水痘带状疱疹 IgM.docx

1、水痘带状疱疹 IgM产品注册证号：3400298 赛润ELISA classic 水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书德国维润赛润研发有限公司北京代表处北京建国门北大街8号华润大厦2503B邮编：100005 电话：+86.(0) 10.85 19 20 70传真：+86.(0) 10.85 19 20 71 电子邮件：dialogvirion-网址：http:/www.virion-水痘 - 带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书赛润 ELISA classic 目录1. 名称2. 用途3. 诊断意义4. 说明5. 赛润 ELISA classic

2、 - 检测原理6. 试剂盒组成7. .检测所需物质，试剂盒未提供8. 储存和稳定性9. 赛润 ELISA classic的检验步骤9.1注意事项9.2样品准备和储存9.3试剂盒反应试剂的准备9.4检测程序概要9.5检测过程10. 检测结果评估 10.1 4PL单点定量法10.2检验有效性标准10.3计算赛润 ELISA classic水痘 - 带状疱疹病毒IgM（定量）10.4检测结果分析11. 性能特性11.1重复性 11.2 敏感性和特异性12. 有效期13. 警告13.1警告和安全措施 13.2废料处理14. 参考文献15. 制造商名称、地址及联系方式 水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检

3、测试剂盒（酶联免疫法）赛润 ELISA classic酶联免疫法测定人体抗体（IgM）- 只限用于体外诊断-1. 名称通用名：水痘-带状疱疹病毒IgM 试剂盒 (定量) 英文名：Varicella Zoster Virus IgM (quant.)商品名：赛润 ELISA classic水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）汉语拼音：Serion ELISA classic shuidou-daizhuang paozhen bingdu IgM kangti dingliang jiance shijihe (meilian mianyifa) 产品编号: ESR104M检

4、测评估标准: Dade Behring BEP III / BEP 2000, DSX, 手动操作1. 用途 用于定量检测人血清、脑脊液或血浆中的抗带状疱疹病毒（VZV）的抗体。2. 诊断意义赛润 ELISA classic 带状疱疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒主要用于定量检测人血清、脑脊液或血浆中的抗带状疱疹病毒（VZV）的抗体。IgM试剂盒用于急性感染的诊断，而IgG试剂则用于急性和近期感染的诊断、脑脊液中的抗体检测、与移植手术相关的免疫状态的确定以及鉴别诊断。带状疱疹病毒再激活期间可检测到IgA抗体的存在。带状疱疹病毒，与单纯疱疹病毒（HSV）、巨细胞病毒（CMV）及非洲淋巴细胞瘤病毒（

5、Epstein-Barr 病毒，EBV）一样，都属于对人类有致病性的疱疹病毒。这种高传染性病毒的主要传播方式是液滴传播（污染的气溶胶）或污染物传播（如含病毒的小囊泡或焦痂）。水痘病毒遍布世界各地，在气侯温和的地区，秋冬季节可以发现累积的季节性感染。大多数学龄前儿童都有过初次感染的经历，95%的成年人会呈现血清学阳性。感染病人的传染是在皮疹出现前1-2天开始，而大约在皮疹出完后第7天终止。病毒会在脊髓神经节内持续存在，当机体免疫力下降时病毒可能会引起复发感染。潜伏期为2-3周，带状疱疹病毒初期感染后，一般要经过一个有非特异性症状的、很短的前驱期，才会出现临床症状水痘。在疾病的不同发展阶段，多形态

6、的皮疹会很痒，经常发展成丘疹、小泡和焦痂，对儿童来说这种情况是很典型的。虽然病症一般是良性的，但几乎所有的高风险病人都可能出现并发症 (初期免疫抑制病人、1岁以下的婴幼儿和老年人)。VZV感染可能会引发非常严重的并发症，主要包括重度细菌性感染、水痘性肺炎、各种中枢神经系统炎症如脑炎、无菌性脑膜炎、格林-巴利综合征、莱耶综合征、以及心肌炎、肾小球肾炎、胃肠道炎症和肝炎等。孕妇感染VZV病毒时，如果在怀孕期前20周内发病，病毒可能会经胎盘传播导致胎儿先天性水痘综合征，出生前5天内和出生后2天感染对孩子是非常危险的。围产期出水痘将引发很严重的症状，死亡率高达30%。体内病毒的复发感染可能产生带状疱疹

7、的临床表现。大多数50岁以上的病人，会导致身体一侧皮肤出现疱疹，并伴有严重的疼痛，后期疱疹的神经痛可能会持续很长时间；免疫缺陷的病人中带状疱疹感染很普遍，而且症状也比较严重。带状疱疹病毒感染应尽早得到有效控制以防止并发症的出现，而出水痘通常标志着病情已经好转。对于可能有感染风险的人群（患有恶性肿瘤或免疫缺陷的儿童、医学相关领域内的职业人员、计划怀孕但血清学呈阴性的妇女），活疫苗的接种是有严格限制的。对于暴露在病毒环境中的易感人群，应接种特异性的高免疫球蛋白作为被动的免疫预防手段。对于没有典型的临床表现或症状不明显的病人，可疑VZV感染的诊断应该通过试验室检测来确诊，特别是孕妇和新生儿的VZV感

8、染、免疫缺陷病人的非典型感染以及中枢神经系统的VZV感染(如：面部神经轻瘫的鉴别诊断)。 带状疱疹病毒的病毒直接检测是采用PCR试验。IgG、IgM和/或IgA的增加都可用于带状疱疹的血清学诊断。其中VZV IgA检测是最敏感的，而IgM增加的检出率只有50%左右，在复发感染时IgM浓度一般很低，能被检出的时期很短。对于带状疱疹病毒特异性的IgG、IgM和IgA抗体，ELISA试验是常规的检测方法。IgG抗体水平、IgM和/或IgA抗体的检出为带状疱疹的血清学诊断奠定了基础，VZV IgA检测是最敏感的，而IgM抗体的检出率只有50%左右，在复发感染时IgM抗体浓度一般很低，能被检出的时期很短

9、。病毒的再激活或重复暴露在病毒环境中会激发体内的免疫功能增强。VZV初期感染或复发感染后，会产生特异性的IgA抗体。中度免疫抑制的病人如各种病原体感染时、怀孕期间都会使病毒再激活，进而导致机体免疫反应增强，IgA抗体滴度升高，但不一定会加重临床症状。据文献报道，以糖蛋白为抗原建立的中和VZV抗体检测系统与中和试验有很好的相关性。在赛润ELISA classic VZV IgG检测中，抗体的活性单位采用国际单位（IU），因此不同试验室之间的检测结果可以相互对比。 糖蛋白抗原的应用使相关的免疫保护具有更重要的意义。 4. 说明本说明书除水痘-带状疱疹病毒IgM抗体定量检测的内容外，还涉及到IgG和

10、IgA抗体的定量检测，以及对结果的分析等。 5. 赛润ELISA classic - 检验原理用抗原包被微量板孔，制成固相载体。将病人血清加到微量板孔内，特异性抗体与抗原结合到固相载体上。除去未结合的物质，加入酶（碱性磷酸脂酶）标记的抗人IgG或IgA 或IgM，与免疫复合物结合。洗去未结合的标记物，加入相应底物（对氨基苯磷酸盐）其与酶结合的免疫复合物反应，产生有颜色产物,颜色强度与特异性抗体成正比，并能用分光光度计定量。6. 试剂盒的组成试验成分IgG试剂盒 IgM试剂盒 IgA试剂盒数量 / 剂量微孔条（此微孔条可拆下单独使用，每条有8孔，共96孔，已经包被了抗原）1个微孔条框架包被的抗原

11、为灭活抗原12 12 12标准血清（立即可用）人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；防腐剂： 0.1%叠氮化钠染色剂：紫红色O22毫升 22毫升 22毫升阴性对照血清（立即可用）人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗HIV抗体、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗体均为阴性；防腐剂： 0.1%叠氮化钠染色剂：里沙明绿 V12毫升 12毫升 12毫升酶标记的抗人IgG, IgA, IgM （立即可用）羊抗人IgG, IgA, IgM（多克隆），标记碱性磷酸酶后在蛋白稳定剂中储存。防腐剂: 0.01% 甲基异噻唑啉

12、酮0.01%溴化硝基二垩烷13毫升 13毫升 13毫升浓缩洗液（可稀释至1000毫升）氯化钠溶液，含吐温20和30mM Tris 防腐剂： 0.1%叠氮化钠133.3毫升 133.3毫升 133.3毫升稀释缓冲液磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温20防腐剂： 0.1%叠氮化钠0.01克/升的溴酚蓝钠盐250毫升 250毫升 250毫升终止液1.2N 氢氧化钠15毫升 15毫升 15毫升底物（立即可用）对硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液防腐剂： 0.1%的叠氮化钠（未开封瓶子中的底物可能会轻微变黄，但不会影响其质量） 13毫升 13毫升 13毫升带有标准曲线和评估表的质量控制文件（抗体以IU/毫升或

13、U/毫升计量）1 1 17. 其它检测所需物质- 普通实验室所需的仪器装置- IgM检测：另需赛润含对照抗原的类风湿因子Rf吸附剂（Rf吸附剂/对照抗原；产品编号T200/20ml）- 分光光度计，波长405纳米，建议参考波长范围620纳米- 690纳米（例如 650纳米）- 37温箱- 湿盒- 蒸馏水8. 储存及稳定性试剂储存稳定性微孔条（包被抗原）开封后放在2-8装有干燥剂的密封铝箔袋中。4星期对照血清 / 标准血清开封后保存于2-8。有效期内；酶标记抗体立即可用的溶液于2-8储存。避免污染（使用无菌枪尖）。有效期内稀释缓冲液 开启后于2-8储存。有絮状沉淀时丢掉未开封有效期内洗涤液浓缩液

14、开封后保存于2-8。工作液在2-8。工作液在室温下。盛过工作液的瓶子应按常规方法清洗，并丢弃混浊溶液。有效期内2星期1星期底物2-8储存，避光。避免污染（使用无菌枪尖）。当溶液变为黄色时应予以丢弃（水作空白，吸光度大于0.25时）。有效期内终止液开封后保存于室温下。有效期内9. 赛润 ELISA classic的检验步骤9.1注意事项只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润 ELISA c

15、lassic试剂盒。针对每一个免疫球蛋白种类都有三个不同的酶标记物浓度：低、中、高。酶标记物的分级通过以下的标志在标签上显示：比如： IgG+ 低浓度IgG酶标记物IgG+ 中浓度IgG酶标记物IgG+ 高浓度IgG酶标记物为了保证我们试剂盒的惯常质量，在极少数情况下需要使用特殊酶标记物。这些试剂盒中的酶标记物会有一个特殊批号并且不用“+”标志。因此，这些特殊酶标记物是不可以和其它酶标记物交换使用的。 请您每次都注意标签上的标注！ELISA classic试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。应在未开封的情况下，保存于2-8，并在有效期（见标签说明）内使用。详细的稳定性和储存资料在“8. 储存及稳

16、定性”内将加以详述。每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果未经规定被稀释或改动都会导致检测的敏感性的降低。在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，避免试剂受到微生物污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。请从标记处剪开密封袋。如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。开始试验前，将所有试剂置于室温。从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸头应确保不接触孔壁或喷洒于小孔的外面，注意不要盖错瓶盖或管盖。试验中试剂的充分混合，对于检测结果的重复性至关重

17、要。在取用对照品和酶标记物之前应摇动容器使其充分混匀，加样前，使用单向振动器充分混匀稀释过的标本。小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果长，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。洗涤不充分将影响试验结果： 应该小心进行洗涤。洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米）指导手册进行，所有的孔内均应

18、加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。9.2检验前的准备工作和储存避免使用高血脂、溶血或黄疸的标本，尽管在我们的检测中没有发现有副影响。明显被污染的标本（血清或血浆）不能用于检测。依照标准实验室方法采集血清或血浆标本(EDTA、 柠檬酸盐、 肝素抗凝)标本不应加热灭活。9.2.1 样品稀释赛润ELISA classic 带状疱疹病毒 IgG/IgA开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2）：V1+V2=1+100 加 10微升 患者待测样品于 1000微升 稀释

19、缓冲液稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混匀。类风湿因子的干扰的排除类风湿因子抗体是IgM型的自身抗体，可与IgG免疫复合物结合。非特异性类风湿因子抗体的存在将导致IgM检测的假阳性结果。另外，也存在弱结合的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。在这种情况下，IgM的检测将得到假阴性的结果。因此，在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。特别类风湿因子Rf吸附剂（产品编号T200,20ml）不仅包含抗人IgG抗体，还含有一定量的对照抗原。对照抗原同时能与类风湿因子及可识别宿主细胞膜成份的抗体结合。因此，无须再进行微量孔包被对照抗原的平行试验。在进行以下SERION

20、 ELISA classic IgM检测时，此类RF吸附剂需作为附加试剂另行购买:巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒首先应该使用稀释缓冲液(V2)对类风湿因子吸附剂(Rf-吸附剂/对照抗原)(V1)进行如下稀释：V1+V2=1+4 加 200微升 Rf-吸附剂/对照抗原 于 800微升 稀释缓冲液中然后将患者的待测样品(V1)在此Rf-稀释缓冲液(V3)中进行稀释：V1+V3=1+100 加 10微升 患者待测样品 于 1000微升 Rf-稀释缓冲液中 9.2.2 样品储存密封的患者样品可在冰箱中2-8保存7天。 -20可保存更久。避免样品反复冻融。已稀释的

21、样品可在2-8保存一星期。9.3 试剂盒反应试剂的准备9.3.1 微孔条微孔条排列于板中，并与干燥剂一同封于铝袋内。未使用的微孔条重新放入铝袋，密封好，确保铝袋的密封性。7.3.2 对照血清 / 标准血清对照和标准血清可直接使用，不必进一步稀释每次试验或是试验体系，无论检测用的微孔板数目多少，均应包括空白对照孔，阴性对照孔和标准血清孔，且标准血清应加两孔。不要用RF吸附剂处理对照血清！9.3.3 抗人 IgG, IgA 或IgM抗体，用 AP标记（备用）禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合使用。同一试剂盒才能达到最佳检测效果。为了避免酶标记物的污染（请使用时先一次性取出实验所需量置于一容器中，避免反

22、复从试剂瓶中吸取试剂。9.3.4 洗液以1：30稀释浓缩洗涤缓冲液（V1）至体积V2。例如：浓缩缓冲液（V1）终体积（V2）33.3毫升1000毫升 1.0毫升 30毫升9.3.5 样品的稀释缓冲液（即用）9.3.6 底物（即用）试验时戴手套以避免污染。必须以无菌枪尖吸取底物溶液。9.3.7 终止液（即用）9.4 检测程序概要水痘-带状疱疹病毒IgG/IgA/IgM定量样品稀释液（患者样本）1+100将稀释的样本，和立即可用的对照血清 / 标准血清，加到微量孔内（100微升）孵育60分钟 / 37湿盒中 洗涤加入立即可用的酶标记抗体溶液（100微升）再孵育30分钟 / 37湿盒中 洗 涤加入底

23、物溶液（100微升）再孵育30分钟 / 37湿盒中 加入终止液（100微升）在405 纳米处读消光系数9.5 检测过程 9.5.1 将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张标签。9.5.2 在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的对照血清。留一个孔为底物空白使用，例如：定量的IgG /IgM/IgA 抗原微量孔孔A1孔B1孔C1孔D1孔E1底物空白阴性对照标准血清标准血清标本 19.5.3 将样品放于湿盒内37（1）孵育60分钟（5分钟）。9.5.4 孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔（使用自动洗板机或手工洗板）：- 吸去或甩去洗液- 每孔内加入300微升洗液- 吸去或甩去洗液-

24、重复洗涤过程3次（共4次！）- 将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体9.5.5 加入酶标记抗体。于相应孔内（底物空白除外）加入100微升 IgG / IgM / IgA酶标记抗体9.5.6湿盒内37（1）孵育30分钟（1分钟）*。9.5.7孵育后，以洗液清洗板孔（洗涤见上）9.5.8加入底物于每孔内加入100微升底物溶液（包括底物空白孔）9.5.9湿盒内37（ 1）孵育30分钟（ 1分钟）*。9.5.10终止反应每孔内加入100微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。9.5.11读取消光度以底物空白为空白对照液， 60分钟内读取405纳米的OD值，建议参考波长范围为620纳米-69

25、0纳米（例如650纳米）。10检测结果评估赛润 ELISA classic水痘-带状疱疹病毒 IgG/ IgM / IgA（定量）10.1 4PL单点定量法通过利用非线性方程，可以保证根据消光信号的定量数值精确计算出抗体活性，该方程可在不对OD值进行转换的情况下调整S型曲线。用赛润 ELISA classic试剂检测，抗体浓度可通过逻辑对数模型（4PL, 4个参数）来计算，该模型对浓度曲线有很精确的适用性。计算公式如下：OD = A +D - A1 + e B(C - In conc.)参数A、B、C和 D能够反映曲线的精确形状。1. 下端渐进线 参数A2. 曲线斜率 参数B3. 转折点 参数

26、C4. 上端渐进线 参数D标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司（维尔茨堡市）在严格条件下经过多次试验制定的。使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作标准曲线。每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。如有需要也可取得相关的评估软件。为了校正正常试验偏差和建立试验对照，每轮试验均需使用标准血清作为对照。该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的，在此范围内可保证抗体浓度测定的正确性。标准血清不一定是阳性对照，且在某些ELISA试验中标准血清数值可能是临界值或阴性结果。10.2有效性标准-底物空白的OD 100 mIU/ml临界值结果： 50-100 mIU/ml阴性结果： 15 U/ml临界值结果： 10-15 U/ml阴性结果： 50 U/ml不确定性结果： 35-50 U/ml阴性结果： 35 U/ml针对临界值结果的样品，应在1-2 周后对相应的病人再取样，重新检测。10.3.2 利用SERION easy base 4PL软件/SERION 评估软件进行自动检测输入四个参数和标准血清参考值之后，联机软件就会计算出抗体活性。如果标准