凯氏定氮法大豆椰奶中蛋白质含量的测定样品比较挥发性盐基总氮的测定.docx

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凯氏定氮法大豆椰奶中蛋白质含量的测定样品比较挥发性盐基总氮的测定

任务六：

凯氏定氮法大豆、椰奶中蛋白质含量的测定（样品比较）挥发性盐基总氮的测定

【任务描述】

本任务过程设计为，首先用配制好已知浓度的氯化氨水溶液进行定氮烧瓶使用方法的演示和训练。

在进行操作方式的改进后再用其测定实验室提供的大豆样品的蛋白质含量。

整个任务过程主要包含大豆样品的粉碎、消化、定氮三个步骤测定出氮原子的含量，最后通过蛋白质系数对样品中的蛋白质含量进行换算，最终得出样品的蛋白质含量。

【本任务应掌握知识点及技能】

相关知识点

重点掌握技能

蛋白质区别于其他食品成分的主要标志

氮与蛋白质之间的关系

蛋白质系数的概念及意义

凯氏定氮法定量测定样品中氮原子的方法及原理

凯氏定氮中各种试剂的用途；

增温剂、脱水剂、氧化剂的概念及作用

掌握凯氏定氮装置的原理及操作技能；

掌握湿法消化的操作技能

掌握消化终点的判断技能

掌握混合指示剂的显色原理及作用

掌握记录各种实验现象的技能

掌握定氮装置的检查与洗涤技能

掌握如何使用蛋白质系数进行样品中蛋白质含量的技能

无氨蒸馏水的配制方法及作用

【任务相关参考资料的查阅（请按参考文献的标准方法记录）】

必需查阅的相关文献

食品中蛋白质的测定

GB5009.5—2010GB/T5009.5—2003

范围

本标准第一法和第二法适用于各种食品中蛋白质的测定，第三法适用于蛋白质含量在10g/100g以上的粮食、豆类、奶粉、米粉、蛋白质粉等固体试样的筛选测定。

本标准不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质的食品测定。

本方法第一法当称样量为5.0g时，定量检出限为8mg/100g。

本方法第二法当称样量为5.0g时，定量检出限为0.1mg/100g。

本标准适用于食品中蛋白质的测定。

不适用于添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质的食品测定。

第二法检出限为0.070ug/mL；线性范围为0-10.0ug/mL。

凯氏定氮法

试样称量的精确度

精确至0.001g

精确至0.01g

测定时样液的取量

根据试样中氮含量，准确吸取2.0mL～10.0mL试样处理液

10mL试样处理液

测定时指示剂的要求

其中2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液指示剂，颜色由紫红色变成灰色，pH5.4；1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液指示剂，颜色由酒红色变成绿色，pH5.1。

同时作试剂空白。

无要求

数据处理

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量≥1g/100g时，结果保留三位有效数字；蛋白质含量＜1g/100g时，结果保留两位有效数字。

结果保留三位有效数字

分光光度法

试样消解时的精确度

0.001g

0.1g

精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。

数据处理

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量≥1g/100g时，结果保留三位有效数字；蛋白质含量＜1g/100g时，结果保留两位有效数字。

无要求

燃烧法

无

原理

试样在900℃～1200℃高温下燃烧，燃烧过程中产生混合气体，其中的碳、硫等干扰气体和盐类被吸收管吸收，氮氧化物被全部还原成氮气，形成的氮气气流通过热导检测仪（TCD）进行检测。

仪器和设备

氮/蛋白质分析仪。

天平：

感量为0.1mg

分析步骤

按照仪器说明书要求称取0.1g～1.0g充分混匀的试样（精确至0.0001g），用锡箔包裹后置于样品盘上。

试样进入燃烧反应炉（900℃～1200℃）后，在高纯氧（≥99.99%）中充分燃烧。

燃烧炉中的产物（NOx）被载气CO2运送至还原炉（800℃）中，经还原生成氮气后检测其含量。

分析结果的表述

式中：

X——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）；

C——试样中氮的含量，单位为克每百克（g/100g）；

F——氮换算为蛋白质的系数

数据处理

结果保留三位有效数字

精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

GB/T5511-2008，谷物和豆类氮含量测定和粗蛋白质含量计算凯氏法[S]

本标准规定了用凯氏法测定谷物、豆类及衍生产品中氮含量的测定方法和粗蛋白质含量的计算方法。

本方法不能区分蛋白质氮和非蛋白质氮。

如果测定非蛋白质氮含量非常重要,可以使用其他合适

的方法。

注:

在特定情况下,使用本方法测定硝酸盐和亚硝酸盐中的氮无法达到完全回收

标标准推荐使用硫酸代替盐酸，因为硫酸在连接管中不产生气泡。

试样制备

如果需要,样品要进行研磨,使其完全通过0.8mm孔径的筛子。

对于粮食,至少要研磨200g样品,研磨后的样品要充分混匀。

称样

依据预估含氮量称量试样（第8章）,精确到0001g,使试样的含氮量在0005g-02g之间,最好大于0.02g

消化

转移试样到消解烧瓶,然后加人:

0.30g五水硫酸铜;0.30g二氧化钛（也可以使用符合规定成分的粒状催化剂）;20mL硫酸。

根据仪器情况调整硫酸的加人量,但应确认此改进可以满足对N-乙酰胺的回收率达到99.5%和对色氨酸的回收率达到99.0%。

小心混合以确保试样的完全浸润。

将烧瓶置于顶热到420℃±10℃的消化单元。

从消化单元温

度再次达到420℃±10℃时开始计时,至少消化2h,然后取下自然冷却。

注:

建议加人浮石作为沸腾调节器和加人如石蜡油的消泡剂。

最短消化时间应使用参考物质进行检验,因为参考物质很难达到回收率的要。

遵循设备制造商关于蒸汽排空的建议,因为过强的吸力可能导致氮的损失。

SN／T2497.20-2010,进出口危险化学品安全试验方法第２０部分：

犅狉犪犱犳狅狉犱法测定蛋白质含量[S]

本部分适用于进出口危险化学品安全试验Bradford法测定蛋白质含量。

原理

考马斯亮兰Ｇ-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由４６５ｎｍ变为595ｎｍ，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。

在595ｎｍ下测定的吸光度值Ａ595，与蛋白质浓度成正比。

考马斯亮蓝溶液配制

称100ｍｇ考马斯亮兰Ｇ250，溶于50ｍＬ９５％的乙醇后，再加入120ｍＬ８5％的磷酸，用水稀释至１Ｌ，滤纸过滤，４℃保存。

牛血清白蛋白（BSA）溶液

用ｇ-球蛋白或牛血清白蛋白（ＢＳＡ）配制成１．0ｍｇ／ｍＬ的标准蛋白质溶液。

试验步骤

标准曲线

用１．０ｍｇ／ｍＬ的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：

０ｍＬ、０．０１ｍＬ、０．０２ｍＬ、０．０４ｍＬ、０．０６ｍＬ、０．０８ｍＬ、０．１ｍＬ，然后用无离子水补充到０．１ｍＬ，各浓度２个平行样。

最后各试管中分别加入５．０ｍＬ考马斯亮兰Ｇ250试剂，振荡混匀，静置２ｍｉｎ。

在分光光度计上测定各样品在５９５ｎｍ处的光吸收值Ａ５９５。

用标准蛋白质量（ｍｇ）为横坐标，用吸光度值Ａ５９５为纵坐标，作图，即得到一条标准曲线。

样品检测

取合适体积的样品溶液（蛋白质含量在标准曲线范围内）并加水补足至０．１ｍＬ，３个平行样。

加入

５ｍＬ考马斯亮蓝溶液，振荡混匀，室温放置２ｍｉｎ。

在分光光度计上测定各样品在５９５ｎｍ处的光吸收值Ａ５９５。

凯氏定氮法测定蛋白质引起误差的主要因素

1、在消化过程中，消化时间，催化剂，浓硫酸都要一样，一定要消化完全。

2、蒸馏过程中，蒸馏出来的液体量一定要相同，因为不一样的蒸馏水，最后结果不一样，在蒸馏的过程中一开始要加入买的蒸馏水，蒸馏过程中加入的是自己用自来水蒸馏的。

该作者做了改进实验：

在用凯氏定氮仪时，在蒸馏时取的三个对比试剂比例为1：

10：

100，（根据蛋白质的量来确定的），并做了一个空白。

消化过程消化了2个小时左右，消化完全后蒸馏，接受瓶内液体相同。

最后把接收瓶都定容到1000ML容量瓶，然后各取100ML，用半微量滴定管滴定，最后减去空白用的量，最后计算结果。

得到的数据较好。

1.在做实验的时候，我觉得硫酸铜：

硫酸钾=1：

10这个比例一定要准确；

2.在清洗仪器的时候一定要清洗干净，如果不干净对实验的影响非常大；

3.密封一定要好，防止氨气的泄露

4.消化完全后，刚开始蒸馏的时候，蒸汽量不能过大，否则，氨来不及被吸收会溢出，影响检测结果

5.建议以逐步升温的方式加热，先将样品与硫酸、催化剂碳化完全后，再进行消化，开始硫酸加入的量可以预留2ml左右，用在后来消化到一定程度后，沿壁旋转加入清洗管壁上喷溅的消化液，保证消化的完全。

结果出现偏高的原因

1.回忆一下实验中是否有操作失误。

比如滴定的时候，等

2.用之前需要空蒸，没有空蒸数据会有偏差。

3.需要再次滴定盐酸浓度。

氢氧化钠的量太少了，可能会导致与残留的硫酸中和后，使剩下的氢氧化钠不足把NH3置换出来而影响结果

建议用全量法。

半微量法，是定容100ml后吸10ml测定，用半微量这个装置蒸馏时很容易倒吸，要重做，浪费时间。

而全量法，氢氧化钠是稍多用了些，但是误差小。

1、常量由于可以把全部消化液一同蒸馏测定，故较适合蛋白质含量低的样品。

2、微量、半微量差别在装置上，二者皆属于水蒸汽蒸馏操作，只是前者把蒸汽直接导入反应室内，后者把蒸汽导入反应室外加热，由于二者皆取消化液的一部份操作，可平行蒸馏操作，但检测限要较常量法高。

3、纯粹从回收率的角度看，半微量要稍好。

蛋白质含量偏低的原因

先试着检查下蒸馏装置有没有漏气的情况，如果没有，那建议做以下调整：

1、催化剂，用5g左右即可（硫酸铜：

硫酸钾1：

9磨碎混匀）；

2、适当延长消化时间，控制总时间在2小时左右；

3、加碱变黑后，再过量加入一点，不用太多；

4、蒸馏出的馏出液接收量不少于250ml。

张春迎,大豆食品中蛋白质含量的测定[C].上海师范大学.2000,2

沈建明,涂红梅.蛋白质测定方法的研讨[J].2000,2

本文主要研讨蛋白质消化速度,有针对性的调整消化时间,补充国标对消化时间考虑的不足,提高测定结果的准确性。

结论

本实验的标准液为尼克酰胺，不同消化液与不同体积的标准液对消化时间的影响。

蛋白质中总氮的的消化速度约为7.6mgN/h,这样,可根据各种试料蛋白质含量的不同,确定不同的消化时间,可明显提高总氮分析的准确性。

例如,酿造酱油的总氮约为1.0g/100mL,吸取1mL（约100mgN）进行消化需近1.4h才能完全;豆粕的总氮约为7%,称取0.500g（约35mgN）进行消化,需4.6h才能完全。

徐杰,苏立新.蛋白质测定过程中的几个关键环节[A].沈阳师范大学职业技术学院,辽宁沈阳.

本文主要介绍了凯氏微量蒸馏法测定蛋白质在消化、蒸馏和吸收、滴定等各个步骤中应注意的几个关键环节及多年的实验教学经验。

1　消化

测定蛋白质的第一步即为消化。

消化耗时大约2～3h,是极其复杂的反应过程。

消化过

程中最关键的问题是温度的控制，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的2/3，注意颜色变化。

消化过程的第二个关键问题是混合液的补加,一定不要使凯氏烧瓶干涸;所以在消化过程中要适量补加混合液。

第三个关键问题是勿使瓶壁有残渣附着,一定要消化完全彻底。

2　蒸馏和吸收

蒸馏和吸收相辅相成不可分隔。

此过程中最关键的环节之一是整套仪器的气密性,认真检查各部分之间的接头,防止漏气。

环节之二是加入蒸馏瓶中的40%NaOH溶液一定要过量。

环节之三是冷凝管下端一定要插入吸收瓶所盛放的硼酸溶液液面下1cm处。

3　滴定

滴定是整个实验过程中的最后一个步骤。

关键的环节是控制好滴定的速度,观察好滴定过程中溶液的颜色变化。

。

注意观察终点的颜色变化,由无色变成浅红色即为滴定终点,勿滴定过量。

4　消化过程中的小改进

改进后的装置是,在凯氏烧瓶的瓶口处加上一个带有玻璃导管的橡皮塞,玻璃导管通过乳胶管依次连接两个孟氏洗瓶,洗瓶中放入一半体积的水,用来吸收消化所放出的CO2、SO2。

CO2、SO2在水中的溶解度都很大。

这样就克服了在通风橱中消化的诸多缺点。

消化结束前一定要先拆开玻璃导管与孟氏洗瓶之间的胶管,再关闭电炉。

否则发生倒流现象,导致消化失败。

李存富.关于蛋白质测定中几个问题的理论分析与讨论[B].2004,9（138）.

本文主要对蛋白质测定中浓硫酸的用量、氢氧化钠溶液的用量以及滴定终点的确定等问题作了理论分析、讨论,。

们交流,以提高理论分析水平。

1、浓硫酸用量的确定

浓硫酸的作用

样品在消化时加入浓硫酸一是脱水作用；二是氧化作用；三是分解作用,；四是吸收作用,；五是生成的困保存在浓硫酸溶液中不至于损失。

浓硫酸用量的确定：

硫酸需过量

2、氢氧化钠溶液用量的确定

氢氧化钠溶液的作用是中和样品消化后剩余的浓硫酸，使烧瓶内的溶液呈强碱性。

3、滴定终点的确定

以5份嗅甲酚绿乙醇溶液和1份甲基红乙醇溶液混合而成的变色比较敏锐。

在常量凯氏定氮法中,滴定终点由蓝绿色消失刚变红色,，而在半微量和微量凯氏定氮法中则为蓝色刚好消失即为终点。

【初次实验操作步骤设计】

任务分块

操作步骤

实际操作步骤

试样处理

凯氏定氮装置的搭建

清洗定氮瓶

测定

数据处理

称取充分混匀的固体试样0.2g～2g、半固体试样2g～5g或液体试样10g～25g（约相当于30mg～40mg氮），精确至0.001g，移入干燥的100mL、250mL或500mL定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸，轻摇后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。

小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色并澄清透明后，再继续加热0.5h～1h。

取下放冷，小心加入20mL水。

放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。

同时做试剂空白试验。

1－电炉；2－水蒸气发生器（2L烧瓶）；3－螺旋夹；4－小玻杯及棒状玻塞；5－反应室；6－反应室外层；7－橡皮管及螺旋夹；8－冷凝管；9－蒸馏液接收瓶。

蒸汽发生器中盛有用几滴硫酸酸化的蒸馏水。

关闭皮管夹，将蒸汽发生器中的水烧开，让蒸汽通过整个仪器。

约15分钟后，在冷凝器下端放一个盛有5mL2％硼酸溶液和1—2滴指示剂混合液的锥形瓶。

位置倾斜，冷凝器下端应完全浸没在液体中，继续蒸汽洗涤1—2分钟，观察锥形瓶内的溶液是否变色，如不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。

向下移动锥形瓶，使硼酸液面离开冷凝管口约1cm，继续通蒸汽1分钟。

用水冲洗冷凝管口后用手捏紧橡皮管。

此时由于反应室外层蒸汽冷缩，压力减低，反应室内凝结的水可自动吸出进入反应室外层。

最后打开皮管夹，将废水排出。

向水蒸气发生器内装水至2/3处，加入数粒玻璃珠，加甲基红乙醇溶液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾。

向接收瓶内加入10.0mL硼酸溶液及1滴～2滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下，根据试样中氮含量，准确吸取2.0mL～10.0mL试样处理液由小玻杯注入反应室，以10mL水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞紧棒状玻塞。

将10.0mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。

夹紧螺旋夹，开始蒸馏。

蒸馏10min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min。

然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏液接收瓶。

以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定至终点，其中2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液指示剂，颜色由紫红色变成灰色，pH5.4；1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液指示剂，颜色由酒红色变成绿色，pH5.1。

同时作试剂空白。

试样中蛋白质的含量计算

式中：

X——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）；

V1——试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL）；

V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL）；

V3——吸取消化液的体积，单位为毫升（mL）；

c——硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

0.0140——1.0mL硫酸[c（1/2H2SO4）＝1.000mol/L]或盐酸[c（HCl）＝1.000mol/L]标准滴定溶液

相当的氮的质量，单位为克（g）；

m——试样的质量，单位为克（g）；

F——氮换算为蛋白质的系数。

一般食物为6.25；纯乳与纯乳制品为6.38；面粉为5.70；玉米、高粱为6.24；花生为5.46；大米为5.95；大豆及其粗加工制品为5.71；大豆蛋白制品为6.25；肉与肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵为5.30；复合配方食品为6.25。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量≥1g/100g时，结果保留三位有效数字；蛋白质含量＜1g/100g时，结果保留两位有效数字。

精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

硫酸氨溶液代替消化液

配制方法：

称取3.3000g硫酸氨与烧杯中，用少量的蒸馏水溶解，转移至200mL容量瓶，定容。

关闭皮管夹，将蒸汽发生器中的水烧开，让蒸汽通过整个仪器。

在冷凝器下端放一个盛有L2％硼酸溶液和2滴指示剂混合液的锥形瓶。

观察锥形瓶内的溶液是否变色，如不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。

移去锥形瓶，继续通蒸汽。

用手捏紧橡皮管，反应室内凝结的水自动吸出进入反应室外层。

最后打开皮管夹，将废水排出。

向接收瓶内加入10.0mL硼酸溶液及2滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下，10.0mL试样、10mL水和10.0mL氢氧化钠溶液由小玻杯注入反应室，立即夹紧螺旋夹，开始蒸馏。

蒸馏10min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min。

然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏液接收瓶。

以盐酸标准滴定溶液滴定至终点，接收瓶内指示剂为1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液，颜色变化为颜色由蓝紫色变浅绿色再无色。

【器材及试剂领取与配制】

试剂名称

作用

备注

98%浓硫酸

1、浓硫酸具有脱水性，使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮。

2、浓硫酸又有氧化性，将有机物炭化后的碳氧化为二氧化碳，硫酸被还原为二氧化硫：

2H2SO4+C＝CO2+2SO2+2H2O

3、二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫，氨随之与硫酸作用生成硫酸铵留在酸性溶液中

硫酸钾

作为增温剂，提高溶液沸点而加快有机物分解，它与硫酸作用生成硫酸氢钾可提高反应温度，一般纯硫酸沸点340℃，加入硫酸钾（1689℃）之后可以提高至400℃以上。

原因主要在于随着消化过程中硫酸不断的被分解，水分不断逸出而使硫酸钾浓度增大，故沸点升高。

但硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系温度过高，又会引起已生成的铵盐发生热分解放出氨而造成损失。

也可加入硫酸钠，氯化钾等提高沸点，但效果不如硫酸钾。

硫酸铜

作为催化剂。

还可以作消化终点指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。

反应不断进行，待有机物全部被消化完后，不再有硫酸亚铜生成（褐色），溶液呈现清澈的蓝绿色。

故硫酸铜除起催化剂的作用外，还可指示消化终点的到达，以及下一步蒸馏时作为碱性反应的指示剂。

除硫酸铜外还可以加氧化汞、汞（均有毒，价格贵）、硒粉、二氧化钛等，应用最广泛的是硫酸铜。

氧化剂

如双氧水、次氯酸钾等加速有机物氧化速度。

但要防止氨进一步氧化为氮。

一般说来，若有足够的其他还原剂，如碳，则添加氧化剂不致使测定结果偏低。

目前使用双氧水较多，但必须注意须待消化液完全冷却后再加入。

试剂名称

浓度/配制方法

硼酸溶液（20g/L）：

氢氧化钠溶液（400g/L）：

甲基红乙醇溶液（1g/L）：

甲基蓝乙醇溶液（1g/L）：

溴甲酚绿乙醇溶液（1g/L）：

混合指示液：

称取20g硼酸，加水溶解后并稀释至1000mL。

称取40g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100mL。

称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。

称取0.1g亚甲基蓝，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。

称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。

2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液临用时混合。

也可用1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。

【改进后任务策划】

任务内容

详述

样品的加热消化

样品的定氮操作及定氮瓶的清洗

称量消化

1、半固体和液体样品可以用减量法称取，比如酸奶，可以用小烧杯取一定量。

在天平上用减量法称取到消化管中，至于特别粘稠的半固体和固体，则可以称取在称量纸上，然后样品连同称样纸一起转移到消化管中，不过这时候得加做一个只放了称量纸的“空白”。

2、用无灰（又称无N）滤纸，其包装盒比较明显的颜色标志为浅绿色。

将样品倒在滤纸上，连同硫酸钾一同搞成小卷，塞入长颈烧瓶。

注意；定氮烧瓶，在使用前一定要干燥处理，防止瓶颈有水破坏包装。

硫酸一定要待样品卷塞进长颈瓶后，才能加入。

否则，瓶壁上的硫酸会腐蚀滤纸的。

绝不能用一般的滤纸或称量用纸。

3、直接把烘干的瓶子放天平上，直接加样称量。

4、用硫酸称量纸,称量后包起来一起消化.市场上有销售的.减去硫酸纸的量，硫酸纸只会有助于消化而不会增加N的含量液体，可以直接吸取，以每百ml计N或蛋白含量

定氮装置的检查与洗涤

检查微量定氮装置是否装好。

在蒸汽发生瓶内装水约三分之二。

加甲基红指示剂数滴几数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。

测定前定氮装置如下法洗涤2至3次：

从样品进口加水适量（约占反应管三分之一体积）通入蒸馏煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子