高效液相色谱法测定辣椒中维生素C的含量.docx

1、高效液相色谱法测定辣椒中维生素C的含量收稿日期:2008206201修改日期:2008209201基金项目:南京晓庄学院院级科研项目(2006NXY18作者简介:胡应杰,男,南京晓庄学院化学系教师,硕士.2008年11月第6期南京晓庄学院学报JOURNAL OF NANJ I N G X I A OZ HUANG UN I V ERSI TY Nov .2008No .6高效液相色谱法测定辣椒中维生素C 的含量胡应杰1,潘康标2,陈昌云1,柳闽生1(1.南京晓庄学院化学系,江苏南京210017;2.江苏省农产品质量检验测试中心,江苏南京210036摘要:文章建立了一种高效液相色谱测定辣椒中维生

2、素C 含量的方法.采用0.1%的草酸作为提取剂,色谱中采用Hypersil 2C 18色谱柱,pH =6,0.05mol/L 磷酸二氢钾缓冲溶液:甲醇=955(v/v 作流动相.流速1.0m l/m in,DAD 检测器,检测波长254n m.维生素C 在20100mg/L 内有良好的线性关系,线性回归方程为y =29.664x -12.37,相关系数为0.9953,方法回收率为91.24%-105.6%,相对标准偏差小于2%.本文测定方法简便,快速,能准确测定辣椒中维生素C 的含量.关键词:辣椒;高效液相色谱;维生素C中图分类号:O642文献标识码:A 文章编号:100927902(2008

3、06200302030引言辣椒营养价值很高,堪称“蔬菜之冠”,其富含维生素B 、维生素C 、蛋白质、胡萝卜素、铁、磷、钙,以及糖等成分,尤其是维生素C 的含量特别丰富,居蔬菜中的前列.每百克辣椒中所含维生素C 比茄子多35倍,比西红柿多9倍,比大白菜多3倍.维生素C 又名抗坏血酸,是一类水溶性的活性物质,有较强的还原作用,及重要的生理功能.维生素C 它广泛存在于新鲜的水果、蔬菜中122,人体本身不能合成,必须依靠膳食供给,因此研究水果蔬菜中维生素C 的含量测定方法具有重要意义.维生素C 测定的方法一般有化学法、比色法、紫外分光光度法、荧光法等,这些方法所需试剂较多、操作繁琐324.高效液相色谱

4、法具有高效、快速、稳定、可靠等特点5.在所测样品较多的情况下,借助仪器的分析方法能更快更准确的进1行含量的测定,且准确性较高.近年来用高效液相色谱法测定维生素C 含量已有一些报道628,但用此方法测定几种辣椒中的维生素C 含量尚未见报道.本文选择五种常见辣椒,通过液相色谱分离条件优化,建立了一种简便、快速、稳定的辣椒中各种维生素C 含量测定方法.该方法同样适合于其它水果和蔬菜中维生素C 的含量测定.1实验部分1.1仪器与试剂HP1100高效液相色谱仪配有二极管阵列检测器(美国惠普公司;色谱柱Hypersil 2C 18(5m ,150mm 416mm (中国科学院兰州化学物理研究所;K Q52

5、00B 型超声波清洗器;AE 系列电子天平(梅特勒2托利多仪器上海有限公司;组织捣碎机,布氏漏斗,烧杯,25m l 棕色容量瓶.维生素C 标准对照品(维生素C 含量99.17%,中国医药集团化学试剂公司;2次蒸馏水;甲醇(色谱纯,美国Fisher 公司;草酸、盐酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾均为分析纯;市售青椒、虎皮尖椒、甜椒、杭椒、小红尖椒.1.2样品处理及实验条件样品处理采用国标9的方法:将辣椒洗净,切开,放置于匀浆机中,加0.1%的草酸为提取剂,匀浆,然后用布氏漏斗过滤.称取5g 样品滤液于50mL 容量瓶中,用011%草酸溶液定容,分析前用0145m 滤膜过滤.高效液相色谱的条件:A:pH

6、 =6,0.05mol/L 磷酸二氢钾,B:甲醇(A:B =955v/v 为流动相,流速为1.0m l/m in,检测波长254n m ,进样量10l,柱温20维生素C 标准溶液的制备:准确称取维生素C标准品50mg 于小烧杯中,用0.1%的草酸溶解,搅03拌,转移至50m l棕色容量瓶中,加水定容,得到维生素C含量为1000g/m l的标准溶液.2结果与讨论2.1维生素C提取剂的选择维生素C溶液热稳定性较差,在中性或碱性水溶液中易被氧化,但在酸性溶液中却很稳定.提取维生素C的方法很多3,9,10,为防止样品及标样中维生素C被氧化分解8,用0.1%草酸溶液作溶剂来溶解样品及标样.2.2流动相的

7、选择考虑到维生素C在酸性环境中比较稳定,选择调节流动相的pH值为酸性.经过采用不同值的实验证明,pH值在5.06.5之间,维生素C的吸收比较大,灵敏度比较高,因此本文选择磷酸二氢钾为流动相,调节pH值为6.011.本文选择了配比分别为9010,955,8515,8020的流动相,发现出峰快了,杂质干扰较大,峰不易分开,出峰慢了,实验时间变长,最后确定955的配比.另外流动相必须现配现用,放久易产生多磷酸盐,且一般在低温下保存.2.3检测器波长的选择维生素C在254nm有最大吸收,故选择254 n m作为检测波长.2.4标准工作曲线的绘制:用0.1%草酸溶液分别配制20、40、60、80、100

8、mgL-1维生素C标准溶液,定容至50m l,溶液用0.45m滤膜过滤,用微量进样器进样10L,依次测出峰面积.然后以维生素C标准溶液质量浓度(mg/L作自变量,相对应的峰面积作因变量,绘制标准工作曲线,如图1所示.标准曲线的相关系数R2=0.9953,说明曲线的线性关系良好 .图1维生素C的标准工作曲线2.5维生素C含量测定及精密度考察五种辣椒样品都在同一实验条件下平行测定7次,维生素C含量的测定结果见表1,维生素C标准样品色谱图见图2,甜椒样品色谱图见图3.由表1可知,精密度实验的相对标准偏差小于2%,说明该方法重复性和再现性都是比较高的.从样品色谱图中可以看到,维生素C的出峰时间在2m

9、in左右,具有灵敏,快速的特点.由表1可知,五种辣椒中维生素C含量大小顺序为:小红尖椒青椒甜椒虎皮尖椒杭椒.表1维生素C含量测定结果及精密度考察(n=7样品Vc测定结果(mg/100mL平均值(mg/100mL标准偏差相对标准偏差(%青椒6.67,6.64,6.64,6.51,6.72,6.74,6.516.630.231.40甜椒5.53,5.53,5.65,5.37,5.59,5.59,5.475.530.241.71虎皮尖椒5.04,4.94,5.06,5.07,4.94,5.02,4.834.980.221.70小红尖椒9.11,8.94,8.82,8.84,8.95,9.01,8.8

10、58.870.251.13杭椒4.49,4.50,4.46,4.48,4.50,4.64,4.484.510.141.302.6回收率实验在测定完样品溶液中的维生素C含量后,以小红尖椒样品做回收率实验,分别取样品2mL,向样品中加入质量浓度为100g/mL的维生素标准溶液,定容至25mL,进行峰面积的测定,然后将得到的峰面积代入线性回归方程就可以得到相应的维生素C测量值,经计算即得到维生素C的回收率.回收率实验结果见表2.从表2中可以看到,当采用A: pH6.0,0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液;B:甲醇(AB=955v/v作流动相测定小红尖椒中维生素C的含量,回收率为91.24%105.6

11、%,符合定量分析中准确度的要求.表2回收率实验结果序号样品中维生素C量/mg加入维生素C标样量/mg测得的维生素C量/mg回收率/(% 1177.4100254.1591.24 2177.4200360.8195.41 3177.4300503.20105.6 4177.4400574.9499.56 5177.4500693.94102.53结论由以上分析可知,本文采用的分析方法是可靠的,该方法同样也适用于于其它水果、蔬菜中维生素C含量的测定.由于维生素C对光不稳定,遇氧易分13 图2Vc 标准样品色谱图图3甜椒样品的色谱图解,故本实验应避光操作,整个实验均用棕色容量瓶定容12213;流动相

12、均需色谱纯度,水用高纯度水,脱气后的流动相要小心尽量不引起气泡;所有过柱子的液体均需严格的过滤;压力不能太大,最好不要超过15MPa .采用该方法对五种辣椒进行维生素C 含量进行测定,结果表明,五种辣椒维生素C 含量大小依次为:小红尖椒青椒甜椒虎皮尖椒杭椒.参考文献:1陆道礼,李国文,陈庶来,等.草莓汁加工贮藏过程中维生素C 稳定性的研究J .食品研究与开发,2004,25(6:1212123.2姜波,范圣第,刘长建.菠萝中维生素C 的高效液相色谱分析J .大连民族学院学报,2003,5(1:52253.3贾君.5种水果中维生素C 含量的测定研究J .冷饮与速冻食品工业,2004,10(2:3

13、3234.4冯德明.用高效液相色谱法测定饮料中维生素C 的含量J .嘉兴学院学报,2003,15(3:49252.5崔容,李皎,王洪伟.水溶性维生素的高效液相色谱测定方法的研究J .中国卫生检验杂质,2005,1(15:55257.6赵玉娟,等.牛肉样品中维生素C 的HP LC 测定J .现代仪器,2005,(5:32233.7周晓霞.用高效液相色谱(HP LC 法测定饮料中维生素C的含量J .饮料工业,2003,6(1:43246.8王艳颖,姜国斌,胡文忠,等.高效液相色谱测定法测定草莓中维生素C 的含量J .大连民族学院学报,2006,27(2:21227.9G B /T5009.86蔬菜

14、、水果及其制品中总抗坏血酸测定(荧光法和2,4一二硝基苯法S.2003.10王雪梅,等.HP LC 法测定新鲜草莓中水溶性维生素J .食品科学,1995,5:52253.11蒋晔,刘红菊,郝晓花.反相高效液相色谱法同时测定9种水溶性维生素J .药物分析杂志,2005,25(3:3392342.12高志杰,李静涛,饶小思.高效液相色谱2二极管阵列检测器法测定饮料中维生素C 的研究J .中国卫生检验杂志,2006,16(4:4462447.13GI Kvesitadze,AG Kalandiya,S O Papunidze1,et al .I 2dentificati on and quantif

15、icati on of ascorbic acid in ki w i fruit by high perf or mance liquid chr omat ographyJ .App l B i o 2che mMocr o2bile,2001,37(2:2432246.(责任编辑:陈昌云Determ i n ati on of Vc i n Hot Pepper by Hi gh Performance L i qui d Chro matographyHU Ying 2jie 1,P AN Kang 2biao 2,CHEN Chang 2yun 1,L I U M ing 2shen

16、g1(1.Depart m ent of Chem istry ,Nanjing Xiaozhuang University,Nanjing 210017,China;2.Agricultural Pr oducts Quality Safety Center of J iangsu Pr ovince,Nanjing 210036,China Abstract:A p ractical method of detecting the content of V ita m in C in different kinds of hot Pepper by using HP LC was esta

17、blished .A Hypersil -C 18colu mn was used and the mobile phase was a m ixture of 0.05mol/L phos phoricacid t w o hydr ogen potassiu m buffer s oluti on and methanol (955,v /v .The detect or was DAD with the fl ow rate being 1.0m l/m in and the detecti on wavelength,254nm in the HP LC syste m.The sta

18、ndard working curve of V ita 2m in C had a g ood liner relati on in the concentrati on ranging fr om 20t o 100mg/l,the liner equati on was y =291664x -12137,and the related coefficient was 0.9953.The recoveries were 91.24%-105.6%and the rela 2tively standard deviati on was bel ow 2%.This method was si m p le and fast,and it can exactly detect the content of V ita m in in hot pepper .Key words:hot pepper;high perf or mance liquid chr omat ography (HP LC ;vita m in C23