超有用的实验基本技能整理.docx

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超有用的实验基本技能整理

生物学中常用的试剂

斐林试剂:

成分:

0.1g/mlNaOH（甲液）和0.05g/mlCuSO4（乙液）.

用法:

将斐林试剂甲液和乙液等体积混合,再将混合后的斐林试剂倒入待测液,水浴加热或直接加热,如待测液中存在还原糖,则呈砖红色.

班氏糖定性试剂:

为蓝色溶液.和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀.用于尿糖的测定.

双缩脲试剂:

成分:

0.1g/mlNaOH（甲液）和0.01g/mlCuSO4（乙液）.

用法:

向待测液中先加入2ml甲液,摇匀,再向其中加入3~4滴乙液,摇匀.如待测中存在蛋白质,则呈现紫色.

苏丹Ⅲ:

用法:

取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中,摇匀.用于检测脂肪.可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）.

二苯胺:

用于鉴定DNA.DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色.

甲基绿:

用于鉴定DNA.DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色.

50%的酒精溶液:

鉴定脂肪时洗气薄片上的浮色

75%的酒精溶液:

用于灭菌

95%的酒精溶液:

冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA

15%的盐酸:

和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖.

龙胆紫溶液:

（浓度为0.01g/ml或0.02g/ml）用于染色体着色,可将染色体染成紫色,通常染色3~5分钟.（也可以用醋酸洋红染色）

20%的肝脏,3%的过氧化氢,3.5%的氯化铁:

用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率.（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）

3%的可溶性淀粉溶液,3%的蔗糖溶液,2%的新鲜淀粉酶溶液:

用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验.

碘液:

用于鉴定淀粉的存在.遇淀粉变蓝.

丙酮:

用于提取叶绿体中的色素

层析液:

（成分:

20份石油醚,2份丙酮,和1份苯混合而成,也可用93号汽油）可用于色素的层析,即将色素在滤纸上分离开.

二氧化硅:

在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入,可使研磨充分.

碳酸钙:

研磨绿色叶片时加入,可中和有机酸,防止在研磨时叶绿体中的色素受破坏.

0.3g/mL的蔗糖溶液:

相当于30%的蔗糖溶液,比植物细胞液的浓度大,可用于质壁分离实验.

0.1g/mL的柠檬酸钠溶液:

与鸡血混合,防凝血

氯化钠溶液:

可用于溶解DNA.当氯化钠浓度为2mol/L,0.015mol/L时DNA的溶解度最高,在氯化钠浓度为0.14mol/L时,DNA溶解度最低.

②浓度为0.9%时可作为生理盐水.

胰蛋白酶:

可用来分解蛋白质.

②可用于动物细胞培养时分解组织使组织细胞分散于.

秋水仙素:

人工诱导多倍体试剂.用于萌发的种子或幼苗,可使染色体组加倍,原理是可抑制正在分裂的细胞纺缍体的形成.

氯化钙:

增大细胞壁的通透性

常用染料和试剂的配制与使用

1.碘－硫酸法

植物细胞细胞壁的主要成分是纤维素，纤维素被硫酸水解后，遇碘呈蓝色反应。

因此用碘－硫酸法可鉴定细胞壁的成分。

试剂配制方法：

1%碘液将1.5克碘化钾溶于100毫升的蒸馏水中，待完全溶解后，加入1克碘，震荡溶解。

66.5%硫酸7份浓硫酸加入3份蒸馏水配制而成。

配制时要将浓硫酸慢慢地加入水中，并不断地用玻璃棒搅拌，否则会因急剧发热，而使容器炸裂。

2.苏丹Ⅲ反应

苏丹Ⅲ可将细胞中脂肪、栓质、角质染为桔红色，因此可用此染料显示出上述物质在细胞中的分布和位置。

配制方法：

将苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）染料0.1克，溶于10毫升95%酒精中，然后加入10毫升甘油。

3.间苯三酚反应法

间苯三酚反应是植物显微化学中确定木质化细胞壁的最常用和最简单的方法。

这一反应的原理是当间苯三酚在酸性环境下与细胞壁中的木质素相遇时，发生樱桃红色或紫红色反应。

其方法是将要鉴定的切片先用一滴1mol/L盐酸浸透（间苯三酚要在酸性环境下才能与木质素起作用），然后滴一滴5-10%间苯三酚的85%酒精溶液，木质化的细胞壁即发生颜色反应。

4．碘液测试淀粉法

淀粉遇碘呈蓝色反应，它是鉴定淀粉的最常用方法。

碘液配制方法：

将2克碘化钾放入5毫升蒸馏水中，加热使其完全溶解；然后加入1克碘，完全溶解后用蒸馏水稀释至300毫升，放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中，置于暗处保存。

测定淀粉时，可将上述溶液稀释2-10倍，使染色不致过深，效果更好。

5.压片法常用的染料

（1）醋酸洋红为压片法中最常用的染料。

配制方法是：

先将100毫升45%醋酸水溶液放于烧瓶中煮沸，移去火焰，停止加热。

然后缓慢加入1克洋红粉末，全部加入后再煮沸1-2分钟。

此时可将一枚生锈铁钉用棉线悬入溶液中约1分钟后取出（铁为媒染剂）。

静置12小时后经过过滤，放入磨口玻璃塞棕色瓶中保存备用。

（2）石炭酸---品红为近年创用的一种优良核染色剂，将细胞核和染色体染为红紫色，细胞质一般不着色，背景清晰。

其配制方法有二：

配方Ⅰ：

原液A：

取3克碱性品红溶于100毫升的70％酒精中（此液体可长期保存）。

原液B：

取10毫升原液A，加入90毫升5%的石炭酸（酚）水溶液中（可保存两周）。

染色液：

取55毫升原液B加6毫升冰醋酸和6毫升37%甲醛。

此染色液因含有较多的甲醛，可使原生质体硬化，而能保持其固有的形态。

但也因此不易使组织软化，因而不太适用于植物组织的染色体压片染色（本染色液适于植物原生质体培养中使用）。

在此基础上加以改进的配方Ⅱ，则可普遍地用于一般植物组织的染色体压片的染色。

配方Ⅱ：

取配方Ⅰ中的染色液20毫或加80毫升45%醋酸和1.8克山梨醇。

染色液配制后为淡品红色，如立即使用染色较浅。

放置2周后，染色能力显著增强，而且放置时间越久，染色效果越好。

6．铬酸－硝酸离析法

为了观察一个细胞完整的立体形态结构，可以用一些化学药品把细壁中的中层物质（果胶质）溶解，使细胞分离散开，便于观察。

离析前先把材料洗净，用刀切成1-2毫米宽的狭条（如叶片）或切成火柴棍粗细的长约1厘米的小条（如根或茎）。

然后把切好的材料放进小玻璃瓶中，加入离析液（加入量约为材料的20倍），塞紧瓶塞，放于30-40℃温箱中。

浸渍时间因材料性质而异，叶片和幼嫩的根茎组织3-4小时即可，而有些次生结构（如木质部）则需要更长的时间。

离析情况应随时检查，检查的方法是取少许离析材料，放在载玻片上，加一滴水，盖上盖玻片，然后用解剖针尖端轻轻敲打，如果材料分离则表明浸渍时间已够。

浸渍时间超过一天以上时，应更换离

析液一次。

离析时间已够的材料，用水洗净后放入70%酒精中保存。

离析液配方：

10%铬酸1份

10%硝酸1份

两种溶液应在使用时才混合，混合均匀后再使用。

荧光显微镜基本操作

开启显微镜汞灯；

.根据样品标记的荧光素选择相应的滤光片；

.放好样品，找到合适的视野；

.如需拍照，请确认照相机内已装好彩色胶卷（最好使用定胶卷）；

.开启自拍装置，选择手动档，通常拍摄速度在0.---0秒内；

.使用结束，关闭所有电源并做好使用记录。

.如需详细说明，请借阅说明书。

注：

A．为延长汞灯的使用寿命，汞灯开启不到分钟的请在分钟后关闭汞灯。

B．在荧光状态下观察标本，标本内的荧光染色会较快的衰减，所以要避免长时间的在荧光下观察

生化实验基本操作技术

一：

玻璃仪器的洗涤及干燥：

（一）意义：

去除干扰物，提高实验结果的准确性。

（二）常用洗涤剂：

1．洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉----用于一般去污。

2．强酸，强碱，尿素------去除蛋白质，核酸。

3．铬酸洗液------见附2。

4．水（自来水，蒸馏水）------用来冲洗容器。

（三）洗涤方法：

*洗涤程序：

泡→洗（→泡）→冲→漱

1．新仪器的洗涤：

2%的盐酸浸泡数小时→自来水冲净→洗涤剂溶液中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10遍→蒸馏水漱洗

内壁3遍→包装、消毒→干燥备用。

2．非定量敞口仪器的洗涤（试管、烧杯等）用后立即放入洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10遍→检查是否洗净→蒸馏水漱洗内壁3遍→包装、消毒→干燥备用。

注意：

检查毛刷顶部是否裸露，洗刷时用力不可过猛，以免戳破玻璃仪器。

3．窄口仪器的洗涤（容量瓶、试剂瓶）

使用后立即在洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→洗涤剂溶液倒入容器内（约1/4）→小心转动或摇动仪器→自来水冲10遍→检查是否洗净→蒸馏水涮洗内壁3遍→包装、消毒→干燥备用。

4．刻度吸管的洗涤

使用后立即用大量自来水冲洗（切勿使样品干在管内，否则难以洗净）→干燥后放入铬酸洗液中浸泡过夜→取出，在特制的容器中用自来水冲洗30分钟→蒸馏水涮洗内壁3遍→包装、消毒→干燥备用。

（四）判断洗净的标准：

洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍；被水湿润后，管壁呈现均匀水膜，无挂水珠。

（五）干燥方法

1、晾干：

仪器倒立放在特制架子上，自然晾干。

2、烘干：

尽量倒净仪器内部的水，将其倒立放在托盘上，放入烘箱烘干。

普通仪器用80-100℃，容量分析仪器用37-40℃。

3、有机溶剂干燥：

体积小的容器急需干燥时，可用此法。

洗净的仪器先用少量酒精洗一次，再用少量丙酮或乙醚洗涤，吹干（不必加热）。

二：

吸管和微量移液器的使用及注意事项：

（一）刻度吸管：

1．作用：

用于准确移取一定体积的溶液。

2．规格（ml）：

0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0。

3．注意事项：

1）使用前：

①观察吸管有无破损，污渍。

②观察吸管的规格：

所用吸管的规格应等于或近似等于所要吸取的溶液的体积。

③观察有无“吹”字：

若有，说明刻度到尖端，放液后需将尖端的溶液吹出，否则不吹。

2）握法：

拇指和中指夹拄吸管，食指游离。

3）取液：

①垂直入液②入液深度适中③洗耳球吸取④取液高度高于刻度2-3cm⑤食指按紧吸管

上端⑥刻度吸管提离液面⑦观察液内无气泡⑧滤纸擦净管壁。

4）放液至刻度：

①刻度吸管垂直②右眼与刻度线平行③轻轻松开食指（转动刻度吸管），使液面缓慢降低，直至最低点与刻度线相切。

5）放液至容器：

①刻度吸管垂直②容器倾斜45℃③使溶液自然流入容器，注意吹与不吹。

6）一根吸管只吸取一种试剂，用后立即浸入水中。

（二）微量移液器

1、作用：

用于准确移取一定体积的溶液，尤其是较小体积

的溶液（<100ul）。

2、规格：

固定式、可调式；单道、多道

1，2，10，20，100，200，1000（单位：

ul）

3、注意事项：

1）使用前：

①连续按压数次，以调节空气。

②调节体积至所需的刻度。

③接上Tip头，注意密封。

2）握法：

手掌握住器液器，拇指按压。

3）取液：

①轻压拇指至第一停点②垂直握持移液器，使Tip头浸入溶液③预洗一次④缓慢松开按钮，吸取溶液⑤等一秒钟，将移液器提离液面，擦去Tip头外液滴。

4）放液：

①Tip头贴住容器内壁②平稳地把按钮压至第一停点，等1秒钟再压至第二停点③提起移液器，Tip头贴容器壁擦过④松开按钮。

5）如吸取不同溶液必需更换Tip头。

三：

电动离心机的使用：

（一）作用：

分离密度不同的物质。

（二）分类：

低速离心机<4000rpm

高速离心机6000-20000rpm

超速离心机>20000rpm

（三）使用：

1、开机：

①将待离心溶液倒入大小适中的离心管中（溶液量不应超过离心管总体积的2/3）

②离心管连同管套一起放在粗天平上平衡（管套底部应放置橡皮垫）

③对称放入离心机插孔中（不用的管套应拿出），盖紧上盖。

④开关置于“关”，调速杆置于最小（逆时针旋转至转不动，接通电源，打开开关，缓慢启动。

⑤用调速杆沿顺时针方向缓慢调速，观察转速，达到转速后开始计时。

2、关机：

①用调速杆将沿逆时针方向缓慢降速，关掉开关，切断电源。

②停转后打开上盖，轻轻取样。

③离心管套倒立放置，使其干

实验室常见小故障的处理

实验室中常常会遇到一些意想不到的“小麻烦”，如瓶塞粘固打不开，仪器上的污垢难以除去，分液时发生乳化现象等等。

如能采取适当方法或技巧加以处理，这些麻烦就会迎刃而解。

1．打开粘固的玻璃磨口

当玻璃仪器的磨口部位因粘固而打不开时，可采取以下几种方法进行处理。

（1）敲击用木器轻轻敲击磨口部位的一方，使其因受震动而逐渐松动脱离。

对于粘固着的试剂瓶、分液漏斗的磨口塞等，可将仪器的塞子与瓶口卡在实验台或木桌的棱角处，再用木器沿与仪器轴线成约70°角的方向轻轻敲击，同时间歇地旋转仪器，如此反复操作几次，一般便可打开粘固不严重的磨口。

（2）加热有些粘固着的磨口，不便敲击或敲击无效，可对粘固部位的外层进行加热，使其受热膨胀而与内层脱离。

如用热的湿布对粘固处进行“热敷”、用电吹风或游动火焰烘烤磨口处等等。

（3）浸润有些磨口因药品侵蚀而粘固较牢，或属结构复杂的贵重仪器，不宜敲击和加热，可用水或稀盐酸浸泡数小时后将其打开。

如急用仪器，也可采用渗透力较强的有机溶剂（如苯、乙酸乙酯、石油醚及琥珀酸二辛酯磺酸钠等）滴加到磨口的缝隙间，使之渗透浸润到粘固着的部位，从而相互脱离。

2．打开紧固的螺旋瓶盖

当螺旋瓶盖拧不开时，可用电吹风或小火焰烘烤瓶盖周围，使其受热膨胀，再用于布包住瓶盖用力将其旋开。

如果瓶内装有不宜受热或易燃物质时，可取一段结实的绳子，一端拴在固定的物体上（如门窗把手），再把绳子按顺时针方向在瓶盖上绕一圈，然后一手拉紧绳子的另一端，一手握住瓶体用力向前推动，就能使瓶盖打开。

3．取出被胶塞粘结的温度计

当温度计或玻璃管与胶塞或胶管粘结在一起而难以取出时，可用小改锥或刀锉的尖端插入温度计（或玻璃管）与胶塞（或胶管）之间，使之形成空隙，再滴上几滴水，如此操作并沿温度计（或玻璃管）周围扩展，同时逐渐深入，很快就会取出。

也可用恰好能套进温度计（或玻璃管）的钻孔器，蘸上少许甘油或水，从温度计的一端套入，轻轻用力，边旋转边推进，当难以转动时，拔出再蘸上润滑剂，继续旋转，重复几次后，便可将温度计（或玻璃管）取出来。

4．清除仪器上的特殊污垢

在回流操作或浓缩溶液时，经常会有结晶析出在液面上方的烧瓶内壁上，且附着牢固，不仅不能继续参加反应，有时还会因热稳定性差而逐渐分解变色。

遇此情况，可轻轻振摇烧瓶，以内部溶液浸润结晶，使其溶解。

如果装置活动受限，不能振摇烧瓶时，可用冷的湿布敷在烧瓶上部，使溶剂冷凝沿器壁流下时，溶解析出的结晶。

5．溶解烧瓶内壁上析出的结晶

在回流操作或浓缩溶液时，经常会有结晶析出在液面上方的烧瓶内壁上，且附着牢固，不仅不能继续参加反应，有时还会因热稳定性差而逐渐分解变色。

遇此情况，可轻轻振摇烧瓶，以内部溶液浸润结晶，使其溶解。

如果装置活动受限，不能振摇烧瓶时，可用冷的湿布敷在烧瓶上部，使溶剂冷凝沿器壁流下时，溶解析出的结晶。

6．收拾洒落的汞

实验室中常用充汞压力计和水银温度计。

如果操作不当或温度计破损时，都会发生“洒汞事故”。

汞蒸气对人体危害极大，必须及时、彻底清理洒落的汞，不可任其流失。

清理方法较多，可依不同情况，选择使用。

（1）吸收洒落少量的汞，可用普通滴管，将汞珠一点一滴吸起，收集在容器中。

若汞量较大或洒落在沟槽缝隙中，可将吸滤瓶与一支75°玻璃弯管通过胶塞连接在一起，自制一个“减压吸汞器”，利用负压将汞粒通过玻璃管吸人滤瓶内。

吸滤瓶与减压泵之间的连接线可稍长些，以免将汞吸入泵中。

（2）粘附洒落在桌面（或地面）上的汞，若已分散成细小微粒，可用胶带纸粘附起来，然后浸入水下，用毛刷刷落至容器中。

此法简便易行，效果好。

（3）冷冻汞的熔点为-38．87℃。

如果在洒落的汞上面覆盖适量的干冰一丙酮混合物，汞就会在几秒钟之内被冷冻成固态而失去流动性，此时可较为方便地将其清理干净。

（4）转化对于洒落在角落中，用上述方法难以收起的微量汞，可用硫磺粉覆盖散失汞粒的区域，使汞与硫化合生成毒性较小的硫化汞，再加以清除。

7．消除乳化现象

在使用分液漏斗进行萃取、洗涤操作时，尤其是用碱溶液洗涤有机物，剧烈振荡后，往往会由于发生乳化现象不分层，而难以分离。

如果乳化程度不严重，可将分液漏斗在水平方向上缓慢地旋转摇动后静置片刻，即可消除界面处的泡沫状，促进分层。

若仍不分层，可补加适量水后，再水平旋转摇动或放置过夜，便可分出清晰的界面。

如果溶剂的密度与水接近，在萃取或洗涤时，就容易与水发生乳化。

此时可向其中加入适量乙醚，降低有机相密度，从而便于分层。

对于微溶于水的低级酯类与水形成的乳化液，可通过加入少量氯化钠、硫酸铵等无机盐的方法，促使其分层。

8．快速干燥仪器

当实验中急需使用干燥的仪器，又来不及用常规方法烘干时，可先用少量无水乙醇冲洗仪器内壁两次，再用少量丙酮冲洗一次，除去残留的乙醇，然后用电吹风吹烘片刻，即可达到干燥效果。

9．稳固水浴中的烧瓶

当用冷水或冰浴冷却锥形瓶中的物料时，常会由于物料量少、浴液浮力大而使烧瓶漂起，影响冷却效果，有时还会发生烧瓶倾斜灌入浴液的事故。

如果用长度适中的铅条做成一个小于锥形烧瓶底径的圆圈，套在烧瓶上，就会使烧瓶沉浸入浴液中。

若使用的容器是烧杯，则可将圆圈套住烧杯，用铁丝挂在烧杯口上，使其稳固并达到充分冷却的目的。

10．制作简易的恒温冷却槽

当某些实验需要恒温槽的温度较长时间保持低于室温时，用冷水或冰浴冷却往往达不到满意的效果。

这时可自制一个简易的恒温冷却槽：

用一个较大些的纸箱（试剂或仪器包装箱即可）作外槽，把恒温槽放入纸箱中作内槽，内外槽之间放上适量干冰，再用泡沫塑料作保温材料，填充空隙并覆盖住上部。

干冰的用量可根据实验所需温度与时间来调整。

这种冷却槽制作简便，保温效果好。

当玻璃仪器上粘结了特殊的污垢，用一般的洗涤方法难以除去时，应先分辨出污垢的性质，然后有针对性地进行处理。

对于不溶于水的酸性污垢，如有机酸、酚类沉积物等，可用碱液浸泡后清洗；对于不溶于水的碱性污垢，如金属氧化物、水垢等，可用盐酸浸泡后清洗；如果是高锰酸钾沉积物，可用亚硫酸钠或草酸溶液清洗；二氧化锰沉积物可用浓盐酸使其溶解；沾有碘时，可用碘化钾溶液浸泡；硝酸银污迹可用硫代硫酸钠溶液浸泡后清洗；银镜（或铜镜）反应后沾附的银（或铜），加入稀硝酸微热后即可溶解；焦油或树脂状污垢，可用苯、酯类等有机溶剂浸溶后再用普通方法清洗。

对于用上述方法都不能洗净的玻璃仪器，可用稀的氢氟酸浸润污垢边缘，污垢就会随着被蚀掉的玻璃薄层脱落，然后用清水清洗。

而玻璃虽然受到腐蚀，但损伤很小，一般不影响继续使用。

实验室日常小技巧集锦

平时在实验室最常听到的一句话就是“今天某某试验没做好是为什么？

今天某某试验没出结果是什么原因？

今天某某试验为什么会是这样的呢？

”等等。

然后仔细一查找原因，往往是由于操作上面的不认真，或是一些小小的细节没有注意到。

以下是集各路朋友的一些经验，与大家分享：

1跑page胶的时候，小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。

低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些，且分离效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分离。

2.提取质粒的时候，最后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。

所以这一步尽量挥发长一点时间，最好是空调吹热风，或是37度温箱放长一点的时间，我试过室温过夜，酶切很好。

3.做WESTERNBLOT的时候，大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大量的时间。

其实完全没有必要这样。

一次转膜后，将PVDF膜晾干，裁减成小块，保存起来，用的时候取出一块，没有任何影响。

这对于摸索条件的战友来说，节约了大量的时间。

4.有关缓冲液和培养基配置

1）将缓冲液配方中的成分分别以10－100倍配成母液储存，需要的时候只需将相应的母液混合，补加水稀释即可

2）配培养基时通常会忘记各成分的量，如配LB时的三个成分不记得到底哪个是5g，哪个要10个，因此可以在常用的试剂瓶的标签上注明所需的量，如配LB时，在NaCl瓶外注明10g/L,yeast5g/L,tryton10g/L等，很方便，不需要每次配之前临时翻书

5.有关PCR主反应液配置:

在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行PCR鉴定，每次配置PCR反应液很繁琐，可以将其配置类似kit的形式，按你需要的反应体系列表，然后放大100倍配置100×主反应液（100次反应），其中含buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和Taq酶，然后可以10×分装或一管储存在－20度，在需要的时候拿出融开，然后按所需的PCR反应个数吸取相应的倍数，再补加相应反应倍数的Taq和引物，混匀后分装，这样做的好处如下：

1）可极大的节省宝贵的时间，可早点收工，看球

2）避免每次反应加样不均的可能

3）大大减少PCR假阳性的产生

6.有关酶切反应液的配置:

在做酶切时，也可以象PCR一样配置主反应液，每次反应前先列好反应的体系，算好需要的反应数，然后按所需反应的体系按所需反应数放大，加入buffer、酶、水，质粒栏空缺，然后混合后按除质粒DNA的体积分装，然后再在每管中加入相应体积的质粒DNA酶切，这样做的好处如下，特别是当同时有10几个阳性克隆需要鉴定时尤为明显：

1）各反应成分均一

2）可大大减少限制型内切酶的使用

3）节省时间

7.有关SDS－PAGE：

1）可将SDS－PAGE的积层胶，分离胶预先配好大体积如100ml储存在4度冰箱（注：

10％AP，TEMED不加，切记！

！

！

），每次配置时只需吸取相应体积的预制胶加入AP，TEMED即可，没必要每次制胶时候翻分子克隆，特别方便，而且，这样的预制胶可储存半年以上，不失为偷懒的绝佳方法；更关键的是可大大减少与丙稀酰胺的接触，因此大大减少中毒的机会。

2）电泳时虽然小电泳分离效果要好一些，但2小时以上的等待的时间实在是痛苦，因此可以提高电泳至150V，但需要将整个电泳槽放在放满冰水的脸盆里散热，这样跑出来的胶分离效果丝毫不比低电压来的差，关键是时间大大节省，不需1h即可看结果了

8.实验中小窍门我想能够分成两类：

一类是“非常规”操作；一类是常规操作过程中一些省时省事手段。

前一类，我举个例子：

有时候第一天涂的转化平板、次日早晨转化子可能长成的菌落比较大（1~2毫米以上，BL21就长得快），下一步转化子做质粒鉴定。

这个情况下可以直接挑取一块菌苔（勿带出培养基），50微升酚/氯仿悬浮菌体，放置两分钟，加40微升TE抽提，上层TE吸出后再氯仿抽提一次，吸取上层TE即是质粒提取液。

提取的质粒可以直接用于电泳和酶切。

这样操作，可以省去转接液体试管的培养步骤，至少节省6~8小时的时间。

但是，要在各步骤都控制得很好的情况下才能保证提取和酶切的效果，不同的实验室或者操作者未必能够很方便地重复----其实，其它的一些“小窍门”也是如此。

后一类的小窍门则在实验室中无处不在。

如：

平行作不同样本的PCR,模板DNA加量一样，配置PCR体系可以一起配制后分装----这点做过试验的都知道，但是配制的时候配制量可以比预期分装量稍多一点（如用100微升则配110微升），这样可以避免有时候分装不够的尴尬，因为不同特别是大小不同的枪，会有误差。

再比如：

楼上有站友说的sds-page胶预配（APS和TEMED、或者后者先不加）的问题，实际上时间放置过长肯定影响效果，如果要在一天内连续地跑两次板，何尝不可？

又比如，配sds-p