可见其高效性及理想的持效期，故70%代森联与68.8%恶唑菌铜锰锌可以作为田间药效试验的参考药剂。
80%波尔多液对柑橘黑斑病菌的毒力最弱，即使浓度在10000μg/ml时，其抑菌率也不高，所以使用80%波尔多液不仅会提高生产成本，而且防治效果并不好，建议暂停使用；70%丙森锌的药效不稳定，药剂溶度一旦降低，其抑菌率立即下降40个点左右，它的持效期短，建议暂停使用。
而70%甲基硫菌灵福美双与80%代森锰锌西安的毒力介于中间，防治效果较好。
本试验为室内毒力测定，仅为田间试验用药提供参考，必须将室内试验同田间试验结合起来,才能对药剂使用效果有一个全面客观的评价。
参考文献
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中国农业出版社,1978:
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中国农业大学出版社,1991:
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99-101.
致谢
本研究及学位论文是在向妙莲老师的亲切关怀和悉心指导下完成的。
她严肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，深深地感染和激励着我。
从课题的选择到项目的最终完成，向老师都始终给予我细心的指导和不懈的支持。
一直以来，向老师不仅在学业上给我以精心指导，同时生活上给我以无微不至的关怀，她在我心中一直是亦师亦友，在此谨向向妙莲老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。
在此，我还要特别感谢一直带我做实验的张文梅师姐，有了她的细心指导，我才能快速地克服一个一个的困难至本文的顺利完成。
最后我要感谢我的合作者宫燕霞，谢谢她一直以来的努力配合与帮助。
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