典型实验室常用缓冲液配置方案.docx

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典型实验室常用缓冲液配置方案

典型实验室常用缓冲液配置方案

实验室常用缓冲液配置方案

1）1MTris-HCl（pH7.4,7.6,8.0）组份浓度：

1MTris-HCl配制量：

1L配制方法：

1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

PH值

浓HCl

7.4

约70ml

7.6

约60ml

8.0

约42ml

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2）10_____TEBuffer（pH7.4,7.6,8.0）组份浓度：

100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量：

1L配制方法：

1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris－HClBuffer（PH7.4，7.6，8.0）

100ml

500mMEDTA（PH8.0）

20ml

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

3）1.5MTris-HCl（pH8.8）组份浓度：

1.5MTris-HCl配制量：

1L配制方法：

1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4）3M醋酸钠（pH5.2）组份浓度：

3M醋酸钠配制量：

100ml配制方法：

1.称量40.8gNaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml

4高温高压灭菌后，室温保存。

5）PBSBuffer组份浓度：

137mMNaCl,2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量：

1L配制方法：

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl

8g

KCl

0.2g

Na2HPO4

1.42g

KH2PO4

0.27g

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6）10M醋酸铵组份浓度：

10M醋酸铵

配制量：

100ml配制方法：

1.称量77.1g醋酸铵置于100～200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7）苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）配制方法：

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）。

氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊

醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配制方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:

1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8）10％（W/V）SDS组份浓度：

10％（W/V）SDS配制量：

100ml配制方法：

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。

9）2NNaOH组份浓度：

2NNaOH配制量：

100ml配制方法：

1.量取80ml去离子水置于100～200ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10）2.5NHCl组份浓度：

2.5NHCl配制量：

100ml配制方法：

1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

11）5MNaCl组份浓度：

5MNaCl配制量：

1L配制方法：

1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

11）20％（W/V）Glucose组份浓度：

20％（W/V）Glucose配制量：

100ml配制方法：

1.称取20gGlucose置于100～200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

12）SolutionI（质粒提取用）组份浓度：

25mMTris-HCl（pH8.0）,10mMEDTA,50mMGlucose配制量：

1L配制方法：

1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HCl（PH8.0）

25ml

0.5MEDTA（PH8.0）

20ml

20％Glucose（1.1145ml

M）

dH2O

910ml

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml）。

13）SolutionII（质粒提取用）组份浓度：

200mMNaOH，1％（W/V）SDS配制量：

500ml配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10％SDS50ml2NNaOH50ml2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌

14）SolutionIII（质粒提取用）组份浓度：

3MKOAc,5MCH3COOH配制量：

500ml配制方法：

1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。

KOAc

147g

CH3COOH

57.5ml

2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500ml。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

15）0.5MEDTA（pH8.0）组份浓度：

0.5MEDTA配制量：

1L配制方法：

称取186.1gNa2EDTA·2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

16）1MDTT

组份浓度：

1MDTT配制量：

20ml配制方法：

1.称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22mm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

17）10mMATP组份浓度：

10mMATP配制量：

20ml配制方法：

1.称取121mgNa2ATP·3H2O，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加

水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中

使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2.5％_－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的_－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100_____Denhardt试剂（Denhardt"sregent）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

2％聚蔗糖（Ficoll，400型）?

2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）?

2％BSA（组分V）?

水

2g?

2g?

2g?

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10_____标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/LTris-HCl?

100mmol/LMgCl2?

100mmol/LDTT?

2mmol/LATP?

5mmol/L盐酸亚精胺（可选）?

0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）?

水

5ml1mol/L贮液?

1ml1mol/L贮液?

1ml1mol/L贮液?

200ul100mmol/L贮液?

50ul1mmol/L贮液?

0.5ml10mg/mL贮液?

2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液

成分及终浓度

配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/LdATP?

10mmol/L2ul100mmol/LdATP贮液?

2ul100mmol/LdCTP贮液?

2ul100mmol/LdGTP贮液?

2ul100mmol/LdTTP贮液?

12ul

dCTP?

10mmol/LdGTP?

10mmol/LdTTP?

水

20％PEG8000/2.5MNaCl

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20％聚乙二醇?

2.5mol/L氯化钠?

水

20g?

50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠?

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20_____SSC

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L柠88.2g?

175.3g?

补足1L

檬酸三钠（二水）?

3mol/L氯化钠?

水

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）

直接购买或加Dowe__G8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）

按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：

溶解138g于足量水中，使终体

积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L磷酸二氢钠（ml）

1mol/L磷酸氢二钠（ml）

最终pH值

877?

850?

815?

775?

735?

685?

625?

565?

510?

450?

390?

330?

280

123?

150?

185?

225?

265?

315?

375?

435?

490?

550?

610?

670?

720

6.0?

6.1?

6.2?

6.3?

6.4?

6.5?

6.6?

6.7?

6.8?

6.9?

7.0?

7.1?

7.2

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris－HCl?

1mmol/LEDTA?

水

1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）?

200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）?

98.8ml

Tris缓冲液（Tris-HClbuffer）

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）

pH

8.6?

14?

21?

28.5?

38?

46?

56?

66?

71.3?

76

9.0?

8.8?

8.6?

8.4?

8.2?

8.0?

7.8?

7.6?

7.4?

7.2

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50_____Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

2mol/LTris碱?

1mol/L乙酸?

100mmol/LEDTA?

水

242g?

57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）?

200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）?

补足1L

5_____Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

445mmol/LTris碱?

445mmol/L硼酸盐?

10mmol/LEDTA?

水

54g?

27.5g硼酸?

20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）?

补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenolblue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（_ylenecyanoleFF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）

6_____碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.3N氢氧化钠?

6mmol/L300ul10N氢氧化钠?

120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）?

1.8g?

15mg?

25mg?

补足到10ml

EDTA?

18％聚蔗糖（400型）?

0.15％溴甲酚绿?

0.25％二甲苯青FF?

水

6_____聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝?

0.15％二甲苯青FF?

5mmol/LEDTA?

15％聚蔗糖（400型）?

水

1.5ml1％溴酚蓝?

1.5ml1％二甲苯青FF?

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）?

1.5g?

补足到10ml

6_____溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚蓝?

0.25％二甲苯青FF?

15％聚蔗糖2.5ml1％溴酚蓝?

2.5ml1％二甲苯青FF?

1.5g?

补足到10ml

（400型）?

水

6_____甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝?

0.15％二甲苯青FF?

5mmol/LEDTA?

50％甘油?

水

1.5ml1％溴酚蓝?

1.5ml1％二甲苯青FF?

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）?

3ml?

3.9ml

6_____蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝?

0.15％二甲苯青FF?

5mmol/LEDTA?

40％聚蔗糖?

水

1.5ml1％溴酚蓝?

1.5ml1％二甲苯青FF?

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）?

4g?

补足到10ml

10_____十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.2％溴酚蓝?

0.2％二甲苯青FF?

200mmol/LEDTA?

0.1％SDS?

50％甘油?

水

20mg?

20mg?

4ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）?

100ul10％SDS?

5ml?

补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

10g

酵母提取物

5g

氯化钠

10g

如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

5g

氯化钠

0.5g

1mol/L氯化钾

2.5ml

用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

12g

酵母提取物

24g

甘油

4ml

各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2_____YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

16g

酵母提取物

10g

氯化钠

4ml

如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

10g

葡萄糖

20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前