龙胆苦苷及其滴丸的研制.docx

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龙胆苦苷及其滴丸的研制

历下区科技发展计划项目

可行性研究报告

项目名称：

龙胆苦苷及其滴丸的研制

领域：

生物技术

起止时间：

2006年4月至2008年8月

济　南市科学技术局

填报日期：

2006年4月15日

龙胆苦苷及其滴丸的研制

可行性研究报告

一、立项的背景和意义

病毒性肝炎是一种严重危害人体健康的传染病,传染性强,发病率高。

亚洲、非洲及南欧地区人群中乙型肝炎病毒携带者高达15%～20%，中国是乙肝病毒的高发区，据统计每年新增的乙型肝炎病人就有100万。

现已证实病毒性肝炎与肝硬化、原发性肝癌密切相关。

全世界每年约有75万人死于HBV引起的肝癌。

肝炎对人类健康的威胁有增强的趋势。

中药在治疗HBV方面有独到的优势，其中龙胆苦苷是其中一种有代表性的药物。

龙胆现已收载于中国药典2000年版一部中。

龙胆为龙胆科植物条叶龙胆GentianamanshuricaKitag、龙胆GentianascabraBge、三花龙胆GentianatrifloraPall或坚龙胆GentianarigescensFranch的干燥根及根茎。

前三种习称龙胆。

后一种习称坚龙胆。

记载其功能为清热燥湿，泻肝胆火。

用于湿热黄胆，阴肿应痒，带下，强中，湿疹瘙痒，目赤，耳聋，肋痛，口苦，惊风抽搐等。

龙胆苦苷是植物龙胆有效成分之一，属裂环烯醚萜甙类；整体动物试验和离体灌流肝及分离细胞实验证明其具有保肝作用。

龙胆注射液30mg/kg腹腔注射，能减轻四氯化碳（CCl4）所致小鼠肝损伤的细胞变性和组织坏死，提高其肝糖原含量。

另有报道，龙胆地上部位也具有与根相似的保肝作用。

给小鼠腹腔注射龙胆苦苷240mg/kg，每日2次，共4次，对CCl4和D-氨基半乳糖（GALN）所致化学性肝损伤的整体动物有保护作用。

采用改良Miller灌流仪灌流大鼠肝脏，在灌流液中加入龙胆苦苷和CCl4，1h内，以灌流量、灌流液、丙氨酸转氨酶（ALT）和肝组织病理观察为指标，龙胆苦苷+CCl4组与CCl4组比较，有显著差异。

同时，以CCl4致大鼠新鲜分离肝细胞损伤为病理模型，在细胞培养液中加入龙胆苦苷，以培养液ALT值及分离细胞之DNA、糖原、脂肪染色和电镜观察为检测指标，发现龙胆苦苷保护肝细胞作用在一定范围内与剂量成正比，龙胆苦苷+CCl4组与CCl4组比较，前者ALT值明显低于后者，给药组因糖原、DNA丰富，微结构损伤明显弱于CCl4组，由于分离肝细胞剔除了神经、体液因素的影响，故认为龙胆苦苷有直接保肝作用。

龙胆苦苷可显著降低饥饿小鼠肝脏脂质过氧化。

饥饿小鼠肝细胞体外孵育结果表明，龙胆苦苷对CCl4所致肝脏脂质过氧化升高有明显的降低作用。

有关龙胆苦苷药理、药动及毒理作用的文献资料表明：

龙胆苦苷的保肝作用明显，疗效确切。

二、国内外现状和发展趋势〔包括知识产权现状〕

龙胆为常用中药，具有清热燥湿、泻肝胆火的功效，常用于湿热黄疸、目赤、口苦、胁痛等症的治疗。

龙胆主要有效成分包括龙胆苦苷（Gentiopicrin）、当药苦苷（Swertiamarin）及当药苷（Sweroside）等，其中龙胆苦苷含量最高。

1905年，Herrissey用灭菌法得到龙胆苦苷，此后，日本学者对其进行了继续研究，确定了龙胆苦苷的化学结构，龙胆苦苷属于环烯醚萜苷类，该化合物广泛存在于龙胆科植物。

药理研究表明龙胆苦苷具有保肝利胆和抗炎作用。

中国的肝炎发病率居世界第一，开发治疗肝炎的有效药物刻不容缓，龙胆苦苷是一种难得的治疗肝炎的化合物，因此目前国内外对龙胆的研究和应用较多。

一般应用多采用龙胆和其他中药或西药联合应用治疗肝炎，并且疗效也比较令人满意。

或者采用将龙胆提取，以获得较高纯度的龙胆苦苷，但后者目前所得到的龙胆苦苷提取物的纯度均不理想，产业化生产纯度一般不足80%。

本公司经过努力，在龙胆苦苷提取物的提纯工艺上获得了突破，所得龙胆苦苷提取物的纯度可达98%以上，明显高于其他同类研究。

明显减少了含龙胆成药的服用量及提高了药物疗效。

并且在此基础上开发出首家独有的龙胆苦苷滴丸，制成滴丸剂，药物高度分散，基质为水溶性，能加快药物的溶出速度和吸收速度，起效迅速，生物利用度高，在这方面明显优于其它固体剂型；对生产设备的要求较低，车间无粉尘，有利于劳动保护，自动化程度高，生产成本低；滴丸剂表面积大、溶出速度快、胃肠刺激作用小、服用方便，在用药安全行方面明显优于注射剂。

且对其主要成分的研究与质量控制已达分子水平。

药物以极小的晶粒存在，故可提高难溶性药物的生物利用度，舌下含服经舌粘膜迅速吸收进入血循环，因而可达到高效、速效的目的，特别适用于中药急症制剂。

2、申请承担单位目前研发应用情况。

我公司已完龙胆苦苷提取工艺条件的初步探索，正在进一步完善小试工艺。

本项目龙胆苦苷及其滴丸的提取及制备工艺路线，是本公司自行设计，国内没有查到专利申请，本项目龙胆苦苷滴丸及其制备方法已申报发明专利。

三、现有研究基础、特色和优势

（一）技术指标

1.龙胆苦苷结构式

分子式：

C16H20O9

分子量：

356.32

2.龙胆苦苷提取物的含量应不低于98%。

3.龙胆苦苷滴丸10mg/粒，每次服10粒，每日3次，每10粒含龙胆苦苷不少于30mg。

4.龙胆苦苷提取物在室温条件下采用塑料袋真空包装，2年内主要成分的含量、溶解性等应无明显变化。

5.龙胆苦苷冻干拟上市包装在室温条件下2年内主要成分的含量、溶解性等指标应无明显变化。

（二）本项目的特色和优势

有关龙胆苦苷药理、药动及毒理作用的文献资料表明：

龙胆苦苷的保肝作用明显，疗效确切。

由于龙胆的主要有效成分为龙胆苦苷，我们研制了龙胆苦苷滴丸。

已经进行了很长时间的研究，可以快速完成研究，并且在剂型上具有其他剂型无法比拟的优势:

1、起效迅速，生物利用度高。

因为药物在基质中的分散呈分子状态，胶体状态或微粉状结晶，为高度分散状态，而基质为水溶性的，则可增加或改善药物的溶解性，加快药物的溶出速度和吸收速度。

2、生产车间无粉尘，有利于劳动保护，设备简单、生产周期短，自动化程度高，生产效率高，成本相对低。

3、滴丸可使液体药物固体化，便于运输，储存。

（三）经济指标

项目完成后，年新增产品销售额1500万元、年新增交税总额120万元、年新增净利润180万元、年新增产值1800万元。

（四）项目创新点

1.龙胆苦苷提取物纯度高，含量不低于98%。

2.龙胆苦苷的制备工艺的创新，针对国内中药生产厂家现有设备研究新型制备方法。

我们进行的研究，特点在于将龙胆用一定浓度的乙醇提取，采用的方法有：

浸渍、渗滤、加热回流等，得到龙胆苦苷提取物，再采用硅胶柱、聚酰胺柱、大孔树脂柱等集中联用进行精制，然后采用结晶、重结晶的方法达到较高纯度的产品，我们的研究工艺采用的设备简单，易于实现工业化生产。

3.龙胆苦苷滴丸明显优于其它剂型，主要特点是起效迅速、生物利用度高。

滴丸中的药物在基质中的分散成分子状态，胶体状态或微粉状结晶，为高度分散状态，而基质为水溶性物质，可增加或改善药物的溶解性，加快药物的溶出速度和吸收速度。

生产车间无粉尘，有利于劳动保护，设备简单、生产周期短，自动化程度高，生产效率高，成本相对低。

滴丸可使液体药物固体化，便于运输，储存。

（五）人才及产业方面的特色优势

我公司成立几年来，建立了完善的科研管理体系及稳健的人才梯队，拥有高中级专业技术人才及操作工人30人。

其中，高级职称2人，中级职称8人。

大学专科和本科毕业的工作人员占60%以上，是已具规模实力的生产单位。

我公司自主研制的项目龙胆苦苷及其滴丸投入生产后将在国内有着很好的市场前景，创造很好的社会效益和经济效益。

该项目完成后，具有很大的产业化需求。

四、应用或产业化前景、市场需求。

肝炎的肆虐严重威胁人类的身体健康.研究开发具有我国自主知识产权及符合中医特点的保肝药物,解除肝病患者的痛苦刻不容缓.目前,我国的保肝药有近百种.其药理作用可包括抗肝细胞坏死,促进肝细胞修复,免疫调节等.这些保肝药均为单一的保肝机制.没有抗肝炎病毒的作用.龙胆为龙胆科植物条叶龙胆GentianamanshuricaKitag、龙胆GentianascabraBge、三花龙胆GentianatrifloraPall或坚龙胆GentianarigescensFranch的干燥根及根茎。

前三种习称龙胆。

后一种习称坚龙胆。

记载其功能为清热燥湿，泻肝胆火。

用于湿热黄胆，阴肿应痒，带下，强中，湿疹瘙痒，目赤，耳聋，肋痛，口苦，惊风抽搐等。

龙胆苦苷是植物龙胆有效成分之一，属裂环烯醚萜甙类；整体动物试验和离体灌流肝及分离细胞实验证明其具有保肝作用.龙胆苦苷制剂龙胆苦苷滴丸，起效迅速，生物利用度高。

因为药物在基质中的分散呈分子状态，胶体状态或微粉状结晶，为高度分散状态，而基质为水溶性的，则可增加或改善药物的溶解性，加快药物的溶出速度和吸收速度。

研究开发具有我国自主知识产权及符合中医特色的龙胆苦苷制剂对于提高我国保肝药研究水平,解除肝病患者痛苦具有重要的科学意义.因此市场前景广阔，可给肝病患者带来福音。

五、研究内容与预期目标

1.项目总投资：

项目执行期间预计投资总额63万元。

其中，自筹33万元，已完成投资5万元，申请拨款25万元。

2.预计项目完成后的年经济指标：

年新增产品销售额1500万元、年新增交税总额120万元、年新增净利润180万元、年新增产值1800万元。

3.技术、质量指标：

（1）龙胆苦苷提取物的含量应不低于98%。

（2）龙胆苦苷滴丸10mg/粒，每10粒含龙胆苦苷不少于30mg。

4.本项目完成后可获专利及其它知识产权：

发明专利1项、新品种1项。

六、研究方案、技术路线、组织方式与课题分解

（一）工艺研究

1、龙胆苦苷提取物的工艺优化筛选，主要研究方法为：

特点在于将龙胆用一定浓度的乙醇提取，采用的方法有：

浸渍、加热回流等，得到龙胆苦苷醇提物，再采用硅胶柱、聚酰胺柱、大孔树脂柱等的几种联用进行精制，然后采用结晶，重结晶的方法得达到较高纯度的产品。

我们的研究采用的设备相对简易，能适应目前国内中药生产厂家。

2.龙胆苦苷提取物理化性质的研究，

3.龙胆苦苷进行药理毒理研究.主要药学研究、一般药理研究、急性毒性研究,长期毒性研究,药代动力学研究、临床前毒理资料的研究；

4.龙胆苦苷滴丸的处方确定、制备工艺优化筛选的主要研究方法为：

对滴丸的常用基质（聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘油明胶、硬脂酸、蜂蜡、氢化植物油等）进行筛选，筛选出适宜的基质，确定基质的最少用量，确定处方；对滴丸常用的冷却液（液体石蜡、植物油、甲基硅油、水、不同浓度的乙醇等）及冷却条件进行筛选。

筛选出适宜成型的冷却液；对制备过程中的温度进行考查（恒温箱、冷却柱温度），确定最佳制备温度。

5.龙胆苦苷滴丸的理化性质的研究.

6.根据《中药新药质量标准研究的技术要求》对龙胆苦苷滴丸的理化性质及质量标准进行研究,确定质量标准。

（1）理化性质研究.

（2）质量标准研究包括：

性状、鉴别、检查（水分、重量差异、溶散时限、砷盐、重金属、微生物限度等）、含量测定（色谱条件、测定波长、线性关系、回收率、重现性等）进行研究。

7.对龙胆苦苷滴丸进行临床研究。

8.龙胆苦苷滴丸的稳定性考察，主要研究方法为：

（1）影响因素试验：

①高温试验②光照试验③高湿试验.

（2）加速试验

（3）长期试验

（二）主要技术参数

1.龙胆苦苷提取物的含量应不低于98%。

2.龙胆苦苷滴丸10mg/粒，每10粒含龙胆苦苷不少于30mg。

（三）现有工作条件

1、本公司成立以来，由于实行现代企业管理制度，机制先进灵活，经过全体员工的努力和拼搏，现已发展成设有化学药物合成、药物制剂、中药、药物分析及生物药物五个专业配套的研究室，可以从事化学药物新药和中药新药的研究开发。

是近年来新崛起的新药研究开发中心之一。

已研制开发中西药新药品种200余个，已取得临床批件和生产批件的新药百余多个，其中化学药物方面：

成功研制并转让盐酸头孢唑兰、甲磺酸帕珠沙星、恩曲他滨、巴洛沙星、利拉萘酯、西尼地平、伊布利特等原料和制剂的多个临床批件及生产批件；中药方面：

成功研制并转让了冠心丹参片、产后逐瘀片、生脉口服及冻干、输液和刺五加口服及冻干制剂、消糜灵泡腾片等多个临床批件及生产批件。

已申请发明专利20项。

2、工作基础和条件

（1）我公司多年从事新药研发工作，现已经审报国家一类新药1个，二、三类新药10余个，完成五、六类的研究和转让的新药一百余个。

其中申请发明专利有20余个，现公司员工30余人，其中有高级职称2人，中级职称8人，公司员工60%以上为本科毕业生。

（2）目前可用的试验室主要仪器设备：

高效液相色谱仪12台，超低温反应器1台，高压釜2台，搅拌30台，三用紫外分光光度仪2台，红外分光光度仪1台。

（四）特殊行业许可证报批情况

龙胆苦苷及其滴丸项目完成后，申请临床研究批件。

（五）推广应用计划

肝炎的肆虐严重威胁人类的身体健康.研究开发具有我国自主知识产权及符合中医特点的保肝药物,解除肝病患者的痛苦刻不容缓.目前,我国的保肝药有近百种.其药理作用可包括抗肝细胞坏死,促进肝细胞修复,免疫调节等.这些保肝药均为单一的保肝机制.没有抗肝炎病毒的作用.龙胆为龙胆科植物条叶龙胆GentianamanshuricaKitag、龙胆GentianascabraBge、三花龙胆GentianatrifloraPall或坚龙胆GentianarigescensFranch的干燥根及根茎。

前三种习称龙胆。

后一种习称坚龙胆。

记载其功能为清热燥湿，泻肝胆火。

用于湿热黄胆，阴肿应痒，带下，强中，湿疹瘙痒，目赤，耳聋，肋痛，口苦，惊风抽搐等。

龙胆苦苷是植物龙胆有效成分之一，属裂环烯醚萜甙类；整体动物试验和离体灌流肝及分离细胞实验证明其具有保肝作用.龙胆苦苷制剂龙胆苦苷滴丸，起效迅速，生物利用度高。

因为药物在基质中的分散呈分子状态，胶体状态或微粉状结晶，为高度分散状态，而基质为水溶性的，则可增加或改善药物的溶解性，加快药物的溶出速度和吸收速度。

研究开发具有我国自主知识产权及符合中医特色的龙胆苦苷制剂对于提高我国保肝药研究水平,解除肝病患者痛苦具有重要的科学意义.因此市场前景广阔，可给肝病患者带来福音。

七、年度计划内容

1.2006年4月至2006年10月完成龙胆苦苷及其滴丸的处方及工艺研究。

2.2006年10月至2007年10月完成龙胆苦苷及其滴丸的理化性质的研究、质量标准研究及稳定性研究。

3.2007年2月至2007年12月完成龙胆苦苷及其滴丸的主要药效学试验、一般药理研究、急性毒性研究、长期毒性研究。

4.2008年1月至2008年3月总结龙胆苦苷及其滴丸的研究资料、申报临床资料。

八、主要研究人员和单位简况及具备的条件

（一）主要研究人员情况：

本单位负责本项目的研究人员7人，其中一人职责为总协调，为本公司的总经理，系研究生毕业并取得硕士学位。

其中两人为大学教授，专业分别为药理和化学。

其他4人所学专业为化学或中药，现为我单位化工合成和植化工作人员，4人均为本科毕业并取得学士学位，1人为高级工程师，1人均为工程师，2人为助理工程师。

以上工作人员在中药新药的研究工作方面具有丰富的经验，曾做过5～6个中药新药的研制工作，成果完成以后已转让企业生产，并取得良好的经济效益。

（二）工作基础和条件

1.我公司多年从事新药研发工作，现已经审报国家一类新药1个，二、三类新药10余个，完成五、六类的研究和转让的新药一百余个。

其中申请发明专利有20余个，现公司员工30余人，其中有高级职称2人，中级职称8人，公司员工60%以上为本科毕业生。

2.目前可用的试验室主要仪器设备：

高效液相色谱仪12台，超低温反应器1台，高压釜2台，搅拌30台，三用紫外分光光度仪2台，红外分光光度仪1台。

九、经费预算

（一）项目的投资情况

项目总投资63万元、申请区科技三项经费25万元、自筹资金33万元、已完成投资5万元。

（二）科技三项经费的主要用途

仪器设备购置费3万元、能源材料费2万元、试验外协费18万元、资料印刷费0.2万元、会议差旅费0.3万元、人员劳务费0.5万元、其它费用1万元。