高效液相色谱法测定辣椒中维生素C的含量.docx

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高效液相色谱法测定辣椒中维生素C的含量

收稿日期:

2008206201　　　　修改日期:

2008209201基金项目:

南京晓庄学院院级科研项目（2006NXY18作者简介:

胡应杰,男,南京晓庄学院化学系教师,硕士.

2008年11月第6期南京晓庄学院学报

JOURNALOFNANJINGXIAOZHUANGUNIVERSITYNov.2008

No.6

高效液相色谱法测定辣椒中维生素C的含量

胡应杰1

潘康标2

陈昌云1

柳闽生

1

（1.南京晓庄学院化学系,江苏南京210017;2.江苏省农产品质量检验测试中心,江苏南京210036

摘　要:

文章建立了一种高效液相色谱测定辣椒中维生素C含量的方法.采用0.1%的草酸作为

提取剂,色谱中采用Hypersil2C18色谱柱,pH=6,0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液:

甲醇=95∶5（v/v作流动相.流速1.0ml/min,DAD检测器,检测波长254nm.维生素C在20—100mg/L内有良好的线性关系,线性回归方程为y=29.664x-12.37,相关系数为0.9953,方法回收率为91.24%-105.6%,相对标准偏差小于2%.本文测定方法简便,快速,能准确测定辣椒中维生素C的含量.

关键词:

辣椒;高效液相色谱;维生素C

中图分类号:

O642　　文献标识码:

A　　文章编号:

100927902（20080620030203

0　引言

辣椒营养价值很高,堪称“蔬菜之冠”,其富含维生素B、维生素C、蛋白质、胡萝卜素、铁、磷、钙,以及糖等成分,尤其是维生素C的含量特别丰富,居蔬菜中的前列.每百克辣椒中所含维生素C比茄子多35倍,比西红柿多9倍,比大白菜多3倍.

维生素C又名抗坏血酸,是一类水溶性的活性物质,有较强的还原作用,及重要的生理功能.维生素C它广泛存在于新鲜的水果、蔬菜中

[122]

人体本身不能

合成,必须依靠膳食供给,因此研究水果蔬菜中维生素C的含量测定方法具有重要意义.维生素C测定的方法一般有化学法、比色法、紫外分光光度法、荧光法等,这些方法所需试剂较多、操作繁琐

[324]

.高效液

相色谱法具有高效、快速、稳定、可靠等特点

[5]

.在所测样品较多的情况下,借助仪器的分析方法能更快更准确的进1行含量的测定,且准确性较高.近年来用高效液相色谱法测定维生素C含量已有一些报道

[628]

但用此方法测定几种辣椒中的维生素C含量

尚未见报道.本文选择五种常见辣椒,通过液相色谱分离条件优化,建立了一种简便、快速、稳定的辣椒中各种维生素C含量测定方法.该方法同样适合于其它水果和蔬菜中维生素C的含量测定.

1　实验部分

1.1　仪器与试剂

HP1100高效液相色谱仪配有二极管阵列检测

器（美国惠普公司;色谱柱Hypersil2C18（5

μm,150mm×416mm（中国科学院兰州化学物理研究所;KQ5200B型超声波清洗器;AE系列电子天平（梅特

勒2托利多仪器上海有限公司;组织捣碎机,布氏漏斗,烧杯,25ml棕色容量瓶.维生素C标准对照品（维生素C含量99.17%,中国医药集团化学试剂公司;2次蒸馏水;甲醇（色谱纯,美国Fisher公司;草酸、盐酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾均为分析纯;市售青椒、虎皮尖椒、甜椒、杭椒、小红尖椒.

1.2　样品处理及实验条件

样品处理采用国标[9]

的方法:

将辣椒洗净,切开,放置于匀浆机中,加0.1%的草酸为提取剂,匀浆,然后用布氏漏斗过滤.称取5g样品滤液于50mL容量瓶中,用011%草酸溶液定容,分析前用0145μm滤膜过滤.高效液相色谱的条件:

A:

pH=6,0.05mol/L磷酸二氢钾,B:

甲醇（A:

B=95∶5v/v为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长254nm,进样量10μl,柱温20℃维生素C标准溶液的制备:

准确称取维生素C

标准品50mg于小烧杯中,用0.1%的草酸溶解,搅

—

03—

拌,转移至50ml棕色容量瓶中,加水定容,得到维生素C含量为1000μg/ml的标准溶液.

2　结果与讨论

2.1　维生素C提取剂的选择

维生素C溶液热稳定性较差,在中性或碱性水溶液中易被氧化,但在酸性溶液中却很稳定.提取维生素C的方法很多[3,9,10],为防止样品及标样中维生素C被氧化分解[8],用0.1%草酸溶液作溶剂来溶解样品及标样.

2.2　流动相的选择

考虑到维生素C在酸性环境中比较稳定,选择调节流动相的pH值为酸性.经过采用不同值的实验证明,pH值在5.0~6.5之间,维生素C的吸收比较大,灵敏度比较高,因此本文选择磷酸二氢钾为流动相,调节pH值为6.0[11].本文选择了配比分别为90∶10,95∶5,85∶15,80∶20的流动相,发现出峰快了,杂质干扰较大,峰不易分开,出峰慢了,实验时间变长,最后确定95∶5的配比.另外流动相必须现配现用,放久易产生多磷酸盐,且一般在低温下保存.

2.3　检测器波长的选择

维生素C在254nm有最大吸收,故选择254nm作为检测波长.

2.4　标准工作曲线的绘制:

用0.1%草酸溶液分别配制20、40、60、80、　　　　100mg・L-1维生素C标准溶液,定容至50ml,溶液用0.45μm滤膜过滤,用微量进样器进样10μL,依次测出峰面积.然后以维生素C标准溶液质量浓度（mg/L作自变量,相对应的峰面积作因变量,绘制标准工作曲线,如图1所示.标准曲线的相关系数R2=0.9953,说明曲线的线性关系良好

.

图1　维生素C的标准工作曲线

2.5　维生素C含量测定及精密度考察

五种辣椒样品都在同一实验条件下平行测定7次,维生素C含量的测定结果见表1,维生素C标准样品色谱图见图2,甜椒样品色谱图见图3.由表1可知,精密度实验的相对标准偏差小于2%,说明该方法重复性和再现性都是比较高的.从样品色谱图中可以看到,维生素C的出峰时间在2min左右,具有灵敏,快速的特点.由表1可知,五种辣椒中维生素C含量大小顺序为:

小红尖椒>青椒>甜椒>虎皮尖椒>杭椒.

表1　维生素C含量测定结果及精密度考察（n=7

样品Vc测定结果

（mg/100mL

平均值

（mg/100mL

标准偏差

相对标准偏差

（%

青椒6.67,6.64,6.64,6.51,6.72,6.74,6.516.630.231.40甜椒5.53,5.53,5.65,5.37,5.59,5.59,5.475.530.241.71虎皮尖椒5.04,4.94,5.06,5.07,4.94,5.02,4.834.980.221.70小红尖椒9.11,8.94,8.82,8.84,8.95,9.01,8.858.870.251.13杭椒4.49,4.50,4.46,4.48,4.50,4.64,4.484.510.141.30

2.6　回收率实验

在测定完样品溶液中的维生素C含量后,以小红尖椒样品做回收率实验,分别取样品2mL,向样品中加入质量浓度为100μg/mL的维生素标准溶液,定容至25mL,进行峰面积的测定,然后将得到的峰面积代入线性回归方程就可以得到相应的维生素C测量值,经计算即得到维生素C的回收率.回收率实验结果见表2.从表2中可以看到,当采用A:

pH6.0,0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液;B:

甲醇（A∶B=95∶5v/v作流动相测定小红尖椒中维生素C的含量,回收率为91.24%—105.6%,符合定量分析中准确度的要求.

表2　回收率实验结果

序号

样品中维生素

C量/mg

加入维生素C

标样量/mg

测得的维生素

C量/mg

回收率

/（%1177.4100254.1591.242177.4200360.8195.413177.4300503.20105.64177.4400574.9499.565177.4500693.94102.5

3　结论

由以上分析可知,本文采用的分析方法是可靠的,该方法同样也适用于于其它水果、蔬菜中维生素C含量的测定.由于维生素C对光不稳定,遇氧易分

—

1

3

—

图2　Vc

标准样品色谱图

图3　甜椒样品的色谱图

解,故本实验应避光操作,整个实验均用棕色容量瓶

定容[12213]

;流动相均需色谱纯度,水用高纯度水,脱气后的流动相要小心尽量不引起气泡;所有过柱子的液体均需严格的过滤;压力不能太大,最好不要超过15MPa.采用该方法对五种辣椒进行维生素C含量进行测定,结果表明,五种辣椒维生素C含量大小依次为:

小红尖椒>青椒>甜椒>虎皮尖椒>杭椒.参考文献:

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I2

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2432246.

（责任编辑:

陈昌云

DeterminationofVcinHotPepperbyHighPerformanceLiquidChromatography

HUYing2jie1

PANKang2biao2

CHENChang2yun1

LIUMing2sheng

1

（1.DepartmentofChemistry,NanjingXiaozhuangUniversity,Nanjing210017,China;2.AgriculturalProductsQualitySafetyCenterofJiangsuProvince,Nanjing210036,China

Abstract:

ApracticalmethodofdetectingthecontentofVitaminCindifferentkindsofhotPepperbyusingHPLCwasestablished.AHypersil-C18columnwasusedandthemobilephasewasamixtureof0.05mol/Lphosphoric

acidtwohydrogenpotassiumbuffersolutionandmethanol（95∶5,v/v.ThedetectorwasDADwiththeflowratebeing1.0ml/minandthedetectionwavelength,254nmintheHPLCsystem.ThestandardworkingcurveofVita2minChadagoodlinerrelationintheconcentrationrangingfrom20to100mg/l,thelinerequationwasy=291664x-12137,andtherelatedcoefficientwas0.9953.Therecoverieswere91.24%-105.6%andtherela2tivelystandarddeviationwasbelow2%.Thismethodwassimpleandfast,anditcanexactlydetectthecontentofVitamininhotpepper.

Keywords:

hotpepper;highperformanceliquidchromatography（HPLC;vitaminC

—

23—