公共卫生微生物采样检测方法总结.docx
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公共卫生微生物采样检测方法总结
公共卫生微生物采样检测方法总结
1、空气中微生物的检测方法------细菌总数
（营养琼脂，121℃高压灭菌20min，培养时间37℃,48h）
1.两种方法
（1）撞击法（二级或者六级微生物采样器）
（2）自然沉降法（暴露5min）
采样：
梅花布点，高度：
1.2~1.5m；离墙：
1m。
2、茶具微生物检验方法
（一）细菌总数
1、生理盐水的制法：
将氯化钠（8.5g）溶解于蒸馏水（1000mL）中，分装到试管内，每管10mL，121℃高压灭菌20min。
2、采样：
棉拭子湿润生理盐水，在茶具内、外缘涂抹50cm2，即口唇接触处一圈（1~1.5cm），用灭菌剪刀剪去棉签手接触处，将棉拭子放入10mL生理盐水中，4h内送检。
3、检验程序：
检样→各1mL加入两块灭菌平皿（若污染严重，可十倍递增稀释）→37℃，48h培养→菌落计数→报告
4、单位：
cfu/cm2。
（2）大肠菌群
2、培养基：
乳糖胆盐发酵培养液（双料的，每管10mL，115℃高压灭菌15min）
3、检测方法：
发酵法（具体内容课本11页）
4、检样（测定细菌总数余下的样品）
5、革兰氏染色过程：
（阳性菌显紫色，阴性菌显红色）
（1）初染：
1min，水洗；
（2）碘染：
1min，水洗；
（3）脱色：
30s，水洗；
（4）复染：
1min，水洗，待干，镜检。
5、结果报告：
凡乳糖发酵管最终产酸产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告检出大肠菌群。
三、毛巾、床上卧具微生物检测方法
（一）细菌总数
1.采样
（1）毛巾、枕巾：
对折后两面的中央各25cm2；
（2）床单、被单：
在上下两部中央25cm2来回涂抹；
2、检测程序同茶具细菌总数检测
3.计算单位：
cfu/25cm2。
（二）大肠菌群（检测程序同茶具大肠菌群检测）
1.涂抹法：
（用测定细菌总数时采集的样品）
四、理发用具微生物检验方法
（一）大肠菌群
1、采样
推子：
在推子前部上下部分均匀各涂抹三次；
理发刀、剪和修脚工具：
在使用的刀、剪面的两侧各涂抹一次采样；两个刀或者两个剪为一份样品。
2、检样5mL倒入双料乳糖胆盐发酵管，37℃，24h培养；
3、分离培养：
接种伊红美蓝平板，做革兰氏染色镜检；
4、证实试验：
接种乳糖发酵管37℃，24h培养，观察产气情况。
5、结果报告：
乳糖管最终产酸产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，可报告为大肠菌群阳性。
（2）金黄色葡萄球菌
（3）培养基：
7.5%的氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基
（4）步骤：
（1）做大肠菌群剩余的5mL倒入培养基中，37℃，24h培养；
（2）接种血平板，37℃，24h培养；观察形状：
圆形、金黄色、凸起、表面光滑、周围有溶血圈；
（3）挑菌落做镜检：
革兰氏阳性（红色），葡萄状排列；
（4）甘露醇发酵试验：
接种到甘露醇发酵培养基中，37℃，24h培养，观察是否产酸；
（5）血浆凝固酶试验
玻片法：
在干净的玻片两边，一端滴一滴生理盐水，一端滴一滴血浆，接种环挑菌落分别与它们混合。
5min后均无凝固现象的为阴性；若血浆中出现颗粒状凝块而生理盐水中没有，则为阳性。
5、拖鞋微生物检验方法
霉菌与酵母菌
（生理盐水中要加入玻璃珠）
2.培养基：
霉菌培养基、（虎红）孟加拉红培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）
3.取样：
有棉拭子在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处的5cm×5cm面积上均匀涂抹3次，一双拖鞋为一份样品；
4.将盛有棉拭子的试管在手心用力振荡100次，使霉菌孢子分开；
5.培养：
在霉菌培养箱中25~28℃，培养观察一周。
6.单位是cfu/50cm2。
6、浴盆、脸（脚）盆微生物检测
（3）细菌总数
无菌生理盐水：
分装125mL/瓶供浴盆采样；50mL供脸（脚）盆采样。
采样部位：
在盆内侧二分之一到三分之一高度；
布点：
浴盆梅花布点；脸（脚）盆相对两侧壁布点；
方法：
涂抹法（与茶具方法一致）
单位：
cfu/25cm2。
（4）大肠菌群（同茶具）
七、游泳池水微生物检测
（1）、细菌总数
1.采样瓶：
无酸、无碱、无毒的玻璃容器。
2.灭菌前要加入足量的10%的硫代硫酸钠溶液，一般125mL水样加0.1mL。
3.采样
游泳池水
面积，㎡
儿童池
成人池
天然游泳池
≦1000
>1000
≦2500
>2500
采样点数
1~2
2
3
5
>5
注：
在水面下30cm处取水样450mL
4.操作步骤（与茶具细菌总数一样）
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