激光共聚焦显微镜FV1000中文说明书.docx
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激光共聚焦显微镜FV1000中文说明书
激光共聚焦显微镜
FV1000
（倒置-光谱扫描型显微镜I-X81）简易使用说明书
启动系统显微镜镜下观察
3
内容
微分干涉差观察4荧光观察5取图的操作界面
6
如何取图
XY平面单标7
XY平面双标同步扫描方式
10序列扫描方式13
XY平面
单标+微分干涉差16XYZ扫描双标19
XYL光谱扫描21
2D操作界面
24图像分析
保存到CD-R
36关闭系统
37附录
38
开启系统
1.打开计算机.
2.打开激光器.
（打开钥匙开关.）
2-1.多线氩离子（458nm,488nm,
514nm）ON
2-2.氦氖绿（543nm）ON
2-3.氦氖红（633nm）ON
3.
打开汞灯电源开关.
4.登陆WindowsXP系统.
UserID:
Administrator
Password:
fluoview
5.双击快捷方式：
打开FV10-ASW应用软件.
UserID:
AdministratorPassword:
Administrator
*系统软件的启动需要等待一定时间.
显微镜镜下观察
④④微分干涉差观察④④
1.
使用手控面板选择物镜.
（参照④Memo④.）
2.插入起偏镜.
3.插入微分干涉滑块.
4.点击FV10-ASW软件中的图标.
Note1.使用TD滑块控制卤素灯的光强.
Note2.检查滤色片转盘的位置是否为“6.DICT”.
如果不是,用手柄按下DICT图标.
5.标本聚焦.
Note1
显微镜镜下观察
④④荧光观察④④
Note1.选择第3步后,显微镜进入荧光观察状态.
注意此时汞灯的机械快门要打开.（建议通常机械快门要放在关闭的位置（z）.）
Note2.检查DIC滑块是否拉出.
Note3.观察之前，检查汞灯的机械快门要放在开启的位置（{）.
1.
使用手控面板选择物镜.
2.点击FV10-ASW软件中的图标.
3.使用手控面板选择荧光滤色片.
（参照④Memo④.）
4.标本聚焦.
取图的操作界面
扫描模式扫描速度像素数缩放和平移
④④获取单张图像（XY平面）（荧光图像）④④例：
绿色荧光染色（FITC）
1.
点击FV10-ASW软件中的按钮
关闭汞灯快门.同时,点击按钮
关闭卤素灯快门.
2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.
*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.
3.点击Apply按钮.
（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）
7.
选择AutoHV,并选择扫描速度.
*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.
（也可以使用Kalmanaccumulation方式.
更多的信息，参照附录2.）
8.点击XY按钮取得一幅图像.
9.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
10.保存该幅图像:
右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.
（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）
④④获取单张图像（XY平面）（荧光图像）④④
例：
绿色荧光（Alexa488）＋红色荧光（Alexa546）二重染色
1.
点击FV10-ASW软件中的按钮
关闭汞灯快门.同时,点击按钮
关闭卤素灯快门.
2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.
*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.
3.点击Apply按钮.
（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）
7.
选择AutoHV,并选择扫描速度.
*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.
（也可以使用Kalmanaccumulation方式.
更多的信息，参照附录2.）
8.点击XY按钮取得一幅图像.
9.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
10.保存该幅图像:
右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.
（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）
④④获取单张图像（XY平面）（荧光图像）④④
例：
绿色荧光（Alexa488）＋红色荧光（Alexa546）二重染色序列扫描（这里介绍线序列扫描.）
1.
点击FV10-ASW软件中的按钮
关闭汞灯快门.同时,点击按钮
关闭卤素灯快门.
2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.
*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.
3.点击Apply按钮.
（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）
8.
选择AutoHV,并选择扫描速度.
*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.
（也可以使用Kalmanaccumulation方式.
更多的信息，参照附录2.）
9.点击XY按钮取得一幅图像.
10.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
11.保存该幅图像:
右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.
（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）
（XY平面-单标+微分干涉差）
④④获取单张图像（XY平面）
（荧光图像＋微分干涉）④④例：
绿色荧光（FITC）+DIC图像
1.
点击FV10-ASW软件中的按钮
关闭汞灯快门.同时,点击按钮
关闭卤素灯快门.
2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.
*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.
3.点击Apply按钮.
（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）
4.选择TD1.
（XY平面-单标+微分干涉差）
8.选择AutoHV,并选择扫描速度.
*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.
（也可以使用Kalmanaccumulation方式.
更多的信息，参照附录2.）
9.点击XY按钮取得一幅图像.
10.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
11.保存该幅图像:
右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.
（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）
（XYZ扫描-双标）
④④获取3D图像（XYZ）
（荧光图像）④④
例:
绿色荧光（FITC）和红色荧光（Rhodamine）双标这里介绍线序列扫描取图的过程.
1.
采用13和14页步骤1到7.
确定Z轴的上限和下限如下.
2.输入StepSize大小（点击OP按钮可以使用推荐的值）,并选择
.
3.点击XYRepeat按钮开始扫描.
4.点击
按钮上移焦点位置.
（参照④Memo④.）
5.当图像显示到达上限时,点击Set按钮确定.
6.点击
按钮下移焦点位置.
（参照④Memo④.）
7.当图像显示到达下限时,点击Set按钮确定.
8.点击Stop按钮停止扫描.
（XYZ扫描-双标）
9.
选择AutoHV,并选择扫描速度.
*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.
（也可以使用Kalmanaccumulation方式.
更多的信息，参照附录2.）
10.选择Depth按钮.
11.点击XYZ按钮取得图像.
12.点击SeriesDone按钮,“2DView-
LiveImage（x）”2D界面就出现.
13.保存该幅图像:
右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.
（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）
④④获取光谱图像（XYL）④④例:
绿色荧光（AlexaFluor488）和
*可以通过调用扫描状态来实现该设置.更多的信息,参照附录5.
4.
点击按钮
出现光谱设置窗口.
5.设置CHS1光谱带宽为10nm,以此为例.
（参照附录4关于改变光谱带宽的方法.）
6.点击XYRepeat按钮开始扫描.
7.在观察图像的同时,移动光谱带到图像
最亮的位置状态.
（参照附录4关于改变光谱带宽的方法.）
注:
移动光谱带位置要保持光谱带宽为10nm不变.
8.调节图像.
（参照附录1.）
9.点击Stop按钮停止扫描.
10.
选择AutoHV,并选择扫描速度.
*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.
（也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.）
11.设定要扫描的波长范围,光谱带宽和步距.
•Start=开始波长
•End=结束波长
•Resolution=光谱带宽
•StepSize=步距
12.选择Lambda按钮.
13.点击XYL按钮取得图像.
14.点击SeriesDone按钮,“2DViewLiveImage（x）”2D界面就出现.
15.保存该幅图像:
右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像..
（保存为“oib”和"oif"类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）
2D的操作界面
网格箭头比例尺点颜色条
图像分析（打开文件）
1
1.双击资源管理器中要选择打开的文件.
（3D图像的叠加）
1.
点击按钮
并选择
.
2.要保存此图像,右击此图像,选择Save
Display并命名.
（比例尺的使用）
1.
点击按钮
.
2.点击图像的同时,拖放此比例尺到一个特定的位置.
3.点击手柄的左端或右端,移动鼠标.改变比例尺的大小
4.选择比例尺并右击选择属性的设置.
5.设置具体的比例尺属性.
改变文本,颜色,字体等.
（3D图像的重建）
以一定的角度观察3D图像
1.点击按钮
.
2.创建3D图像.
3.拖动鼠标以一定的角度观察图像.
→要保存此图像,进行下一页第6步的操作.
观察3D图像的某个横截面
4.点击按钮
并选定
.
5.拖动鼠标观察某个垂直横断面.
→要保存此图像,进行下一页第6步的操作.
（3D图像的重建
保存上一页中第3、5选项的图像
6.点击按钮
.
7.会创建一个2D图像（带文件名）.
8.保存该幅图像:
右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.
（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）
（3D图像的旋转
1.
点击按钮
.
2.创建3D图像.
3.拖动鼠标以一定的角度观察图像.
动画的播放
4.点击并控制按钮实现图像围绕着X-轴旋转.
再次点击停止旋转.
点击并控制按钮实现图像围绕着Y-轴旋转.
再次点击停止旋转.
点击并控制按钮
实现图像围绕着Z-轴旋转.
再次点击停止旋转.
（3D图像的旋转
I.每种荧光染料的定位都很明显的情形
基于XYL图像中类似荧光光谱相连的原则,通过已知的每种荧光染料的定位分解光谱并得到图像.
II.基于使用单标样品作参照的情形从单标记的XYL图像中取出单个荧光光谱作为参照,进行光谱的分解并得到图像.
例:
绿色荧光（AlexaFluor488）和绿色荧光（YOYO-1）双标
1.
打开一幅AlexaFluor488单标取样的XYL图像.
2.为AlexaFluor488选定一个封闭的区域.
3.从Processing下拉菜单中选择
SpectralDeconvolution图标.
4.双击ROI1区域.
5.点击SaveProfile图标.
6.输入保存的名字并且点击OK按钮将
AlexaFluor488的光谱记载到数据库中.
7.对于YOYO1单标,重复1-6步.
II.基于使用单标样品作参照的情形
8.
打开一幅AlexaFluor488和YOYO1双标的XYL图像.
9.从Processing下拉菜单中选择
SpectralDeconvolution图标.
10.双击数据库中记载的AlexaFluor488和YOYO1图标.
11.检查处理类型设置为“Normal”并且点击Execute按钮.
12.获得图像.
III.基于只知道一定数量标记的荧光染料的情形
（BlindUnmixing）
基于XYL图像中类似荧光光谱相连的原则,通过已知的一定数量的荧光标记分解光谱并得到图像.
（保存图像）
XY或者XYZ图像的每个通道存为
TIFF格式的文件
XY或者XYZ通道合并的图像存为
TIFF格式的文件
带有比例尺的图像存为BMP格式的文件
动态图像存为AVI格式的文件
1.
右击图像管理器中显示的图像图标,选择另存为保存该幅图像..
2.设置Saveas类型为TIFF并保存.
*存为BMP和JPEG格式也可以.
1.右击图像管理器中显示的图像图标,选择另存为保存该幅图像..
2.设置Saveas类型为TIFF并保存.
3.检查要合并的通道并保存.
*存为BMP和JPEG格式也可以.
**********************************************************************************
1.右击该幅图像.
2.选择SaveDisplay并以新的文件名保存该幅图像.
1.右击该图像.
2.选择SaveasAVI并以新的文件名保存该图像.
保存到CD-R
1.
插入一张CD-R光盘.
2.点击OK.
3.选择文件并拖放到CD-R的窗口.
4.点击"WritethesefilestoCD."
5.点击Next.
6.开始刻录.
7.点击Finish按钮结束.
关闭系统
1.
选择File/Exit,退出FV10-ASW软件.
2.退出WindowsXP.
（1）选择Start/ShutDown.
（2）在ShutDown窗口中,选择ShutDown并点击OK按钮.
3.关闭激光器.
（关闭钥匙开关.）
3-1.多线氩离子（458nm,488nm,
514nm）OFF
3-2.氦氖绿（543nm）OFF
3-3.氦氖红（633nm）OFF
4.关闭汞灯电源.
激光共聚焦显微镜
FV1000
（倒置-光谱扫描型显微镜I-X81）附录
附录1
④④共聚焦的原理和调节原理④④
附录2
④④获取图像如何降低背景噪音④④
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