中药化学实验内容教程文件.docx

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中药化学实验内容教程文件

中药化学实验内容

实验一黄藤中掌叶防己碱的提取、氢化、和鉴定1

1、巴马汀的提取1

2、巴马汀粗品的精制2

3、巴马汀氢化物的制备3

4、鉴定4

实验二大黄中大黄素的提取、分离和鉴定5

1、大黄粉酸水解5

2、总羟基蒽醌苷元的提取6

3、PH梯度萃取7

4、柱色谱精制大黄素9

实验三槐类中芦丁的提取、分离与鉴定10

1、芦丁的提取10

2、芦丁的精制和酸水解11

3、槲皮素五乙酰化物的制备12

4、糖鉴定13

5、芦丁、槲皮素的鉴定14

实验一黄藤中掌叶防己碱的提取、氢化、和鉴定

（一）巴马汀的提取

一、实验目的

1、掌握渗漉提取方法

2、得到巴马汀粗品

3、学习生物碱的定性鉴别方法

二、实验原理

黄藤中巴马汀（掌叶防己碱，Palmatine）的含量为4%，是季铵型生物碱，可溶于水、醇中，盐酸盐的溶解度低，有机酸盐的溶解度高，因此，用1%的醋酸溶液渗漉提取巴马汀。

用盐析的方法，使巴马汀在水中溶解度降低而沉淀出来。

Palmatine

三、实验方法

50g黄藤粉

25ml1%HAc湿润15min

500ml1%HAc渗漉（1-2d/s）

渗漉液

10ml渗漉液其余渗漉液

10%NaCl，搅拌溶解

沉淀反应6NNaOH调pH10，

静置，抽滤

巴马汀粗品

反应试剂：

碘化铋钾

碘-碘化钾沉淀

鞣酸

硅钨酸

苦味酸

（1）碘化铋钾试剂：

取滤液1ml，加入试剂1~2滴，如有砖红色沉淀产生，可能存在生物碱。

（2）碘-碘化钾试剂：

取滤液1ml，加入试剂1~2滴，如有红棕色沉淀产生，可能存在生物碱。

（3）硅钨酸试剂：

取滤液1ml，加入试剂1~2滴，如有浅黄色或类白色沉淀产生，可能存在生物碱。

（4）苦味酸试剂：

取滤液1ml，加碱调中性，加入试剂1~2滴，如有黄色沉淀产生，可能存在生物碱。

（5）鞣酸试剂：

取滤液1ml，加碱调中性，加入试剂1~2滴，如有白色沉淀产生，可能存在生物碱。

四、实验注意事项

1、湿润

目的：

避免干药材吸水后溶胀，在渗漉筒中膨胀而使渗漉液难流出；

方法：

溶剂量为药材的1/2，放置15分钟；

程度：

湿润后的药材手握成团，放开后松散。

2、装筒方法：

（1）两层小纱布湿润后盖于渗漉筒小孔上，避免紧、大；

（2）湿润后的药粉均匀地倒入渗漉筒里，避免松紧不匀；

（3）药粉上盖一层滤纸，压上瓶盖，以防药粉翻出，影响提取得率；

（4）渗漉筒下端活塞打开，加提取溶剂至满，排出气泡；

（5）将活塞关闭5-10分钟，浸泡药粉，再打开渗漉；

（6）保持液面高于药粉。

3、判断提取完毕的方法

（1）渗漉液颜色很浅；

（2）渗漉液沉淀反应呈阴性；

（3）渗漉液为药粉体积的10倍时，基本渗漉完毕。

4、盐析量：

固体，为渗漉液体积的10%量。

5、调PH：

调至PH10，由于有有机酸共存，放置后又回到PH9。

6、抽滤：

放置一天以上再抽滤，尽量将上清液倒去，否则影响抽滤时间。

7、干燥：

抽滤物放入小干燥皿中，写上姓名、班级，统一干燥。

8、称重，计算粗制率。

五、思考题

1、还可用什么方法提取黄藤中生物碱？

请设计提取流程。

2、渗漉用的酸水，除醋酸外，还可用什么酸水？

3、分离黄藤中的季铵型生物碱，除盐析外还可用什么方法？

请设计分离流程。

（2）巴马汀粗品的精制

一、实验目的

1、学习结晶方法

2、得到氯化巴马汀精品

二、实验原理

利用混合物中各化合物对某种溶剂溶解度的差别，而使单一成分以结晶状态析出的方法。

巴马汀的盐酸盐在水和醇中溶解度小，易析出黄色针状结晶（

三、实验方法

巴马汀粗品

40ml80%EtOH，加热溶解15min,

趁热抽滤

滤渣滤液

20ml80%EtOH

加热溶解，趁热抽滤

重复数次至滤液无色

滤液

6mol.LHCl调PH2，放置析晶，抽滤

氯化巴马汀

四、注意事项

1、含巴马汀粗品的滤纸撕碎后同巴马汀放入圆底烧瓶中加热溶解；

2、80%EtOH溶剂量以巴马汀粗品量定，3g巴马汀粗品约75ml80%EtOH，溶剂量多，则不易析晶；溶剂量少，则结晶杂质多。

3、滤液要趁热抽滤；

4、滤液调PH前若有析晶，需加热溶解；

5、待析晶溶液，应将瓶壁边有沉淀的部分溶解；

6、析晶时间应为一天以上。

五、促进析晶的方法

1、将瓶盖打开，挥去部分溶剂；

2、用玻棒擦瓶壁，加速析晶；

3、加晶种加速析晶；

4、延长放置时间或低温放置。

六、思考题

1、为什么用HCl调PH值？

2、如何判断结晶的纯度？

3、滤液有析晶时调PH前，会出现什么结果？

（3）巴马汀氢化物的制备

一、目的

1、学习方法；

2、得到四氢巴马汀

二、原理

巴马汀四氢巴马汀（延胡索乙素

三、方法1g氯化巴马汀

30ml50%MeOH加热溶解

溶液

0.8~1.0gNaBH4（边加边摇至无色、无气泡产生时）6molHCl

调PH2至无气泡产生,NH4OH调PH9，静置，抽滤

沉淀

95%EtOH加热（回流）溶解，趁热抽滤

滤液

加2~3倍量的水，摇匀静置，抽滤

延胡索乙素

四、注意事项

1、NaBH4为强还原剂，避免长时间接触空气及用手接触；

2、加NaBH4时充分摇匀，使反应充分；

3、四氢巴马汀在碱液中易氧化成巴马汀。

五、思考题

1、加入NaBH4后，颜色由黄变无色、溶液变混浊的原因？

2、用6molHCl调反应液PH2至无气泡产生的原因？

此时的溶液呈什么现象？

3、用NH4OH调PH9原因、现象？

4、重结晶时，加入水的原因？

（4）鉴定

一、实验目的

1、学习生物碱的TLC检识方法

2、巴马汀、四氢巴马汀的定性鉴别（TLC、m.p.）

二、实验原理

用硅胶板进行巴马汀、四氢巴马汀的TLC检识，选用氨薰的方法避免生物碱在硅胶板上易拖尾的现象。

三、实验方法

1、TLC

点板→氨缸中放5min→展开槽展开→取出察看（可见光、荧光、显色剂）

样品：

巴马汀、四氢巴马汀的样品及对照品，用乙醇溶解

展开剂：

氯仿-甲醇（9：

1）

显色剂：

碘化铋钾

2、m..p.：

显微熔点仪，记录初始熔化时温度及完全溶化时温度。

四、注意事项

1、氨水有刺激性，操作时注意；

2、熔点测定时，样品量要少。

五、思考题

1、生物碱在硅胶板上展开为什么会拖尾？

2、避免生物碱在硅胶板上拖尾的方法有哪些？

3、如何选择生物碱TLC展开剂？

4、本实验在可见光和荧光下检识有什么现象？

为什么？

5、熔点测定时，样品量多会对测定结果有什么影响？

6、从鉴定结果如何判断样品的纯度？

实验二大黄中大黄素的提取、分离和鉴定

（1）酸水解

一、实验目的

1、学习酸水解的方法

2、得到大黄粉酸水解药渣

二、实验原理

大黄中蒽醌类化合物有结合态和游离态两种形式存在，为得到游离蒽醌类化合物，先酸水解，使蒽醌类化合物以苷元的形式游离出来。

三、方法

10g大黄粉

20%H2SO4直火回流加热1小时，抽滤

滤渣

水洗中性，干燥

滤饼

四、注意事项

1、药粉在水洗中性过程中尽量避免损失；

2、药渣干燥前要松散；

3、水解液酸性强，避免用手直接接触。

五、思考题

1、酸水加热为什么要用回流装置？

2、要得到大黄中的蒽醌苷元，还有什么办法？

（2）总羟基蒽醌苷元的提取

一、实验目的

1、学习连续回流提取方法

2、得到大黄中总羟基蒽醌苷元提取物

二、实验原理

苷元为亲脂性成分，用乙醚提取。

三、实验方法

滤饼

置索氏提取器中，加150mlEt2O,

提2.5hr（提取液无色）

Et2O液（大黄中总羟基蒽醌苷元）

四、注意事项

1、纸筒的包法：

原则是药粉不漏出

2、提取器的装法

（1）纸筒的高度不超过侧管的高度；

（2）药粉的高度不超过虹吸管的高度；

（3）线头在管内，保持提取器闭封。

3、溶剂的倒法

50ml由提取器上端倒入，浸泡药粉；100ml倒入平底烧瓶中。

4、温度的控制

溶剂蒸气至冷凝管第二个球处，水浴温度约60℃。

5、实验室禁止明火，实验过程中保持通风，尽量避免乙醚挥出。

6、平底烧瓶要干燥。

五、思考题

1、同回流提取相比，该方法的优点？

2、还可选用哪些溶剂提取？

3、若平底烧瓶中有水，将会有什么结果？

4、为什么温度控制在溶剂蒸气至冷凝管第二个球处？

（3）PH梯度萃取

一、实验目的

1、学习PH梯度萃取的方法和原理

2、得到大黄素粗品

二、实验原理

依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的酸性强弱不同，采用强弱不同的碱水萃取，得到大黄素。

三、实验方法

1、分离方法

乙醚液（T）

↓120ml（40mlX3）2.5%NaHCO3

↓-------------------------↓

乙醚液

（1）NaHCO3液

↓120ml（40mlX3）2.5%Na2CO3

↓--------------------------↓

乙醚液

（2）Na2CO3液

↓120ml（40mlX3）2.5%Na2CO3↓调pH3

↓－－－－－－－－↓沉淀　　

Na2CO3液乙醚层（3）

↓100ml（25mlX4）0.5%NaOH

↓－－－－－－↓

NaOH乙醚层（4）

2、TLC跟踪检查

硅胶-CMC-Na

展开剂：

Pet-EtOAc（7:

3）

样品：

乙醚液（T，1-4）

四、注意事项

1、分液漏斗使用前检查是否漏。

2、乙醚提取液倒入分液漏斗中，若有沉淀留在瓶中，用待萃取的碱液洗后再倒入分液漏斗中，直至沉淀全部被溶解。

3、产生乳化层，解决的方法是：

（1）轻摇；

（2）长时间静置；

（3）用电吹风加热

（4）玻棒搅动

（5）抽滤

4、待完全静置分层后放出水层。

五、思考题

1、萃取时碱水层的颜色？

2、比较五种蒽醌类化合物极性大小、酸性大小。

3、在TLC中，五种蒽醌类成分Rf值的大小顺序？

4、萃取大黄素时，碱水中若含少量乙醚，酸化后能得到沉淀吗？

5、判断各种蒽醌类成分分离的依据是什么？

6、你能设计出比该方法更完善的实验条件吗？

写出实验方法及验证方案。

（4）柱色谱精制大黄素

一、实验目的

1、学习硅胶柱色谱分离方法

2、得到大黄素精品

二、实验原理

依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚极性差异分离。

三、实验方法

1、装柱方法：

100~200目硅胶10g，用脱脂棉填柱子底端。

要求：

均匀，柱面平整紧密无气泡。

干法装柱：

小漏斗法，下端活塞打开，硅胶均匀地倒入柱中；

湿法装柱：

硅胶用洗脱剂拌均匀至无气泡，下端活塞打开，倒入柱中。

2、加样方法

要求：

原始色带小，均匀。

干法上样：

样品用少量丙酮溶解后，加少许（半牛角匙）硅胶拌匀，将丙酮挥尽后上于柱顶端。

湿法上样：

样品用少量（<1ml）洗脱剂溶解，用吸管移入柱顶端。

3、洗脱收集：

加洗脱剂洗脱，待色带冲下时，用瓶子分段收集。

分段标准：

（1）色带颜色

（2）10~15ml/瓶

洗脱剂：

Pet-EtOAc（7:

3）

4、合并浓缩：

TLC跟踪检查，合并大黄素液，回收至5ml左右。