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1、抑菌活性测定示范论文学校代码：10410 序 号： 本 科 毕 业 论 文6种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌的室内毒力测定学 院： 农学院 姓 名： 程珊梅 学 号： 20060138 专 业： 园 艺 年 级： 2006 级 指导教师： 向妙莲 二0一0 年 三 月摘 要：采用生长速率法进行了6种化学杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌的室内毒力测定，结果表明：参试的6种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌茵丝抑制效果差异很大，代森联的抑菌效果最佳，抑制中浓度(EC50)为2.680g/ml；波尔多液的抑菌效果最弱，EC50为322.290g/ml；其它四种杀菌剂恶唑菌铜、福美双、代森锰锌、丙森锌的EC50依次为3.27

2、0g/ml、4.150g/ml、19.930g/ml、203.078g/ml。关键词：杀菌剂；南丰蜜桔黑斑病菌；毒力Toxicity Measurement of six Fungicides on Phoma citricarpa of Nanfeng MandarinAbstract:The toxicities of 6 fungicides to Phoma citricarpa McAlpine of Nangfeng Mandarin were tested in the laboratory with the method of mycelium growth rate.The

3、results showed that the Metiram whose Ec50 was 2.680g/ml showed the best while Bordeaux was the worst and its Ec50 value was 322.290g/ml.The other 4 fungicides, Famoxadone, Thiram,Mancozeb, Propineb, whose Ec50 were 3.270g/ml, 4.150g/ml,19.930g/ml, 203.078g/ml.Key words: fungicides; Phoma citricarpa

4、 McAlpine of Nanfeng Mandarin;toxicity目 录1 材料与方法 11.1材料 11.1.1供试菌株 11.1.2 供试杀菌剂 11.2 方法 21.2.1干热灭菌玻璃器皿 21.2.2 制作PDA培养基 21.2.3 湿热灭菌 21.2.4 6种供试杀菌剂对黑斑病菌的抑菌效果测定 21.2.5 数据统计 32 结果与分析 32.1 6种杀菌剂对柑橘黑斑病菌的抑制作用 32.2 6种药剂对黑斑病菌的毒力测定 53.讨论 5参考文献 7致 谢 86种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌的室内毒力测定南丰蜜桔品质优良，果实皮薄、无核或少核、色泽金黄、风味独特、质量上胜而深受广大

5、消费者欢迎1。近年来，随着南丰蜜桔栽培历史的悠久和产业化的扩展，南丰蜜桔黑斑病不断蔓延，日趋严重，成为制约南丰蜜桔果品质量的重要病害。目前除了必要的农业防治措施外，药剂防治是减轻该种病害的重要措施2。如何选择防治南丰蜜桔黑斑病的高效药剂成为亟待解决的问题。本文选择6种杀菌剂进行室内毒力测定5,6,7，筛选出对南丰蜜桔黑斑病菌抑菌效果显著的杀菌剂，为进一步研发防治南丰蜜桔黑斑病的制剂，更好控制该病害发生提供科学依据。1.材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株供试菌株为本实验室保存的柑橘黑斑病菌。1.1.2 供试杀菌剂表1 6种供试杀菌剂Tab.1 six fungicides代号名称有效成份剂型

6、生产厂家1大生80%代森锰锌80%可湿性粉剂美国陶氏益农公司2安泰生70%丙森锌70%可湿性粉剂德国拜耳作物科学公司3易保68.8%恶唑菌酮锰锌68.8%可湿性粉剂美国杜邦公司4西安美邦甲托70%甲基硫菌灵、福美双70%超微可湿性粉剂西安美邦药业有限公司5品润70%代森联70%水分散粒剂德国巴斯夫股份有限公司6波尔多液80%波尔多液80%可湿性粉剂美国仙农有限公司1.2 方法1.2.1干热灭菌玻璃器皿将做好棉塞的试管、洗净干燥后的培养皿、容量瓶等玻璃仪器先用牛皮纸或报纸包好，放入干燥箱，关上箱门，接通电源，然后将温度调至165左右。当温度升至设定温度时开始计时（此期间要注意T变化，尽量使160

7、T165,不能超过170），恒温1.5小时后可关闭电源。由于电热恒温干燥箱内温度很高，故不可立即打开箱门，须在箱门上写上注意事项，防止别人打开。温度降至室温时可打开，开箱前要先读温度计的数值。1.2.2 制作PDA培养基称取洗净削皮的马铃薯200克、1720克琼脂、1020克葡萄糖备用。马铃薯切成小块装入烧杯，琼脂剪碎装入烧杯，两烧杯分别加入500毫升蒸馏水并进行水浴加热。马铃薯煮烂时用干净的双层纱布进行过滤，滤液与溶解的琼脂混合，加入葡萄糖，混匀用蒸馏水定容至1000毫升。将做好的培养基分装到试管或锥形瓶中，用牛皮纸包好，待湿热灭菌用3。1.2.3 湿热灭菌锅底先加水至环形管水平，放上铝锅，

8、锅内摆放需灭菌的仪器（其中包括盛有培养基的试管及锥形瓶、装有蒸馏水的锥形瓶、洗净包好的酒杯等）。最好在上层覆盖一些报纸吸水，从而使仪器的包装纸尽量保持干燥。盖上锅盖，旋阀门时两手对称同时均匀用力，关上放气阀。温度升至108时打开放气阀，降到0时关上放气阀（重复此操作一次）。温度上升至121时开始计时，通过电源开关控制121T126,30分钟后关闭电源。当温度降低至0时打开放气阀，放完气即可开锅。不可等它完全冷却，否则很难打开。1.2.4 6种供试杀菌剂对黑斑病菌的抑菌效果测定 采用菌丝生长速率法4测定6种药剂对南丰蜜桔黑斑病菌生长的抑制效果。每种杀菌剂各称取5克，用无菌水配制成0.1g/ml，

9、依次取1ml药液加入到9ml灭菌水中摇匀后,分别量取1ml倒入培养皿（每皿中有9ml温度降至50左右的灭菌培养基），摇匀制成PDA4 含药平板培养基。每种杀菌剂稀释100、1000、10000、100000、1000000、10000000 （浓度分别为10000，1000，100，10，1，0.1g/ml）6个浓度梯度，另设以不含药剂培养基为对照，每个浓度重复3次。在无菌条件下，将平板培养基的柑橘黑斑病菌用直径为7mm的打孔器取相同菌龄的菌饼，然后将菌饼用接种针接入带药的培养基中央，设不含药培养基为对照，在25的气候箱中培养，10天后，用十字交叉法测量各菌落直径，计算药剂浓度对黑斑病菌生长的

10、抑制率，求出毒力回归方程，计算药剂抑菌有效中浓度EC50。生长抑制率=（对照组菌丝净生长量处理组菌丝净生长量）/对照组菌丝净生长量100%1.2.5 数据统计根据不同浓度的药剂处理对菌落的生长抑制结果（见表2），对表2进行一元回归统计分析，以浓度的对数值为x，以抑菌率的几率值为y值，得出表3的毒力回归方程,并求出EC50和各自的相关系数。相关系数是回归模型中用来衡量两个变量之间相关程度的指标，所以获得相关系数后应进行相关系数检验，确定显著水平与自由度后，查相关系数临界表，找到相应的相关系数临界值,若求得的相关系数的绝对值大于显著水平为0.01的相关系数临界值,一般认为回归方程是高度可信的;若大

11、于显著水平为0.05的相关系数临界值,则认为回归方程是可信的；若小于显著水平为0.1的相关系数临界值则不可信,不能作为预测模型。2 结果与分析2.1 6种杀菌剂对柑橘黑斑病菌的抑制作用从表2可知，6种杀菌剂在各浓度梯度下对黑斑病菌均有一定的抑制作用。当用最大浓度10000g/ml处理时，80%代森锰锌、68.8%恶唑菌铜锰锌、70%代森联对黑斑病菌抑菌率高达100%； 80%波尔多液的抑菌率最低，为78.1%。同时，随药剂浓度的降低，抑菌率呈下降趋势。以浓度从10000g/ml稀释至10g/ml为例， 70%甲基硫菌灵福美双抑菌效果变化最小，下降39.2个百分点，68.8%恶唑菌铜锰锌次之为4

12、0.2个百分点，70%代森联和80%代森锰锌分别为42.1个百分点和60.7个百分点，70%丙森锌的抑菌效果下降最明显，抑菌率下降了69.5个百分点。表2 6 种杀菌剂对南丰蜜桔黑斑病菌生长抑制效果Tab.2 The inhibition of 6 fungicides on Phoma citricarpa杀菌剂菌落直径(cm) 抑菌率(%)抑制机率值浓度(g/ml)浓度对数0.00100.008.09001000040.4878.575.79281000380%代森锰锌0.9557.595.191810021.3639.304.72871011.4634.824.6064101.7123.

13、674.28010.1-12.240.00-0-0.1090.506.31001000040.4654.505.11501000370%丙森锌0.7327.004.390010020.7921.004.19001010.8020.504.1750100.955.003.36000.1-11.000.00-0-0.00100.008.091000040.1490.076.29421000368.8%恶唑菌铜锰锌0.5461.705.301010020.5759.805.24141010.7844.684.8636101.0326.954.38850.1-11.410.00-0-0.1592.30

14、6.43171000040.1890.776.32621000370%甲基硫菌灵福美双0.3283.595.973610020.9253.105.08161011.2237.404.6788101.817.173.53190.1-11.950.00-0-0.00100.008.091000040.0497.566.97521000370%代森联0.5566.465.418410020.6957.905.19861010.8150.615.0183101.3716.464.02840.1-11.640.00-0-0.4778.095.77361000040.9456.185.155410003必

15、备1.4731.474.51411002(80%波尔多液)1.5726.814.384310101.7717.484.0644111.8513.753.90750.1-12.140.00-0-注: 菌落直径=平均菌落直径-转接菌柄直径(7mm); 浓度(g/ml)=0时表示对照。2.2 6种药剂对黑斑病菌的毒力测定经一元回归统计分析, 70%代森联的毒力最强，68.8%恶唑菌铜锰锌次之, EC50分别为2.680g/ml和3.270g/ml；西安70%甲基硫菌灵福美双EC50为4.150g/ml；80%代森锰锌EC50为19.930g/ml；70%丙森锌EC50为203.078g/ml。以80

16、%波尔多液的毒力最弱，EC50为322.290g/ml 。因此，这六种药剂对柑橘黑斑病病原菌的毒力大小依次为：70%代森联 68.8%恶唑菌铜锰锌西安70%甲基硫菌灵福美双80%代森锰锌70%丙森锌80%波尔多液。表3 6种杀菌剂对柑橘黑斑病菌的毒力回归方程Tab. 3 Toxicity regress equations of 6 fungicides against Phoma citricarpa杀菌剂毒力回归方程抑制中浓度EC50(g/ml)相关系数80%代森锰锌y=0.4008x+4.479119.9300.964670%丙森锌y=0.5077x+3.8284203.0780.938

17、768.8%恶唑菌铜锰锌y=0.4307x+4.77833.2700.9182 70%甲基硫菌灵福美双y=0.5844x+4.63864.1500.984070%代森联y=0.6091x+4.73892.6800.879280%波尔多液y=0.3638x+4.0875322.2900.9626注：r0.01=0.9172， r0.05=0.81143.讨论由于人们日益追求农产品的经济效益，近年来化学农药的使用量日益增多。据统计，全世界每年使用近200 万 t 农药，我国占 33.4 万 t。化学农药不仅杀死了有益农田微生物，破坏了农业生态系统，还滞留于土壤、水体、农副产品和畜产品中，对人类健康

18、造成严重的威胁。另外长期使用农药使许多病虫害产生耐药性，导致了农药的使用频率和剂量逐年增加的恶性循环。但同时农药又是防治农作物病虫杂草及鼠害的有力武器,是农作物丰收的重要保障，所以必须正确选择农药。总的原则是低毒、高效、低残留。本文六种杀菌剂对柑橘黑斑病的室内毒力测定结果表明：70%代森联与68.8%恶唑菌铜锰锌对柑橘黑斑病的毒力最强，且随着溶度的降低，其对柑橘黑斑病菌的抑制作用下降的较慢，可见其高效性及理想的持效期，故70%代森联与68.8%恶唑菌铜锰锌可以作为田间药效试验的参考药剂。80%波尔多液对柑橘黑斑病菌的毒力最弱，即使浓度在10000g/ml时，其抑菌率也不高，所以使用80%波尔多

19、液不仅会提高生产成本，而且防治效果并不好，建议暂停使用；70%丙森锌的药效不稳定，药剂溶度一旦降低，其抑菌率立即下降40个点左右，它的持效期短，建议暂停使用。而70%甲基硫菌灵福美双与80%代森锰锌西安的毒力介于中间，防治效果较好。本试验为室内毒力测定，仅为田间试验用药提供参考， 必须将室内试验同田间试验结合起来, 才能对药剂使用效果有一个全面客观的评价。参考文献1 袁展汽，肖运平南丰蜜桔主产区产地环境分析及果品质量安全生产建议J.江西农业学报,2006,18(6):222-224.2 高超跃，范新单，廖祥林等不同药剂防治柑桔黑星病的药效试验J.中国南方果树,2004,33(2):21.3 方

20、中达植病研究法(第三版)M.北京:中国农业出版社,1978:83-84.4 陈年春农药生物测定技术M.北京:中国农业大学出版社,1991:102-109.5孟凡亮几种杀菌剂防治石榴树黑斑病效果试验J.农药科学与管理,2008,29(11):35-37.6李敏权，陈天仁，王华等辣椒黑斑病菌的室内防效测定J.甘肃农业大学学报,2002,37(2):190-193.7贾辉，吕和平，沈慧敏等不同杀菌剂对立枯丝核菌的室内毒力测定J.甘肃农业大学学报,2007,42(6):99-101.致 谢本研究及学位论文是在向妙莲老师的亲切关怀和悉心指导下完成的。她严肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，深深地感染和激励着我。从课题的选择到项目的最终完成，向老师都始终给予我细心的指导和不懈的支持。一直以来，向老师不仅在学业上给我以精心指导，同时生活上给我以无微不至的关怀，她在我心中一直是亦师亦友，在此谨向向妙莲老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。 在此，我还要特别感谢一直带我做实验的张文梅师姐，有了她的细心指导，我才能快速地克服一个一个的困难至本文的顺利完成。最后我要感谢我的合作者宫燕霞，谢谢她一直以来的努力配合与帮助。