大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定.docx
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大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定
实验编号:
1
日期:
学时数:
6学时
地点:
任课教师:
实验目的:
掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法
实验原理:
大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。
主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。
从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。
实验对象:
大黄
主要仪器、试剂:
电热套、烧杯、20%硫酸、薄层硅胶G、0.5%CMC-Na。
实验操作步骤:
酸水解：
取大黄10g,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml，水浴上加热3-4小时,抽滤,滤饼水洗后自然干燥。
铺薄层硅胶G板:
薄层硅胶G:
0.5%CMC-Na（1:
3）
实验注意事项:
加热温度不要太高。
溶液保持微沸，防止药渣炭化。
不断搅拌。
后记:
实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定
实验编号:
2
日期:
学时数:
6学时
地点:
任课教师:
实验目的:
1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握蒽醌类的色谱鉴别方法。
实验原理:
大黄中有多种游离蒽醌及其苷类,总含量约2-5%。
主要有大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚以及它们的葡萄糖苷等。
从大黄中提取分离游离蒽醌时,先用20%硫酸加热使苷类水解，保留滤饼，滤饼用乙醚加热回流提取总蒽醌苷元（游离蒽醌），提取液作TLC鉴识。
实验对象:
大黄滤饼
主要仪器、试剂:
电热套、圆底烧瓶、冷凝管、乙醚、硅胶薄层板、石油醚、乙酸乙酯
实验操作步骤:
总羟基蒽醌苷元的提取：
取干燥滤饼，放入100ml圆底烧瓶中，加入乙醚50ml,回流提取3－4小时，得乙醚提取液。
乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。
薄层板为硅胶G-CMC-Na,展开剂为石油醚（60-90℃）－乙酸乙酯（７：
３），直立展开。
实验注意事项:
加热回流时电热套电压小于50v。
取石油醚（60-90℃）7ml,乙酸乙酯3ml,混合均匀。
。
控制点样量，注意点样斑点位置。
仔细观察斑点、溶剂前沿移动距离。
后记:
结论：
在可见光下可看到4个斑点，Rf最大的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物，其余3个斑点依Rf由大到小分别为大黄素（橙色斑点），芦荟大黄素（黄色斑点），大黄酸（黄色斑点
【实训目的】
1、能够运用回流提取法对大黄中总蒽醌类化合物进行提取
2、能够熟练运用pH梯度萃取法对大黄中游离蒽醌进行分离.
3、正确判断显色反应、薄层色谱的结果
【实训原理】
大黄中含有大黄素型游离蒽醌及其苷类,本实训利用大黄中的蒽醌类化合物均可溶于乙醇而提取,根据游离蒽醌及蒽醌苷在水和乙醚中溶解度的不同采用萃取方法分离.游离蒽醌的分离是利用各羟基蒽醌类化合物酸性不同,采用pH梯度萃取法进行.
【实训材料】
圆底烧瓶、冷凝管、研钵、水浴锅、分液漏斗、烧杯、三角瓶、表面皿、试管、层析缸、pH试纸薄层硅胶、CMC-Na、大黄粗粉、95%乙醇、乙醚、盐酸、三氯甲烷、5%KOH、5%Na2CO3、5%NaHCO3、0.5%NaOH、新华色谱滤纸（20cm×7cm）、苯-醋酸乙酯（8∶2）、苯-甲醇（8∶1）、甲苯、氨0.5%醋酸镁、1%大黄酸三氯甲烷溶液、1%大黄素三氯甲烷溶液、1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
【实训步骤】
1、乙醇总提取物的制备
游离蒽醌的提取取大黄粗粉50g,置于500ml圆底烧瓶中,加95%乙醇以约高出生药面为度,置水浴加热回流2～3小时,趁热抽滤.滤渣再以95%乙醇热提二次,趁热抽滤后合并三次乙醇提取液.浓缩乙醇提取液,得到乙醇总提取物.
2、总游离蒽醌的提取,亲脂性成分与亲水性成分分离
将乙醇总提取物浸膏加水适量混悬,加乙醚150ml于500ml分液漏斗中萃取,充分振荡后放置,倾出醚层,再加50ml乙醚振摇,放置,倾出醚层,同法操作6次,直至乙醚液呈色较浅时为止,合并乙醚液,乙醚溶液含总游离蒽醌.
3、蒽醌单体的分离
①大黄酸的分离
将含有游离蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中,加5%NaHCO3水溶液20ml,振摇.放置分层,放出下层NaHCO3溶液,置于另一三角瓶中,上层乙醚溶液留存于分液漏斗中,再加5%NaHCO3溶液15ml萃取一次,每次振摇提取后,放置分层时间应稍久,以免乙醚溶液混在下层水液中,影响分离效果.提取过程中,如乙醚挥发,可酌量补加.合并NaHCO3提取液,注意其呈色,在搅拌下小心滴加盐酸调pH2~3,观察酸化过程中的呈色变化,析出物抽滤收集,干燥后称重.
②大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液,用5%Na2CO3水溶液每次15～20ml如上法相同萃取数次,直至提取液呈色较浅时为止,约需6～7次,合并Na2CO3提取液,小心滴加盐酸酸化至pH2~3,放置待沉淀析出,抽滤收集析出物经水洗涤,抽干移至表面皿上,干燥后称重.③芦荟大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液,用0.5%NaOH水溶液每次15ml萃取3～4次.乙醚溶液再以蒸馏水萃取2～3次,以洗去碱液.合并NaOH和水的提取液,加盐酸调pH2~3,放置.抽滤析出沉淀,收集沉淀,经水洗,抽干移至表面皿上,干燥后称重.
④大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离
留存的乙醚液,置圆底烧瓶中,回收乙醚,放置.抽滤收集沉淀,经水洗,抽干移至表面皿上,干燥后称重.
4、鉴定
（1）碱液试验:
分别取蒽醌化合物结晶少许,置试管中,加1ml乙醇溶解,加数滴5%氢氧化钾试剂振摇,溶液呈红色.
（2）醋酸镁试验:
分别取各蒽醌化合物结晶少许,置试管中,加1ml乙醇溶解,加数滴0.5%醋酸镁试剂,产生橙、红、紫等颜色.
（3）薄层检识
吸附剂:
硅胶CMC-Na薄层板.
样品:
各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液
对照品:
1%大黄酸三氯甲烷溶液;1%大黄素三氯甲烷溶液;1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂:
苯-醋酸乙酯（8∶2）;苯-甲醇（8∶1）
显色:
氨熏后观察或喷5%氢氧化钾溶液后观察
（4）纸色谱检识
支持剂:
新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm）
样品:
各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液
对照品:
1%大黄酸三氯甲烷溶液;1%大黄素三氯甲烷溶液;1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂:
甲苯
显色剂:
0.5%醋酸镁甲醇溶液
【实训思考】
1、在实训过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌,萃取过程中若出现乳化现象,应如何处理?
2、大黄酚和大黄素甲醚结构相似,请设计分离方法.
3、实训中应注意哪些安全问题?
实验二芦丁的提取及鉴定
实验编号:
1
日期:
学时数:
8学时
地点:
新校区F楼6楼天然药物化学实验室
任课教师:
实验目的:
学习和掌握用碱提取—酸沉淀提取黄酮苷的原理和方法。
实验原理:
槐米中有黄酮苷—芸香苷（芦丁）,芸香苷（芦丁）是由槲皮素与芸香糖连接而成的二糖苷，能溶于热水。
本试验采用碱提取—酸沉淀提取芸香苷。
实验对象:
槐米
主要仪器、试剂:
电热套、烧杯、石灰水、PH试纸、抽滤瓶。
实验操作步骤:
1.提取：
槐花米—粉碎—碱水提取—加酸沉淀-—放置—粗品芦丁—精制—芦丁（纯品）。
2.粉碎:
称槐米40克，粉碎。
3.碱提:
在1000ml烧杯中加入500ml蒸馏水，加热煮沸后，将槐米粗粉投入，继续直火煮沸2-3分钟，在搅拌下，加入石灰乳，调PH8-9，加热保持微沸30分钟，趁热过滤收集，滤渣加160ml蒸馏水,加入石灰乳，调PH8-9，同上操作再提一次，滤液合并，滤渣弃去。
4.酸沉:
将滤液在60-70℃，小心加浓HCL，调PH3-4，放6小时以上，析出沉淀。
实验注意事项:
①碱提时加入石灰乳调PH8-9，不要太高。
②溶液保持微沸。
③酸化时将滤液在60-70℃，小心加浓HCL，调PH3-4，不要太低。
后记:
实验二芦丁的提取及鉴定（精制）
实验编号:
2
日期:
学时数:
8学时
地点:
新校区F楼6楼天然药物化学实验室
任课教师:
实验目的:
粗品芦丁的精制
实验原理:
粗品芦丁能溶于热水，去除不溶性杂质，最后用甲醇重结晶。
实验对象:
粗品芦丁
主要仪器、试剂:
电热套、圆底烧瓶、冷凝管、甲醇
实验操作步骤:
精制：
粗品芦丁放在1000ml烧杯中，加500ml蒸馏水，加热煮沸，至全部溶解，趁热抽滤，滤液放冷，即析出黄色沉淀，待沉淀完全后，抽滤，收集沉淀，干燥。
用甲醇重结晶，得精品芦丁。
实验注意事项:
（1）用甲醇重结晶时加热回流时电热套电压小于50v。
（2）粗品芦丁全部溶解，趁热抽滤。
（3）重结晶时甲醇的用量应适当，用量过多，则结晶不易析出；用量过少，又会带入较多的杂质。
后记:
实验二芦丁的提取及鉴定
实验编号:
3
日期:
学时数:
8学时
地点:
新校区F楼6楼天然药物化学实验室
任课教师:
实验目的:
（1）芦丁的水解，鉴定；
（2）掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷元和糖的鉴定方法。
实验原理:
，
实验对象:
精品芦丁
主要仪器、试剂:
电热套、圆底烧瓶、冷凝管、甲醇、正丁醇、醋酸、葡萄糖、鼠李糖、盐酸、镁粉、醋酸镁、醋酸铅、氧氯化锆、三氯化铝
实验操作步骤:
1.水解：
取1克芦丁加1%H2SO4100ml与烧杯中，加热微沸，30分钟，开始为澄清，逐渐析出黄色针状结晶，待沉淀完全后，抽滤，收集沉淀，水解母液留作糖的纸层析鉴定。
2.芦丁、槲皮素的鉴定：
（1）糖的检出——圆形滤纸层析
取水解芦丁的滤液20ml，加Ba（OH）2细粉中和至pH7，滤除生成的BaSO4白色沉淀，滤液在水浴上小心浓缩近干（约1ml）注意防止炭化，加甲醇5ml,作为检识糖的样品溶液。
展开剂：
正丁醇-醋酸-水（4-1-5上层）。
对照品：
葡萄糖、鼠李糖（各2mg，分别溶于2ml甲醇中）
展开方式：
径向展开
显色剂：
苯胺邻苯二甲酸盐试剂（或，邻苯甲酸苯胺），喷雾后，105℃加热3～5分钟，有糖处显棕色或棕红色斑点。
（2）化学方法鉴别黄酮类成分
a.盐酸-镁粉反应
b.醋酸镁反应
c.醋酸铅沉淀反应
d.氧氯化锆
e.点滴反应
实验注意事项:
①糖的检出——圆形滤纸层析点样量不要太多。
后记:
实验三氧化苦参碱的提取分离与纯制
实验编号：
1
实验日期：
实验地点：
任课教师：
学时数：
2+8
实验目的：
掌握渗漉法和离子交换法提取生物碱的方法和原理
实验原理：
1.生物碱溶于酸水
2.阳离子交换树脂提取、分离生物碱
实验对象：
苦参
主要仪器、试剂：
渗漉筒、烧杯、玻璃棒
阳离子交换树脂柱、阳离子交换树脂、pH试纸、培养皿
0.5%盐酸、碘化铋钾、蒸馏水
主要操作步骤：
总碱的提取：
（1）酸水提取：
称取250g风干粉碎的苦参中加入适量0.5%的盐酸液，使其浸没药料，充分湿润，放置一小时。
将如上酸水浸泡好的药材及溶液装入渗漉筒，待全部加完，继续补充加入0.5%的盐酸液，浸过药面，放置过夜（此步骤在实验前一天提前完成）。
继续加入0.5%的盐酸液或蒸馏水，（当渗漉液的酸性过大，改加蒸馏水渗漉，将渗漉液的pH控制在3-4之间）以1mL/min的流速进行渗漉，收集渗漉液约3750Ml,到渗漉液生物碱反应微弱为止。
（2）交换：
将上述渗漉液pH控制在3-4之间，上柱交换，流速自快至慢，流出液要经常以碘化铋钾检查，如发现有未被交换的生物碱流下时，可调整流速继续进行交换，待渗漉液全部通过树脂后，把树脂倒入烧杯中，用蒸馏水洗涤数次，除去非阳离子杂质，然后滤干，放入大培养皿中自然干燥。
实验注意事项：
装渗漉筒时，药材应压实，尽赶空气，渗漉筒切勿走干。
当渗漉液的酸性过大，改加蒸馏水渗漉，将渗漉液的pH控制在3-4之间。
如发现有未被交换的生物碱流下时，可调整流速继续进行交换。
离子交换树脂柱切勿走干。
后记：
（教学体会、学生对教学内容的反应等）
实验二氧化苦参碱的提取分离与纯制
实验编号：
2
实验日期：
学时数：
8
实验地点：
任课教师：
实验目的：
学习索氏提取器的使用方法
实验原理：
1.生物碱碱化后，溶于氯仿
2.索氏提取器氯仿连续提取将生物碱从阳离子交换树脂上洗脱下来
实验对象：
交换了生物碱的阳离子交换树脂
主要仪器、试剂：
索氏提取器、烧杯、水浴锅
阳离子交换树脂、圆底烧瓶、冷凝管、漏斗、滤纸
浓氨水、氯仿、丙酮
主要操作步骤：
总碱的提取：
（1）总碱洗脱：
将晾干后的树脂放入烧杯中，加浓氨水20mL，充分搅匀，使湿润度合适，（树脂充分膨胀，但又无不吸收的过剩水份溢出）盖好，静置20分钟后，装入索氏提取器中，用300mL氯仿在水浴上回流洗脱，至提尽生物碱为止。
回收氯仿，尽力抽干。
残剩物用2-3倍量丙酮溶解，尽快出现结晶，放置一定时间，过滤，得氧化苦参碱粗晶，（实际是总碱）用丙酮重结晶一次，得精品。
实验注意事项：
加浓氨水20mL，充分搅匀，使湿润度合适，使树脂充分膨胀，但又无不吸收的过剩水份溢出。
索氏提取器使用时要小心，易碎裂。
后记：
（教学体会、学生对教学内容的反应等）
实验二氧化苦参碱的提取分离与纯制
实验编号：
3
实验日期：
学时数：
8
实验地点：
任课教师：
实验目的：
学习使用Al2O3薄层、柱层析法分离鉴定生物碱的方法
实验原理：
生物碱可以采用Al2O3薄层、柱层析法分离
实验对象：
总碱粗品，Al2O3薄层，Al2O3柱层析
主要仪器、试剂：
层析柱、棉花、点滴板、试管、玻璃板、毛细管、
Al2O3、碘化铋钾、圆底烧瓶、冷凝管、漏斗、滤纸
甲醇、氯仿、丙酮
主要操作步骤：
氧化苦参碱的分离与纯制：
取一根洗净干燥的1：
45的层离柱，在下端塞一点棉花，倒入一些氯仿，使棉花湿润，并放出氯仿液，以赶尽气泡后，缓缓加入30g氧化铝，以氯仿作媒介湿法装柱，最后加入拌有200mg氧化苦参碱精品，薄层检查两个点的少量氧化铝，再放入一点棉花，先用30mL氯仿，后用氯仿:
甲醇（99：
1）的混合溶剂洗脱，流速控制1mL/min，流分每10mL收集一份，收集中要经常以点滴板做生物碱显色反应的检查，薄层检识后，相同流分合并，回收溶剂至干，得氧化苦参碱部分用少量丙酮溶解，放置析晶，所得纯品为氧化苦参碱，测mp，并进行薄层检识。
苦参生物碱的薄层层析：
样品:
氧化苦参碱标准品，粗品，柱层析中任一流份
展开剂：
氯仿：
甲醇19：
1或19.5：
0.5
显色剂：
改良碘化铋钾
实验注意事项：
湿法装柱要尽量赶尽气泡
氯仿:
甲醇（99：
1）的混合溶剂洗脱，流速控制1mL/min，不能过快。
流分每10mL收集一份，薄层检识后，相同流分再合并。
后记：
（教学体会、学生对教学内容的反应等）
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