14第八章农残多残留分析.docx
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14第八章农残多残留分析
第八章农药多残留分析
概述
农药多残留方法（Multi-residuemethods,MRMs）是在一次分析中同时测定一种以上农药残留的方法。
从20世纪80年代以来，随着分离、测定技术的快速进展，尤其是毛细管色谱柱、多种高灵敏度、选择性色谱检测器、质谱检测器以及色质联用技术的成熟与普及应用，农药多残留分析技术得到了迅速的发展和广泛的应用。
农药多残留分析主要分为两类，如果建立的多残留分析方法或进行的检测是针对多种不同类型农药进行的，则称为多类多残留方法（MulticlassMRMs），只检测性质相近的某类农药的多残留分析，称为选择性多残留方法（SelectiveMRMs），也叫单类多残留方法。
多类多残留方法的应用范围主要是针对未知用药历史的样品，经常用于管理机构对食品和环境介质的检测、监督和残留限量执行情况。
多类多残留方法应该能够覆盖最广泛的农药残留，但这种分析能力受到以下几个因素的影响：
（1）提取溶剂体系能够将多少种农药残留从样品中提取出来的广泛性，以及提取的彻底性；
（2）净化过程去除样品共提取物（即杂质）而不去除残留农药的能力；（3）测定仪器对各类各种农药的分离和响应能力以及分析测定步骤的多少。
因为分析步骤越多，越容易造成残留农药的损失，或减少可检出残留农药的数目。
在进行农药多残留分析时，分析人员应用的方法应该是已确认（Validation）的方法。
由于多残留方法在提取、净化和测定的过程中根据不同样品基质的性质有多种不同的模式组合可供选择，分析人员需要结合其它模式优化分析过程。
但任何组合都必须有在其应用条件下确认根据的支持。
如果是研究新的分析方法，研究人员则要评价分析方法的每一步骤，根据最佳效能作出方法选择。
新形成的方法必须经过确认，特别是多实验室的确认评价试验。
在农药多残留分析过程中，有以下几个技术问题需要注意：
⑴.为了最大限度地检出所分析的未知用药历史样品中的农药残留种类，先测定未净化的提取液，尤其是应用选择性的检测器测定未净化的提取液，测定之后再对提取液净化。
⑵.当提取物色谱图出现峰时，通过检索峰的相对保留时间等有关资料进行初步确证，再通过选择性多残留方法和质谱等方法进行一致性确证。
⑶.要充分了解某些特别难以提取的残留农药，例如在多类多残留分析或在单类多残留分析时有机磷农药的极性残留甲胺磷往往提取的回收率较低，在这种情况下，要在分析方法和结果部分加以注释说明。
必要时用另外的方法或修改方法对这些残留重作分析。
农药多类多残留方法（MulticlassMRMs）
美国食品药品管理局方法（FDA-PAM法）
1．非脂肪性样品
丙酮提取法：
本方法可应用于非脂肪食品中的非离子型农药多残留分析。
⑴．提取
①.含水量＞75%的植物或其它食品
称取100g切碎或捣碎的样品于匀浆机中，加200mL丙酮，高速匀浆2min，用丙酮预洗过的滤纸（SharkSkin）置于12cm布氏漏斗，将混合物抽滤，收集滤液于500mL抽滤瓶内。
过滤一般在1min内完成，时间过长会造成提取液体积减少引起计算误差。
将80mL提取液置于1L的分液漏斗，加100mL石油醚和100mL二氯甲烷，用力振摇1min。
将下层水相转移至第二个1L的分液漏斗，将第一个分液漏斗中的上层相通过在预洗玻璃棉上装有4cm无水硫酸钠的漏斗（直径10cm）脱水，收集于K-D浓缩瓶中。
在装有水相的第二个分液漏斗加7g氯化钠，用力振摇30s至氯化钠基本溶解，加100mL二氯甲烷，用力振摇1min，下层有机相过同一无水硫酸钠漏斗脱水后进入K-D浓缩瓶；水相用100mL二氯甲烷提取，有机相过同上无水硫酸钠漏斗脱水后并入K-D浓缩瓶，再用50mL二氯甲烷淋洗硫酸钠，在K-D浓缩瓶中加适量沸石，先将浓缩瓶接收管置于蒸汽上慢慢浓缩，当有100-150mL的提取溶剂蒸发以后，可使浓缩器接触更多蒸汽，当浓缩液至约2mL时通过施奈德柱加100mL石油醚再浓缩至约2mL，加50mL石油醚再浓缩至约2mL，加20mL丙酮再浓缩至约2mL，浓缩过程中不得让溶剂蒸发至干。
用丙酮将提取液调节到适当的体积。
计算定容提取液中相应的样品量：
=100×
×
其中：
100=分析样品量（g）
80=液液分配时移取的提取液体积（mL）
200=100g样品中加的丙酮体积（mL）
w=样品中含水量（mL）（见相关文献，如果特殊的未加工的农产品得不到含水量数据，按85%计。
）
10=水/丙酮体积缩减得调节值（mL）。
例如，某样品含水量85%，定容体积7mL，则每μL含的样品量为：
100×
×
=μL
②.含水量低于﹤75%得植物或其它食品
称取15g粉碎的样品（﹤20目）于匀浆机中，加350mL35%水/丙酮，高速匀浆2min，用丙酮预洗过的滤纸（SharkSkin）置于12cm布氏漏斗，抽滤混合液，收集滤液于500mL抽滤瓶内，过滤一般在1min内完成，时间过长会造成提取液体积减少造成计算误差。
将80mL提取液转入盛有100mL二氯甲烷的1L分液漏斗中，加100mL石油醚，用力振摇1min，将下层水相转入第二个1L分液漏斗。
将第一个分液漏斗中的有机相通过在预洗玻璃棉上装有4cm无水硫酸钠的漏斗（直径10cm）脱水，收集于K-D浓缩瓶中。
在装有水相的第二个分液漏斗加7g氯化钠，用力振摇30s至氯化钠基本溶解，加100mL二氯甲烷，用力振摇1min，下层有机相过同一无水硫酸钠漏斗脱水后收集于K-D浓缩瓶。
再加100mL二氯甲烷同上提取水相和过硫酸钠漏斗脱水后并入K-D浓缩瓶，再用50mL二氯甲烷淋洗硫酸钠，淋洗液并入K-D浓缩瓶。
在K-D浓缩器中加沸石后浓缩，先将浓缩瓶接收管置于蒸汽上慢慢浓缩，当浓缩液至约2mL时通过施奈德柱加100mL石油醚再浓缩至约2mL，加50mL石油醚再浓缩至约2mL，加20mL丙酮再浓缩至约2mL，浓缩过程中不得让溶剂蒸发至干。
用丙酮将提取液调节到适当的体积。
计算定容提取液中相应的样品量：
=15×
×
其中：
15=分析样品量（g）
80=液液分配时移取的提取液体积（mL）
如果最后提取液定容体积为2mL，则每μL含的样品量为：
15×
×
=μL
⑵.净化
①.弗罗里硅土柱净化，二氯甲烷淋洗
称取4g活化过的弗罗里硅土（月桂酸值110）装入10mm内径×300mm的层析柱，上加约2cm无水硫酸钠，打开活塞，轻敲层析柱使吸附剂均实。
用15mL己烷预湿柱子，不让柱子流干。
用具刻度收集管的K-D浓缩器接收淋洗液。
用己烷稀释提取液，使成为10%的丙酮/己烷溶液（例如，取1mL丙酮浓缩液，以己烷定容至10mL）。
将此溶液转移到柱子上，流速约5mL/min。
用3mL己烷润洗容器壁两次，过层析柱，再用少量己烷淋洗层析柱壁。
用50mL淋洗液（50%二氯甲烷∶%乙腈∶%己烷，v/v/v）以约5mL/min流速淋洗层析柱。
浓缩：
在K-D浓缩器中加适量沸石，浓缩淋洗液至适当体积，一般与净化前移取的提取液体积一致，例如，净化前移取1mL浓缩的提取液稀释成10mL10%的丙酮/己烷溶液，净化后的淋洗液也浓缩为1mL。
定容待测。
②.弗罗里硅土柱净化，乙醚/石油醚淋洗
在22mm内径的层析柱内加活化过的弗罗里硅土约10cm（或根据月桂酸值决定用量），再加入约的无水硫酸钠。
用40-50mL石油醚预浸润柱子。
用具刻度收集管的K-D浓缩器接收淋洗液。
用丙酮稀释浓缩后的提取液至10mL并转移到100mL具塞量筒中，用石油醚润洗容器，再用石油醚稀释到100mL；塞紧，混匀。
转移稀释后的提取液到柱子上，使其流速约5mL/min。
用200mL15%乙醚/石油醚以约5mL/min的速率淋洗层析柱。
更换K-D瓶，用200mL50%乙醚/石油醚淋洗，淋洗速率约5mL/min
在K-D浓缩瓶中加入沸石，浓缩淋洗液至所需要的量。
例如，提取⑴法提取液中的含水量为85%，最终定容体积是5mL，净化后溶液的浓度是μL，即，100×80/（200+85-10）=29g，29g/5mL=mg/μL。
需要体积小于5mL时，用双球柱或微型Vigreaux柱。
定容后待测。
③.固相提取柱（SPE）净化
此净化法对于具毛细管柱的气相色谱检测具有更好的净化效果，对极性和非极性残留物都有很好的回收。
在75mL的容器内放μm滤膜，把SAX或代替品于滤膜上，再把PSA或代替品接到第一个柱子上。
用40mL丙酮润洗柱子；接着用10mL丙酮/石油醚（1/2,v/v）淋洗，弃去洗脱液。
用10mL石油醚稀释5mL浓缩的丙酮提取液并混合，转移到容器里，用加压淋洗，用少量丙酮/石油醚（1/2,v/v）润洗管子5次，在前一次的润洗液至柱子顶端时再进行下一次的淋洗。
混合K-D瓶收集液，加沸石浓缩溶剂；开始慢慢蒸发，仅在蒸汽中放收集管。
当浓缩至收集管中约2mL溶剂时，通过施奈德柱加100mL石油醚再浓缩至2mL左右，再加50mL石油醚浓缩至2mL左右。
小心加25mL丙酮浓缩至2mL左右。
在浓缩过程中，不得让溶剂蒸发至干。
最后用丙酮定容到所需体积。
SPE柱：
75mLBondElut具贮液杯；
25mm注射过滤器，μm尼龙66具1μm预过滤
SAXSPE柱或替代品，500mg
PSASPE柱或替代品，500mg
乙腈提取法：
本方法适合应用于非脂肪样品中相对非极性农药多残留分析。
⑴．提取
①.含水量＞75%、含糖＜5%的植物或其他食品
称取100g切碎混匀的样品于匀浆瓶内，加200mL乙腈，（可以加10gCelite助滤剂）。
高速匀浆2min，经铺有滤纸的布氏漏斗真空抽滤，转移滤液于250mL量筒，记录体积（F）后将定量的滤液转入1L的分液漏斗。
用同一量筒准确量取100mL石油醚，倒入分液漏斗中，剧烈振摇提取1-2min。
加10mL饱和氯化钠溶液及600mL水。
横握分液漏斗剧烈振摇30-45秒（混合不充分可能会导致一些农药回收率低，如六六六，TDE）。
静置分层后，弃去水相，用水轻轻冲洗有机相2次，每次100mL。
弃去冲洗水液，有机相转入100mL具玻塞量筒，记录体积（P）。
加15g硫酸钠于量筒内，盖紧塞子，用力振摇，提取液与硫酸钠在一起的时间不要超过1h，否则会因吸附造成有机氯农药的损失。
将溶液直接过弗罗里硅土柱净化，或在K-D浓缩器先浓缩至5-10mL后再过弗罗里硅土柱。
按下式计算过弗罗里硅土柱的样品重量（G）
S=提取的样品的重量（g）；
F=过滤后乙腈提取液的体积；
T=总体积（样品中水份的量mL+添加乙腈的量mL。
要校正体积缩小毫升数）。
80-95mL水和200mL乙腈的缩小体积为5mL。
P=回收的石油醚提取液体积（mL）；
100=残留农药分配进入的石油醚的体积；
大多数水果和蔬菜含水量可认为是85%。
②.鲜蛋类
将合在一起整蛋的蛋黄和蛋白低速搅拌至少5min，至样品均匀为止。
低速搅拌，可使样品起泡最少。
称取≤25g彻底混匀的蛋黄和蛋白，放入匀浆瓶，加200mL乙腈。
继续按①“高速匀浆2min…”同样处理。
计算加入弗罗里硅土柱净化的样品量（G）时，除T=215（25g全蛋中15mL水与200乙腈，缩小体积忽略不计）外，其余均同①计算。
③.含水量＜75%的植物或其他食品
磨碎样品并过20目筛
称取20-25g样品放入匀浆瓶，加350mL含水35%的乙腈（加10g助滤剂Celite）。
如果样品量需要较多，可另加足量的提取混合液，使其湿润且可以彻底混合。
高速搅拌5min，经放有滤纸的布氏漏斗，抽滤至抽滤瓶内。
取≤250mL滤过的提取液，记录体积（F），继续按①，“将定量的滤液转至1L分液漏斗，…”同样处理。
同①计算加入弗罗里硅土柱样品的克数，除T为样品中水的毫升数+含35%水的乙腈的毫升数。
忽略体积缩小的校正数。
如果样品含水量＜10%直接等于混合提取液的体积。
④.含水量＞75%，含糖5~15%的植物或其它食品
称取100g样品于匀浆瓶内，加200mL乙腈和50mL水。
高速匀浆2min，经放有滤纸的布氏漏斗抽滤入抽滤瓶内。
转移≤250mL过滤后的提取液于250mL的量筒中。
记录体积（F），继续按①，“把定量滤液移入1L分液漏斗，…”同样处理。
同①计算加入弗罗里硅土柱的实测样品的克数，除T为样品中水的毫升数+所加乙腈的毫升数+添加水的毫升数（要校正体积缩小的毫升数）。
当添加50mL水时，在含水量为85%的食品中T是325，因为80-95mL的水和200mL乙腈混合后缩小体积为5mL。
⑤.含水量＞75%，含糖＞15%的植物或其它食品
称取100g样品于匀浆瓶内，加入已加热的（75℃）200mL乙腈和50mL水的混合液。
例如要分析葡萄干，称取50g样品，分别加热50mL水和200mL乙腈至75℃。
加40-50mL热水至称量葡萄干的容器内，搅拌或摇晃使葡萄干在水中分散均匀。
转移到匀浆瓶，用剩下的水冲洗容器，并入匀浆瓶内，再用热的乙腈冲洗容器，并入匀浆瓶内，最后把剩余的乙腈都倒入匀浆瓶内。
高速搅拌2min，经放有滤纸的布氏漏斗抽滤入抽滤瓶内。
在热的滤液变冷之前，转移≤250mL经过滤后的提取液于250mL的量筒中。
记录体积（F）。
继续按①，“把定量滤液移入1L分液漏斗，…”同样处理。
同①计算加入弗罗里硅土柱的实测样品的克数，除T为样品中水的毫升数+所加乙腈的毫升数+添加水的毫升数。
（要校正体积缩小的毫升数）。
当添加50mL水时，在含水量为85%的食品中T是325，因为80-95mL的水和200mL乙腈混合后缩小体积为5mL。
⑵.净化
①.弗罗里硅土柱层析净化
在22mm内径的层析柱内加活化过的弗罗里硅土约10cm（或根据月桂酸值决定用量），再加约的硫酸钠，用40-50mL石油醚预浸润柱子。
用具刻度管的K-D瓶接收淋洗液。
将样品提取液转移到柱子上，使其流速约5mL/min。
用5mL石油醚淋洗容器和硫酸钠（如果有硫酸钠）两次，转移淋洗液到柱子上，再用另外的少量石油醚淋洗层析柱的内壁。
用200mL6%乙醚/石油醚的淋洗液淋洗层析柱，淋洗速率约5mL/min；更换K-D瓶，用200mL15%乙醚/石油醚淋洗，淋洗速率约5mL/min；更换K-D瓶，用200mL50%乙醚/石油醚淋洗，淋洗速率约5mL/min。
在K-D浓缩瓶中加入沸石，浓缩淋洗液至所需要的合适的量。
浓缩的量要求小于5mL时，需要使用双球柱或微型Vigreaux柱。
定容后待测。
②.弗罗里硅土柱层析备择方法
同①准备弗罗里硅土柱。
样品提取液转移到柱子上，使其流速约5mL/min。
用5mL己烷淋洗容器和硫酸钠（如果有硫酸钠）两次，转移淋洗液到柱子上，再用另外的少量己烷淋洗层析柱内壁；用200mL洗脱液（20%二氯甲烷/己烷,v/v）以约5mL/min的速率淋洗层析柱；更换K-D瓶，用200mL洗脱液（50%二氯甲烷/%乙腈/%己烷,v/v/v）以约5mL/min的速率淋洗层析柱；更换K-D瓶，用200mL洗脱液（50%二氯甲烷/%乙腈/%己烷,v/v/v）。
以约5mL/min的速率淋洗层析柱；在K-D浓缩瓶中加沸石，浓缩各淋洗液至适量。
浓缩的量需要小于5mL时，用双球柱或微型Vigreaux柱；定容后待测。
选用合适的检测方法对残留物进行定性和定量测定。
2.脂肪性样品
⑴.鱼和动物组织提取方法
称取25~50g完全磨碎混匀的鱼和动物组织于匀浆器中（样品量按净化过程适合的脂肪量加以调节），加入100gNa2SO4。
交替用刀片混匀样品和无水硫酸钠。
刮下器壁上样品，捣碎结块组织。
加入150ml石油醚高速匀浆2min。
在布氏漏斗中加两层滤纸，倒出石油醚上清液，真空抽滤。
用刀片刮下残余样，弄碎结块组织。
匀浆器中残余样品再用石油醚提取两次，每次用量100mL匀浆2min.（匀浆1min后，刮下残余样，粉碎结块组织，继续匀浆1min）。
抽滤，与第一次有机相混合。
最后一次匀浆后，将匀浆瓶中残渣倒入布氏漏斗，分三次每次用25-50mL石油醚淋洗匀浆瓶和布氏漏斗中残渣，在最后淋洗结束时，立即用干净烧杯底部挤压布氏漏斗，挤出残存的石油醚。
将全部的提取液和淋洗液通过25mm×50mm硫酸钠层析柱，用K-D浓缩器收集滤液，用少量石油醚淋洗抽滤瓶和层析柱。
在K-D瓶中加入沸石，蒸去大部分石油醚。
鱼和动物组织的小样量提取方法：
称取20g完全磨碎混匀的鱼或动物组织于匀浆杯中。
将用石油醚预润湿的40g硫酸钠加入样品中；用玻棒混匀样品，静置20min，再混匀；加100mL石油醚于样品中，匀浆1-2min；将平衡过的匀浆杯以2000rpm离心1-2min，得到澄清的石油醚提取物；漏斗中塞入玻璃棉，加入20g无水硫酸钠，放在250ml容量瓶上。
倒出石油醚提取液，过无水硫酸钠；再加入100ml石油醚于样品中，玻棒混匀，如前提取一次；再用70ml石油醚提取一次。
3次提取液合并于250ml容量瓶中；用石油醚稀释定容。
⑵.鱼和动物组织净化
①.原理
为避免在净化过程中出现超净化能力的现象，应细心称量提取出的脂肪量。
经过乙腈和石油醚液-液分配，可以将脂肪中的残留农药分离出来。
在乙腈和石油醚分配体系中，大多数脂肪留在石油醚相，而残留农药则进入乙腈相中。
当向乙腈相中加入水时，可以降低农药在乙腈中的溶解度，使乙腈相中残留农药重新分配到石油醚相中。
在弗罗里硅土吸附柱上将溶液中残留农药从样品共提物中分离出来；用极性递增的淋洗液将柱上的农药残留洗脱下来。
②.测定脂肪量
净化方法可用于≤3g脂肪。
从提取的脂肪溶液中蒸发掉溶剂后，按下列操作步骤之一来测定提取的脂肪量：
当样品中总脂肪含量＞3g时，并且分析的残留农药是不易挥发的，可用少量石油醚将浓缩提取液转移到已称量的烧杯中，用干空气流在蒸汽温度下吹干。
称量并记录提取脂肪的质量。
取≤3g的脂肪用于净化。
按下式计算分析样品的重量：
当已知样品中的脂肪含量＜3g时，不必进一步蒸发溶剂，净化全部脂肪溶液样品。
以原样重量为分析样品重量。
当已知脂肪含量＞3g或者残留水平很高时，不必进一步蒸发溶剂，取已知、适量体积的提取溶液，转入已称量的烧杯中。
蒸掉溶剂，称量测定脂肪含量。
净化含有≤3g脂肪，按下式计算分析样品的重量：
当需要分析挥发性物质时，不能在蒸汽浴的温度下蒸发石油醚。
取已知、适量体积的溶液，转移到已称重的烧杯中。
蒸掉溶剂，称量测定脂肪含量。
净化剩余的溶液或适量的部分试样。
按下式计算分析样品的重量：
×样品重量
③.乙腈/石油醚液液分配
称取≤3g脂肪放入125mL的分液漏斗中，添加石油醚使分液漏斗中的脂肪和石油醚总体积为15ml。
如果液-液分配时，出现产生乳化现象的趋势时，石油醚用量可更少。
加入石油醚饱和的乙腈30mL，剧烈振摇1min，静止分层，将乙腈相转入已预先加入650mL水、40mL饱和氯化钠和100mL石油醚的1L分液漏斗中。
在125mL分液漏斗中用以石油醚饱和的乙腈每次30mL提取石油醚3次，每次剧烈振摇1min，将全部提取液合并于1L的分液漏斗中。
将1L的分液漏斗横置，充分混合30—45秒，静止分层。
水相转入第二个1L的分液漏斗。
在第二个1L的分液漏斗中加石油醚100mL，剧烈振摇15秒，静止分层。
弃去水相，将石油醚相合并到原先的1L分液漏斗中，并用100mL×2水洗涤。
弃去洗涤液，将石油醚相通过25mm×50mm的无水硫酸钠柱子转入K-D瓶中。
用10mL×3的石油醚依次淋洗分液漏斗和无水硫酸钠柱。
在K-D瓶中加入沸石，将合并的提取液和淋洗液浓缩至5-10mL转移到弗罗里硅土柱，净化。
④.弗罗里硅土柱净化
●方法一：
在内径为22mm的层析柱中加活化过的弗罗里硅土约10cm（或按月桂酸值计算用量），再加约的无水硫酸钠。
用40-50mL石油醚预湿柱子，用可定容或刻度接收瓶的K-D瓶接受淋洗液。
将样品的提取溶液转移到层析柱上，以约5mL/min的速度通过层析柱。
用2次5mL石油醚润洗容器和硫酸钠（如果有无水硫酸钠），将润洗液转入柱子，另取少量石油醚淋洗层析柱壁。
用200mL6%乙醚/石油醚的淋洗液以约5mL/min的速度淋洗层析柱；更换K-D瓶，用200mL15%乙醚/石油醚的淋洗液以约5ml/min的速度淋洗层析柱；更换K-D瓶，用200mL50%乙醚/石油醚的淋洗液以约5ml/min的速度淋洗层析柱。
在K-D瓶中加入沸石，将每一种淋洗液浓缩至适当体积，待测。
需要体积＜5mL时，最后的蒸发过程中，接收瓶连接二球微型Snyder或Vigreaux柱。
第一种淋洗液（6%乙醚/石油醚）通常无需进一步净化就可用于GLC检测。
●方法二
原理：
用二氯甲烷、正己烷和乙腈的混合溶液淋洗弗罗里硅土柱。
尽管层析柱中的90%的脂肪都能被第三种淋洗液淋洗下来，但结果表明第二种淋洗液比方法一中第二种淋洗液的淋洗效果更为干净。
与方法一相比本方法中的3种淋洗液可淋洗极性更大的农药。
本方法更实用于脂类和油类的分析、硫丹残留分析以及环氧七氯和环氧八氯的分离。
淋洗液：
淋洗液1：
20%二氯甲烷/正己烷（V/V）。
用正己烷稀释200mL二氯甲烷，混合物达室温时，用正己烷定容至1L。
淋洗液2：
50%二氯甲烷/%乙腈/%正己烷（V/V/V）。
吸取乙腈加入500mL二氯甲烷中，用正己烷稀释。
混合达室温时，用正己烷定容至1L。
淋洗液3：
50%二氯甲烷/%乙腈/%正己烷（V/V/V）。
吸取15mL乙腈加入500mL二氯甲烷中，用正己烷稀释。
混合达室温时，用正己烷定容至1L。
净化步骤：
除弗罗里硅土净化按如下所述的步骤外，其余按方法一完成。
在内径为22mm的层析柱中加活化的弗罗里硅土10cm（或按月桂酸值计算用量），再添加约的无水硫酸钠。
用40-50mL石油醚预淋柱子，用可定容或刻度接收瓶的K-D瓶接接收淋洗液。
将样品提取溶液转移到层析柱上，并以约5mL/min的速度通过层析柱。
用5mL×2正己烷润洗容器和硫酸钠（如果有无水硫酸钠），将润洗液转入柱中，另取少量正己烷淋洗层析柱壁。
用200mL淋洗液1以约5mL/min的速度淋洗层析柱。
更换K-D瓶，用200mL淋洗液2以约5mL/min的速度淋洗层析柱。
更换K-D瓶，用200m淋洗液3以约5mL/min的速度淋洗层析柱。
在K-D瓶中加入沸石，将每一种淋洗液浓缩至适当体积。
需要体积＜5mL时，在蒸发过程中，使用二球微型Snyder或Vigreaux柱。
●方法三
原理：
用乙醚/石油醚混合物淋洗前，用石油醚淋洗弗罗里硅土，可使多氯联苯与大多数的残留农药分离。
净化步骤说明：
除在用6%乙醚/石油醚的淋洗液淋洗弗罗里硅土柱之前插入以下步骤外，其余按方法一完成。
用250mL石油醚以约5mL/min的速度淋洗层析柱，更换K-D瓶。
3.测定
为最大幅度地检出提取液中的农药残留，将浓缩后定容的提取液不净化直接以气相色谱选择性检测器测定。
然后如前净化后再选择以下方法测定。
方法一：
100%甲基硅氧烷，200℃，ECD
适用性
检测方法适用于含卤素、硫素残留，或其它亲电子的残留物，是一个广泛性检测体系，但易于受杂质的干扰。
色谱柱
大口径毛细管柱，30m×.，涂布100%甲基硅氧烷，替代聚硅氧烷固定液，膜厚1~μm，交联结合，如，DB-1。
操作条件：
柱温：
200℃，恒温；如果需要，调节温度使得p，p`-DDT相对保留时间为±。
载气：
氦气；调节气流速使毒死蜱在约±流出（约20mL/min）。
进样口温度：
220-250℃
电子捕获检测器（ECD）：
350℃
尾吹气：
氮气或氩气/甲烷（95∶5），流速为30mL/min
调节检测器的电子放大器或衰减
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