半数致死量的测定.docx
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半数致死量的测定
半数致死量的测定
实验一半数致死量的测定
半数致死量（LD50）是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。
它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。
由于生物间存在个体差异性，因此LD50需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得，并且每种药物不同实验对象的LD50值不相同。
测定LD50的方法很多，如目测机率单位法、直线回归法、累计法及序贯法等。
由于寇氏法较常用，
并有计算简便，结果较准确等特点，故专门介绍之。
[目的]用寇氏法测定敌百虫对小白鼠的经腹腔注射的LD50和95％可信限。
[方法]寇氏法（K?
rbar氏法）
[条件]
1剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。
2各组动物数应相等。
3“反应”应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率（Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%；
如果Pn<20%或Pm>80%需用校正公式计算；如Pn>20%或Pm<80%则不能用此法计算。
[步骤]
1预备实验
（1）摸索上下限：
即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量（Dm）和一个动物也不死亡的最大剂量（Dn）。
方法是据经验或文献定出一个估计量，观察2~3只动物的死亡情况。
如全死，则降低剂量；如全不死，则加大剂量再行摸索，
直到找出Pm=100%和Pn=0%的剂量，此两量分别为上下限。
（2）确定组数，组距及各组剂量
①组数：
一般5～8组，可根据适宜的组距确定组数，如先确定5组，若组距过大，可再增加组数以缩小组距。
有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。
②组距：
指相邻两组剂量对数之差，常用“d”来表示。
D不宜过大，因过大可使标准误增大；也不宜过小，因过小则组数增多，
各组间死亡率重叠造成实验动物的浪费。
组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。
敏感性大者，死亡率随剂量增加（或减少）
而增加（或减少）的幅度大，组距可小些；反之，敏感性小者，死亡率随剂量变化的幅度小，则组距应大些。
上下限之间的距离可作为
敏感性大小的标志。
距离大，说明敏感性小；距离小，则说明敏感性大。
一般要求d应小于0.155，多在0.08～0.1之间。
③确定组距方法：
把上下限的剂量换算成对数值，设上限剂量的对数值为Xk，下限剂量的对数值为X1，组数为G，则：
d＝（Xk-X1）/（G-1）
④确定各组剂量：
由X1逐次加d（或由Xk逐次减d），得出各组剂量的对数值，再分别查反对数，
即得出各组剂量（呈等比级数排列）。
．
（
3
）配制等比药液，并使每只动物在给药容量上相等（如
0.5ml/20g
）。
⒉正式实验
（
1
）实验动物的选择与分组
①选择原则：
可根据不同实验而选取动物，应选择对被试因素敏感的动物。
同时也应考虑动物来源，经济价值及操作简便等条件。
LD50
常用小白鼠进行实验来测得。
②分组原则：
每组动物数必须多于组数。
因为每组动物数如少于组数，就不能充分反映各组死亡率的差别。
（如共
8
组，
每组
10
只动物，高剂量三个组的死亡数分别为
6
、
9
、
10
，但如果每组只用
6
只动物，则高剂量三个组的死亡数可能都是
6
。
）
③分组方法：
见附录，实验对象分组法。
首先，按性别将动物雌雄分开或各半混合编组，然后按体重分群，再随机分组，为求使各组平均体重相等。
（
2
）给药、观察死亡数、求出死亡率
①给药途径：
可据不同药物及动物而定，小白鼠多用腹腔注射或灌胃法；也可静脉注射。
②给药顺序：
宜采取间隔跳组方法
。
如共
7
组，先按
2
、
4
、
6
组顺序给药，然后逆行按
7
、
5
、
3
、
1
组的顺序给药。
这样可避免药物放置过久或动物饥饿造成的偏向性误差。
而且当第
3
组给药后，如第
2
组动物已经全死，则可省下第
1
组动物及
1
号药液。
如第
7
组已死亡，可补做第
8
组，争取做出
0
﹪死亡率的组来。
每只动物的给药容量可按个体体重或平均体重确定。
③观察时间：
直到动物不再因药物作用而死亡为止。
在观察期间应注意保证食、水、温度等生活条件，严防非被试因素引起的死亡。
最后将死亡情况及各种数据填入下表中。
LD50
计算表
组别
剂量
对数剂量
动物数
死亡数
死亡率
P
（
P-1
）
（
mg∕kg）
XinrP（r∕n）
∑
3.计算公式
①基本公式㏒LD50＝XK－d（∑P-0.5）
式中：
XK死亡率为100﹪组的对数剂量
d对数组距
∑P各组死亡率之和
②校正公式
当Pm>0.8或Pn<0.2时可用下公式计算
3-Pm-Pn
㏒LD50＝XK－d（∑P-─────）
4
③LD50＝㏒-1㏒LD50，单位应换算成mg∕kg或g∕kg表示。
④95％可信限：
LD50±4.5S㏒LD50.LD50
S㏒LD50＝d√∑p（1-p）/（n-1）
式中：
S㏒LD50㏒LD50的标准误
P各组死亡率
n每组动物数
[测定LD50的原理及公式来源]
为了解LD50测定原理，首先需了解剂量与反应的关系。
某被试因素对动物的毒性也是一种反应，
其大小往往以其使动物致死的量表示。
致死量小说明毒性大，反之说明毒性小。
根据剂量与反应的关系，
可绘出剂量反应曲线（量效曲线）。
图中表示的是以死亡频数和死亡率为反应指标的质反应量效曲线，它们具有如
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