水痘带状疱疹 IgM.docx
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水痘带状疱疹IgM
产品注册证号：
3400298
赛润ELISAclassic
水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
德国维润赛润研发有限公司北京代表处
北京建国门北大街8号华润大厦2503B
邮编：
100005
电话：
+86.（0）10.85192070
传真：
+86.（0）10.85192071
电子邮件：
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网址：
http:
//www.virion-
水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
赛润ELISAclassic
目录
1.名称
2.用途
3.诊断意义
4.说明
5.赛润ELISAclassic-检测原理
6.试剂盒组成
7..检测所需物质，试剂盒未提供
8.储存和稳定性
9.赛润ELISAclassic的检验步骤
9.1注意事项
9.2样品准备和储存
9.3试剂盒反应试剂的准备
9.4检测程序概要
9.5检测过程
10.检测结果评估
10.14PL单点定量法
10.2检验有效性标准
10.3计算赛润ELISAclassic水痘-带状疱疹病毒IgM（定量）
10.4检测结果分析
11.性能特性
11.1重复性
11.2敏感性和特异性
12.有效期
13.警告
13.1警告和安全措施
13.2废料处理
14.参考文献
15.制造商名称、地址及联系方式
水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）
赛润ELISAclassic
酶联免疫法测定人体抗体（IgM）
-只限用于体外诊断-
1.名称
通用名：
水痘-带状疱疹病毒IgM试剂盒（定量）
英文名：
Varicella–ZosterVirusIgM（quant.）
商品名：
赛润ELISAclassic水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）
汉语拼音：
SerionELISAclassicshuidou-daizhuangpaozhenbingduIgMkangtidingliangjianceshijihe（meilianmianyifa）
产品编号:
ESR104M
检测评估标准:
DadeBehringBEP®III/BEP®2000,DSX,手动操作
1.用途
用于定量检测人血清、脑脊液或血浆中的抗带状疱疹病毒（VZV）的抗体。
2.诊断意义
赛润ELISAclassic带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒主要用于定量检测人血清、脑脊液或血浆中的抗带状疱疹病毒（VZV）的抗体。
IgM试剂盒用于急性感染的诊断，而IgG试剂则用于急性和近期感染的诊断、脑脊液中的抗体检测、与移植手术相关的免疫状态的确定以及鉴别诊断。
带状疱疹病毒再激活期间可检测到IgA抗体的存在。
带状疱疹病毒，与单纯疱疹病毒（HSV）、巨细胞病毒（CMV）及非洲淋巴细胞瘤病毒（Epstein-Barr病毒，EBV）一样，都属于对人类有致病性的疱疹病毒。
这种高传染性病毒的主要传播方式是液滴传播（污染的气溶胶）或污染物传播（如含病毒的小囊泡或焦痂）。
水痘病毒遍布世界各地，在气侯温和的地区，秋冬季节可以发现累积的季节性感染。
大多数学龄前儿童都有过初次感染的经历，95%的成年人会呈现血清学阳性。
感染病人的传染是在皮疹出现前1-2天开始，而大约在皮疹出完后第7天终止。
病毒会在脊髓神经节内持续存在，当机体免疫力下降时病毒可能会引起复发感染。
潜伏期为2-3周，带状疱疹病毒初期感染后，一般要经过一个有非特异性症状的、很短的前驱期，才会出现临床症状—水痘。
在疾病的不同发展阶段，多形态的皮疹会很痒，经常发展成丘疹、小泡和焦痂，对儿童来说这种情况是很典型的。
虽然病症一般是良性的，但几乎所有的高风险病人都可能出现并发症（初期免疫抑制病人、1岁以下的婴幼儿和老年人）。
VZV感染可能会引发非常严重的并发症，主要包括重度细菌性感染、水痘性肺炎、各种中枢神经系统炎症如脑炎、无菌性脑膜炎、格林-巴利综合征、莱耶综合征、以及心肌炎、肾小球肾炎、胃肠道炎症和肝炎等。
孕妇感染VZV病毒时，如果在怀孕期前20周内发病，病毒可能会经胎盘传播导致胎儿先天性水痘综合征，出生前5天内和出生后2天感染对孩子是非常危险的。
围产期出水痘将引发很严重的症状，死亡率高达30%。
体内病毒的复发感染可能产生带状疱疹的临床表现。
大多数50岁以上的病人，会导致身体一侧皮肤出现疱疹，并伴有严重的疼痛，后期疱疹的神经痛可能会持续很长时间；免疫缺陷的病人中带状疱疹感染很普遍，而且症状也比较严重。
带状疱疹病毒感染应尽早得到有效控制以防止并发症的出现，而出水痘通常标志着病情已经好转。
对于可能有感染风险的人群（患有恶性肿瘤或免疫缺陷的儿童、医学相关领域内的职业人员、计划怀孕但血清学呈阴性的妇女），活疫苗的接种是有严格限制的。
对于暴露在病毒环境中的易感人群，应接种特异性的高免疫球蛋白作为被动的免疫预防手段。
对于没有典型的临床表现或症状不明显的病人，可疑VZV感染的诊断应该通过试验室检测来确诊，特别是孕妇和新生儿的VZV感染、免疫缺陷病人的非典型感染以及中枢神经系统的VZV感染（如：
面部神经轻瘫的鉴别诊断）。
带状疱疹病毒的病毒直接检测是采用PCR试验。
IgG、IgM和/或IgA的增加都可用于带状疱疹的血清学诊断。
其中VZVIgA检测是最敏感的，而IgM增加的检出率只有50%左右，在复发感染时IgM浓度一般很低，能被检出的时期很短。
对于带状疱疹病毒特异性的IgG、IgM和IgA抗体，ELISA试验是常规的检测方法。
IgG抗体水平、IgM和/或IgA抗体的检出为带状疱疹的血清学诊断奠定了基础，VZVIgA检测是最敏感的，而IgM抗体的检出率只有50%左右，在复发感染时IgM抗体浓度一般很低，能被检出的时期很短。
病毒的再激活或重复暴露在病毒环境中会激发体内的免疫功能增强。
VZV初期感染或复发感染后，会产生特异性的IgA抗体。
中度免疫抑制的病人如各种病原体感染时、怀孕期间都会使病毒再激活，进而导致机体免疫反应增强，IgA抗体滴度升高，但不一定会加重临床症状。
据文献报道，以糖蛋白为抗原建立的中和VZV抗体检测系统与中和试验有很好的相关性。
在赛润ELISAclassicVZVIgG检测中，抗体的活性单位采用国际单位（IU），因此不同试验室之间的检测结果可以相互对比。
糖蛋白抗原的应用使相关的免疫保护具有更重要的意义。
4.说明
本说明书除水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检测的内容外，还涉及到IgG和IgA抗体的定量检测，以及对结果的分析等。
5.赛润ELISAclassic-检验原理
用抗原包被微量板孔，制成固相载体。
将病人血清加到微量板孔内，特异性抗体与抗原结合到固相载体上。
除去未结合的物质，加入酶（碱性磷酸脂酶）标记的抗人IgG或IgA或IgM，与免疫复合物结合。
洗去未结合的标记物，加入相应底物（对氨基苯磷酸盐）其与酶结合的免疫复合物反应，产生有颜色产物,颜色强度与特异性抗体成正比，并能用分光光度计定量。
6.试剂盒的组成
试验成分
IgG试剂盒IgM试剂盒IgA试剂盒
数量/剂量
微孔条（此微孔条可拆下单独使用，每条有8孔，共96孔，已经包被了抗原）
1个微孔条框架
包被的抗原为灭活抗原
121212
标准血清（立即可用）
人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
染色剂：
紫红色O
2×2毫升2×2毫升2×2毫升
阴性对照血清（立即可用）
人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
染色剂：
里沙明绿V
1×2毫升1×2毫升1×2毫升
酶标记的抗人IgG,IgA,IgM（立即可用）
羊抗人IgG,IgA,IgM（多克隆），标记碱性磷酸酶后在蛋白稳定剂中储存。
防腐剂:
0.01%甲基异噻唑啉酮
0.01%溴化硝基二垩烷
13毫升13毫升13毫升
浓缩洗液（可稀释至1000毫升）
氯化钠溶液，含吐温20和30mMTris
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
1×33.3毫升1×33.3毫升1×33.3毫升
稀释缓冲液
磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温20
防腐剂：
<0.1%叠氮化钠
0.01克/升的溴酚蓝钠盐
2×50毫升2×50毫升2×50毫升
终止液
1.2N氢氧化钠
15毫升15毫升15毫升
底物（立即可用）
对硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液
防腐剂：
<0.1%的叠氮化钠
（未开封瓶子中的底物可能会轻微变黄，但不会影响其质量）
13毫升13毫升13毫升
带有标准曲线和评估表的质量控制文件
（抗体以IU/毫升或U/毫升计量）
111
7.其它检测所需物质
-普通实验室所需的仪器装置
-IgM检测：
另需赛润含对照抗原的类风湿因子Rf–吸附剂（Rf–吸附剂/对照抗原；产品编号T200/20ml）
-分光光度计，波长405纳米，建议参考波长范围620纳米-690纳米（例如650纳米）
-37℃温箱
-湿盒
-蒸馏水
8.储存及稳定性
试剂
储存
稳定性
微孔条（包被抗原）
开封后放在2-8℃装有干燥剂的密封铝箔袋中。
4星期
对照血清/标准血清
开封后保存于2-8℃。
有效期内；
酶标记抗体
立即可用的溶液于2-8℃储存。
避免污染（使用无菌枪尖）。
有效期内
稀释缓冲液
开启后于2-8℃储存。
有絮状沉淀时丢掉
未开封
有效期内
洗涤液
浓缩液开封后保存于2-8℃。
工作液在2-8℃。
工作液在室温下。
盛过工作液的瓶子应按常规方法清洗，并丢弃混浊溶液。
有效期内
2星期
1星期
底物
2-8℃储存，避光。
避免污染（使用无菌枪尖）。
当溶液变为黄色时应予以丢弃（水作空白，吸光度大于0.25时）。
有效期内
终止液
开封后保存于室温下。
有效期内
9.赛润ELISAclassic的检验步骤
9.1注意事项
只有全部使用赛润ELISAclassic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。
尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。
稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润ELISAclassic试剂盒。
针对每一个免疫球蛋白种类都有三个不同的酶标记物浓度：
低、中、高。
酶标记物的分级通过以下的标志在标签上显示：
比如：
IgG+低浓度IgG酶标记物
IgG++中浓度IgG酶标记物
IgG+++高浓度IgG酶标记物
为了保证我们试剂盒的惯常质量，在极少数情况下需要使用特殊酶标记物。
这些试剂盒中的酶标记物会有一个特殊批号并且不用“+”标志。
因此，这些特殊酶标记物是不可以和其它酶标记物交换使用的。
请您每次都注意标签上的标注！
ELISAclassic试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。
应在未开封的情况下，保存于2-8℃，并在有效期（见标签说明）内使用。
详细的稳定性和储存资料在“8.储存及稳定性”内将加以详述。
每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。
这些试剂如果未经规定被稀释或改动都会导致检测的敏感性的降低。
在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。
所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，避免试剂受到微生物污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
请从标记处剪开密封袋。
如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。
开始试验前，将所有试剂置于室温。
从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。
为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，，吸头应确保不接触孔壁或喷洒于小孔的外面，注意不要盖错瓶盖或管盖。
试验中试剂的充分混合，对于检测结果的重复性至关重要。
在取用对照品和酶标记物之前应摇动容器使其充分混匀，加样前，使用单向振动器充分混匀稀释过的标本。
小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。
请注意在吸取标本/对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果长，将会导致不同的“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。
只有严格遵守赛润ELISAclassic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。
如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。
洗涤不充分将影响试验结果：
应该小心进行洗涤。
洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米）指导手册进行，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。
洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。
避免产生泡沫！
如果使用自动洗板机，注意正确操作。
9.2检验前的准备工作和储存
避免使用高血脂、溶血或黄疸的标本，尽管在我们的检测中没有发现有副影响。
明显被污染的标本（血清或血浆）不能用于检测。
依照标准实验室方法采集血清或血浆标本（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）
标本不应加热灭活。
9.2.1样品稀释
赛润ELISAclassic带状疱疹病毒IgG/IgA
开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2）：
V1+V2=1+100加10微升患者待测样品
于1000微升稀释缓冲液
稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混匀。
类风湿因子的干扰的排除
类风湿因子抗体是IgM型的自身抗体，可与IgG免疫复合物结合。
非特异性类风湿因子抗体的存在将导致IgM检测的假阳性结果。
另外，也存在弱结合的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。
在这种情况下，IgM的检测将得到假阴性的结果。
因此，在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。
特别类风湿因子Rf—吸附剂（产品编号T200,20ml）不仅包含抗人IgG抗体，还含有一定量的对照抗原。
对照抗原同时能与类风湿因子及可识别宿主细胞膜成份的抗体结合。
因此，无须再进行微量孔包被对照抗原的平行试验。
在进行以下SERIONELISAclassicIgM检测时，此类RF—吸附剂需作为附加试剂另行购买:
巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒
首先应该使用稀释缓冲液（V2）对类风湿因子吸附剂（Rf-吸附剂/对照抗原）（V1）进行如下稀释：
V1+V2=1+4加200微升Rf-吸附剂/对照抗原
于800微升稀释缓冲液中
然后将患者的待测样品（V1）在此Rf-稀释缓冲液（V3）中进行稀释：
V1+V3=1+100加10微升患者待测样品
于1000微升Rf-稀释缓冲液中
9.2.2样品储存
密封的患者样品可在冰箱中2-8℃保存7天。
≤-20℃可保存更久。
避免样品反复冻融。
已稀释的样品可在2-8℃保存一星期。
9.3试剂盒反应试剂的准备
9.3.1微孔条
微孔条排列于板中，并与干燥剂一同封于铝袋内。
未使用的微孔条重新放入铝袋，密封好，确保铝袋的密封性。
7.3.2对照血清/标准血清
对照和标准血清可直接使用，不必进一步稀释
每次试验或是试验体系，无论检测用的微孔板数目多少，均应包括空白对照孔，阴性对照孔和标准血清孔，且标准血清应加两孔。
不要用RF吸附剂处理对照血清！
9.3.3抗人IgG,IgA或IgM抗体，用AP标记（备用）
禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合使用。
同一试剂盒才能达到最佳检测效果。
为了避免酶标记物的污染（请使用时先一次性取出实验所需量置于一容器中，避免反复从试剂瓶中吸取试剂。
9.3.4洗液
以1：
30稀释浓缩洗涤缓冲液（V1）至体积V2。
例如：
浓缩缓冲液（V1）
终体积（V2）
33.3毫升
1000毫升
1.0毫升
30毫升
9.3.5样品的稀释缓冲液（即用）
9.3.6底物（即用）
试验时戴手套以避免污染。
必须以无菌枪尖吸取底物溶液。
9.3.7终止液（即用）
9.4检测程序概要
水痘-带状疱疹病毒
IgG/IgA/IgM定量
样品稀释液（患者样本）
1+100
将稀释的样本，和立即可用的对照血清/标准血清，加
到微量孔内（100微升）
孵育60分钟/37℃
湿盒中
洗涤
加入立即可用的酶标记抗体溶液（100微升）
再孵育30分钟/37℃
湿盒中
洗涤
加入底物溶液（100微升）
再孵育30分钟/37℃
湿盒中
加入终止液（100微升）
在405纳米处读消光系数
9.5检测过程
9.5.1将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张标签。
9.5.2在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的对照血清。
留一个孔为底物空白使用，例如：
定量的IgG/IgM/IgA
抗原微量孔
孔A1
孔B1
孔C1
孔D1
孔E1
底物空白
阴性对照
标准血清
标准血清
标本1……
9.5.3将样品放于湿盒内37℃（±1℃）孵育60分钟（±5分钟）。
9.5.4孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔（使用自动洗板机或手工洗板）：
-吸去或甩去洗液
-每孔内加入300微升洗液
-吸去或甩去洗液
-重复洗涤过程3次（共4次！
）
-将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体
9.5.5加入酶标记抗体。
于相应孔内（底物空白除外）加入100微升IgG/IgM/IgA酶标记抗体
9.5.6湿盒内37℃（±1℃）孵育30分钟（±1分钟）*。
9.5.7孵育后，以洗液清洗板孔（洗涤见上）
9.5.8加入底物
于每孔内加入100微升底物溶液（包括底物空白孔）
9.5.9湿盒内37℃（±1℃）孵育30分钟（±1分钟）*。
9.5.10终止反应
每孔内加入100微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。
9.5.11读取消光度
以底物空白为空白对照液，60分钟内读取405纳米的OD值，建议参考波长范围为620纳米-690纳米（例如650纳米）。
10．检测结果评估
赛润ELISAclassic水痘-带状疱疹病毒IgG/IgM/IgA（定量）
10.14PL单点定量法
通过利用非线性方程，可以保证根据消光信号的定量数值精确计算出抗体活性，该方程可在不对OD值进行转换的情况下调整S型曲线。
用赛润ELISAclassic试剂检测，抗体浓度可通过逻辑对数模型（4PL,4个参数）来计算，该模型对浓度曲线有很精确的适用性。
计算公式如下：
OD=A+
D-A
1+eB（C-Inconc.）
参数A、B、C和D能够反映曲线的精确形状。
1.下端渐进线参数A
2.曲线斜率参数B
3.转折点参数C
4.上端渐进线参数D
标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司（维尔茨堡市）在严格条件下经过多次试验制定的。
使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作标准曲线。
每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。
如有需要也可取得相关的评估软件。
为了校正正常试验偏差和建立试验对照，每轮试验均需使用标准血清作为对照。
该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的，在此范围内可保证抗体浓度测定的正确性。
标准血清不一定是阳性对照，且在某些ELISA试验中标准血清数值可能是临界值或阴性结果。
10.2有效性标准
- 底物空白的OD<0.25
- 阴性对照必须为阴性
- 赛润ELISAclassic定量试验：
标准血清的平均OD值必须在有效范围内，此范围在试剂盒的特异性质量控制认证书上给定（减去底物空白之后！
）
- 赛润ELISAclassic定量试验：
阳性对照的平均OD值必须在有效范围内，此范围在试剂盒的特异性质量控制认证书上给定（减去底物空白之后！
）
-OD值的变化不能超过20%
如果未达到以上标准，试验无效且必须重做。
10.3赛润ELISAclassic水痘-带状疱疹病毒IgM的定性计算（抗原/对照抗原）
IgG-抗体的活性以mIU/ml为单位表示，采用WHO标准“带状疱疹免疫球蛋白国际标准”，它的标示活性为50IU（国际单位）/小瓶。
10.3.1非自动评估
每个试剂盒内均备有一个标准曲线和一个评估表，因而每一个OD值都可得到一个抗体活性值。
标准血清的参考值和有效范围已在评估表格（质量控制证书）中给定。
所有的OD值在评估前必须先减去空白（A1）。
方法1：
定性评估
为确定临界值范围，请将已测得的标准OD平均值与质量控制证书上给出的数据相乘（见专用公式），例如：
OD=0.502xMW（STD）临界值上限
OD=0.352xMW（STD）临界值下限
如果得到的标准血清的平均消光度值是0.64,那么临界值的范围即为0.225-0.321。
方法2：
利用标准曲线进行抗体活性的连续求值。
测定间差异（指不同时间的检测差异和不同实验室的检测差异）可用校正系数F与当前测定数值相乘进行校正。
校正系数的计算公式为：
F=
（标准血清）OD参考值
（标准血清）当前测量OD值
此步骤对于校正当前检测与批次标准曲线之间的偏差是非常必要的。
首先，不同日期检测之间的差异可通过计算校正系数F进行校正。
1.计算标准血清的两次OD值的平均值，并确认是否在有效范围内。
2.校正系数“F”的计算：
用给定的参考数值除以标准血清消光数的平均值。
F=标准血清的参考消光数值/标准血清消光数的平均值
3.将测得的所有病人血清的消光数值与校正系数“F”相乘。
4.用经过校正的消光数值在标准曲线“U/ml或IU/ml”坐标轴上确定对应的抗体活性。
赛润ELISAclassic水痘-带状疱疹病毒IgG抗体的计算:
阳性结果：
>100mIU/ml
临界值结果：
50-100mIU/ml
阴性结果：
<50mIU/ml
赛润ELISAclassic水痘-带状疱疹病毒IgM抗体的计算:
阳性结果：
>15U/ml
临界值结果：
10-15U/ml
阴性结果：
<10U/ml
赛润ELISAclassic水痘-带状疱疹病毒IgA抗体的计算:
阳性结果：
>50U/ml
不确定性结果：
35-50U/ml
阴性结果：
<35U/ml
针对临界值结果的样品，应在1-2周后对相应的病人再取样，重新检测。
10.3.2利用SERIONeasybase4PL软件/SERION评估软件进行自动检测
输入四个参数和标准血清参考值之后，联机软件就会计算出抗体活性。
如果标准
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