第18章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题.docx
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第18章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题
第十八章全囱幼DNA测昏仪和蛋白质囱幼测昏
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首页习题习题参考答案
简答题
1.名词解释
1.荧光标记引物法
2.荧光标记终止底物法
3.多色荧光标记引物法
4.多色荧光标记终止底物法
5.Edman降解法
6.Sanger双脱氧链末端终I上法
7.平板电泳型DNA测序仪
8.毛细管电泳型DNA测序仪
9.缩微生物处理器
2.选择题
【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意的答案（最佳答案）。
1.DNA的一级结构是指（）：
A.D\A空间构象
B.核昔酸序列
C.碱基序列
D.氨基酸序列
E.D\A双螺旋结构
2.下列有关测序反应体系反应原理的叙述中，错误的是（）
A.加入的核昔酸单体为2'-脱氧核昔三磷酸
B.低温退火时，引物与模板形成双链区
C.沿着3'-5’的方向形成新链
D.D\A聚合酶结合到DNA双链区上启动DNA的合成
E.形成的新生链与模板完全互补配对
3.双脱氧链末端终止法测序反应与普通体外合成DNA反应的主要区别是（）
A.DNA聚合酶不同
B.dNTP的种类不同
C.dNTP的浓度不同
D.引物不同
E.双脱氧链末端终止法测序反应体系中还需加入ddNTP
4.下列荧光标记方法中，可以将A、C、G、T四个测序反应在同一管中完成而不影响测序结果的是（）
A.单色荧光标记引物法
B.单色荧光标记终止底物法
C.多色荧光标记引物法
D.多色荧光标记终止底物法
E.多色荧光标记法
5.下列哪一荧光标记法，必需将A、T、C、G四个测序反应分管进行，但可以合并在一个泳逍内电泳（）
A.单色荧光标记引物法
B.单色荧光标记终止底物法
C.多色荧光标记引物法
D.多色荧光标记终止底物法
E.多色荧光标记法
6.毛细管电泳型测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因是由于（）
A.电极弯曲
B.电泳缓冲液蒸发使液而降低
C.毛细管未浸入缓冲液中
D.毛细管内有气泡
E.测序样本未注入毛细管中
7.毛细管电泳型测序仪电泳时产生电弧，主要原因是（）
A.电泳缓冲液漏出
B.电泳缓冲液配有误
C.电极、加热板或自动进样器上有灰尘沉积
D.测序样本纯化不完全，含有盐性成份
E.加热板温度过高
8.全自动DNA测序仪的主要应用范围，不包括（）
A.人类遗传病、传染病和癌症的基因诊断
B.法医的亲子鉴立和个体识别
C.生物工程药物的筛选
D.动植物杂交冇种
E.新蛋白质的鉴定
9.蛋白质测序仪的基本工作原理，主要是利用（）
A.Edman降解法
B.双脱氧链末端终止法
C.化学降解法
D.氧化一还原法
E.水解法
10.蛋白质测序仪主要检测（）
A.核昔酸序列
B.核糖核酸序列
C.碱基序列
D.氨基酸序列
E.脱氧核糖核酸序列
11.下列有关双脱氧链末端终止法测序原理的叙述中，不正确的是（）
A.其基本原理是利用DNA的体外合成过程
B.反应体系中需加入dNTP和ddNTP
C.ddNTP可以形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中
D.dNTP掺入后可导致新合成链在不同的位置终止
E.生成的反应产物是一系列长度不同的多核苜酸片段
12.下列有关多色荧光标记终止底物法的叙述中，不正确的是（）
A.需将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记
B.标记和终止过程在同一时间完成
C.A、T、C、G四种反应可以在同一管中完成
D.可在一个泳道内完成电泳测序
E.荧光染料标记过程和延伸反应终止分别发生在同一DNA片段的两端
13.下列有关荧光标记DNA的检测原理的叙述中，不正确的是（）
A.用于测序的产物绝大多数应为单链
B.DNA片段上的荧光基团可吸收激光束提供的能量而发射岀特征波长的荧光
C.两极间的电势差推动DNA片段从正极向负级泳动并达到相互分离
D.不同颜色的荧光与不同的碱基信息相对应
E.测序结果中，纵轴表示荧光波长种类和强度
14.下列有关Edman降解法基本原理的叙述中，错误的是（）
A.PTC—多肽的生成是在弱碱性条件下
B.PTC-多肽的生成反应需用过量的试剂使有机反应完全
C.在无水强碱的作用下，可使靠近PTC基的氨基酸环化，形成ATZ衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽
D.剩余多肽链可以进行下一次以及后续的降解循环
E.ATZ衍生物经水溶酸处理转化为PTH氨基酸
15•毛细管电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因为（）
A.缓冲液配制错误
B.毛细管内有气泡
C.电泳缓冲液蒸发使液而降低，而未能接触到毛细管的两端
D.电极弯曲而无法浸入缓冲液中
E.加热板温度过髙
16.在单纯以测立DNA序列为目的的全自动DNA测序仪中，广泛应用的原理是（）
A.Edman降解法
B.双脱氧链末端终止法
C.化学降解法
D.氧化一还原法
E.水解法
17.双脱氧链末端终止法测序的基本原理是利用（）
A.RT-PCR
B・PCR
C・WesternBlot
D・SouthernBlot
E.水解法
18.测序反应体系中加入的酶为（）
A.限制性内切酶
B・RNA聚合酶
C.D\A聚合酶
D.D\A水解酚
E.反转录酶
19.在普通的体外合成DNA反应体系中，加入的核昔酸单体为（）
A・dAMP.dCMP>dGMP,dTMP
B・dADP,dCDP>dGDP,dTDP
C.dATP,dCTP,dGTP,dTTP
D.ddATP,ddCTP,ddGTP,ddTTP
E・ddADP,ddCDP,ddGDP.ddTDP
20.双脱氧链末端终止法测序反应中除PCR反应体系成份外，还加入了（）
A.D\A聚合酶
B・dNTP
C.dNDP
D.ddNTP
E・ddNDP
21.在DNA自动测序中广泛应用的示踪物是（）
A.色素染料
B.同位素
C.电化学发光物质
D.B
E.荧光素
22・下列有关多色荧光标记引物法标记引物的特性的叙述中.正确的是（）
A.四种标记引物的序列相同，但亍端标记的荧光染料颜色不同
B.四种标记引物的序列相同，但3'端标记的荧光染料颜色不同
C.四种标记引物的序列不同，英亍端标记的荧光染料颜色也不同
D.四种标记引物的序列不同，其3'端标记的荧光染料颜色也不同
E.四种标记引物的序列不同，英2'端标记的荧光染料颜色也不同
23.下列有关多色荧光标记引物法的叙述中，不正确的是（）
A.需将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的亍端
B.四种引物的序列相同，但标记的荧光染料颜色不同
C.A、T、C、G四个测序反应必需分管进行
D.上样时需分别在不同泳道内电泳
E.特左颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核昔酸底物保持对应关系
24.一般来说，D\A测序图中，其横坐标和纵坐标的意义是（）
A.横坐标代表荧光波长种类，纵坐标代表时间
B.横坐标代表荧光波长种类和强度，纵坐标代表时间
C.横坐标代表时间，纵坐标代表荧光波长种类
D.横坐标代表时间，纵坐标代表荧光波长种类和强度
E.横坐标代表荧光波长种类，纵坐标代表荧光波长强度
25.下列有关DNA自动测序仪自动进样器区功能的叙述中，不正确的是（）
A.毛细管进入样品盘标本孔中进样依靠自动进样器的移动完成
B.电极和毛细管一般均固泄不动
C.两级间极高的电势差可促进DNA分子在毛细管中很快泳动
D.电极为电泳的正性电极
E.样品盘有48孔和96孔两种，可一次性连续测试48或96个样本
26.下列有关DNA自动测序仪凝胶块区功能的叙述中，不正确的是（）
A.电泳时缓冲液阀关闭
B.电极为电泳的正性电极
C.在分析每一个样品前，泵自动冲掉上一次分析用过的胶，灌入新胶
D.注射器驱动杆可给注射器提供正压力，将注射器内的凝胶注入毛细管中
E・玻璃注射器可储存凝胶髙分子聚合物以及在填充毛细管时提供必要的压力
27.平板电泳型DNA测序仪的测序长度一般为（）
A.600bp~900bp
B・400bp~600bp
C.200bp〜400bp
D.900bp~1000bp
E・300bp~500bp
28.毛细管电泳型DNA测序仪的测序长度一般为（）
A.600bp~900bp
B・400bp〜600bp
C.200bp〜400bp
D.900bp~1000bp
E・300bp~500bp
【X型题】每题的备选答案中有两个或者两个以上正确答案。
1.目前D\A测序仪的工作原理，主要是利用（）
A.Edman降解法
B.双脱氧链末端终止法
C.化学降解法
D.氧化一还原法
E.水解法
2.下列有关多色荧光标记引物法的叙述中，正确的是（）
A.需将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的3'端
B.四种引物的序列相同，但标记的荧光染料颜色不同
C.A、T、C、G四个测序反应必需分管进行
D.上样时需分别在不同泳道内电泳
E.特左颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核昔酸底物保持对应关系
3.下列哪些荧光标记法必需将A、T、C、G四个测序反应分管进行（）
A.单色荧光标记引物法
B.单色荧光标记终止底物法
C.多色荧光标记引物法
D.多色荧光标记终止底物法
E.多色荧光标记法
4.下列有关单色荧光标记法原理的叙述中，正确的是（）
A.需将A、G、C、T四管反应分管进行
B.上样时需在不同泳道电泳
C.可用于标记ddNTP,也可用于标记引物
D.有可能因泳逍间迁移率不同而影响测序精度
E.仅适用于标记ddNTP,而不能标记引物
5.平板电泳型D\A测序仪电泳时仪器显示无电流，可能原因有（）
A.电极导线未接好或损坏
B.电泳缓冲液配制不正确
C.正极或负极舘金线断裂
D.正极或负极的胶而未浸入缓冲液中
E.倒胶时有气泡形成
6.采用荧光标记终止底物法的测序反应体系中，包含（）
A.DNA模板
B.引物
C.dNTP
D.ddNTP
E.水解酶
7.毛细管电泳型DXA测序仪电泳时仪器显示无电流，可能原因有（）
A.电泳缓冲液蒸发使液而降低，而未能接触到毛细管的两端
B.毛细管内有气泡
C.毛细管未浸入缓冲液中
D.电极弯曲而无法浸入缓冲液中
E.加热板温度过髙
8.导致毛细管电泳型DNA测序仪电极弯曲的原因有（）
A.测序时未进行电极左标操作就宜接执行电泳命令
13.下列有关DNA自动测序仪自动进样器区功能的叙述中，正确的是（）
A.毛细管进入样品盘标本孔中进样依靠自动进样器的移动完成
B.电极和毛细管一般均固定不动
C.D\A分子在毛细管中泳动的动力来自于两级间极高的压力差
D.电极为电泳的正性电极
E.样品盘有48孔和96孔两种，可一次性连续测试48或96个样本
14.下列有关DNA自动测序仪凝胶块区功能的叙述中，正确的是（）
A.电泳时缓冲液阀打开
B.电极为电泳的负性电极
C.在分析每一个样品前，泵自动冲掉上一次分析用过的胶，灌入新胶
D.注射器驱动杆可给注射器提供正压力，将注射器内的凝胶注入毛细管中
E.玻璃注射器可储存凝胶高分子聚合物以及在填充毛细管时提供必要的压力
15.下列有关缩微生物处理器结构和功能特点的叙述中，正确的是（）
A.基本结构为2层玻璃薄片和2层聚二甲基硅氧烷薄片
B.英形状为圆盘状，直径仅10厘米
C.可完成纳升级标本的SangerDNA测序
D.微瓣膜的功能包括在热循环反应时封闭反应小室，为反应提供封闭的空间
E.毛细管电泳通道由上下来回迂回的U型管道构成，总长度为30cm
三、问答题
1.简述双脱氧链末端终I上法测序原理。
2.简述多色荧光标记引物法的原理。
3.简述多色荧光标记终上底物法的原理。
4.荧光标记引物法和荧光标记终I匕底物法有哪些不同之处?
5.多色荧光标记DNA的检测原理是什么？
6.多色荧光标记DNA的检测有哪些优点？
7.与同位素标记相比，荧光标记在D7A测序中有哪些优点?
8.简要介绍介绍全自动测序仪的基本结构。
9.简要说明DNA自动测序仪检测区基本结构及功能。
10.毛细管电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，常见的原因是什么？
11.导致毛细管电泳型DNA测序仪电极弯曲的常见原因是什么？
12.毛细管电泳型DNA测序仪电泳时产生电弧，常见的原因是什么？
13.简述平板电泳型DNA测序仪的常见故障及维护。
14.简述全自动DNA测序仪主要应用于哪些方而？
15.简述蛋白质测序仪的结构及英各部件的功能。
16.简述蛋白质测序仪的主要应用。
17.简述缩微生物处理器的检测原理及其特点。
18.简述蛋白质测序仪的工作原理。
习题参考答案
1.名词解释
1.荧光标记引物法：
将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的亍端，称为荧光标记引物法。
2.荧光标记终I匕底物法：
将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苜酸上，称为荧光标记终I匕底物法。
3.多色荧光标记引物法：
是D\A测序反应常用的一种荧光标记方法。
将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的$端，当相同碱基排列的寡核昔酸链作为許架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4种）标记引物。
特左颜色荧光标记的引物则与特左的双脱氧核昔酸底物保持对应关系。
4.多色荧光标记终止底物法：
是DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。
将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苜酸上。
反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终止的同时，也使该片段3'端标上了一种特定的荧光染料。
根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。
5.Edman降解法：
是检测蛋白质一级结构的方法。
在弱碱条件下，多肽链N末端与PITC反应,生成PTC-多肽。
在无水强酸如三氣醋酸的作用下，可使PTC—多肽形成ATZ衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。
剩余多肽链可以进行下一次以及后续的降解循环。
如此不断循环，可依次使多肽链的氨基酸逐一降解，形成ATZ衍生物。
ATZ衍生物经水溶酸处理转化为稳泄的PTH氨基酸。
6.Sanger双脱氧链末端终止法：
是检测DNA序列的一种方法。
其原理是利用PCR,但反应体系中除了dNTP夕卜，还有ddNTP。
ddNTP可掺入到正在延伸的DNA链中，但不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA链在此终止。
由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核昔酸片段。
7.平板电泳型DNA测序仪：
为DNA测序仪的一种类型。
平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间,聚合后厚度一般小于0.4mm或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳。
它具有样品判读序列长（600bp〜900bp）、一块凝胶板上可同时进行多个样品测序的优点。
8.毛细管电泳型DNA测序仪：
为DNA测序仪的一种类型。
将凝胶高分子聚合物灌制于毛细管中（内径50pm〜100pm）,任高压及较低浓度胶的条件下实现DNA片段的快速分离。
9.缩微生物处理器：
是一种新型DNA自动测序装置。
其基本结构为3层玻璃薄片和一层聚二甲基硅氧烷薄片，各层间紧密粘合形成圆盘状，直径仅10厘米。
在这些薄片之间有各种反应小室、毛细管电泳通道和微瓣膜，可完成纳升级标本的SangerDNA测序。
2.选择题
【A型题】
1・
B
2.
C・
3・E
4・D
5・C.
6・B
7.C.
8・E
9・A
10.D
11.
D
12.E
13.C.
14.C.
15.C
16.B
17.B
18.C.
19.C.
20.D
21.
E
22.A
23.D
24.D
25.D
26.A
27.A
28.E
【X型题】
1.BC.
2.BCE
3.ABC.
4.ABCD
5.ABCD
6.ABCD
7.ABCD
8.ACD
9.ABCD
10.BCDE
11.BDE
12.ABDE
13.ABE
14.ACDE
15.BCDE
三、问答题
1.简述双脱氧链末端终止法测序原理。
答：
双脱氧链末端终止法测序原理是利用DNA的体外合成过程。
反应体系中的核昔酸单体除了4种dNTP夕卜，还有ddNTP.反应过程中ddNTP虽然可以与正在延伸的DNA链的末端形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中，但它们本身没有3'-0H,不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的D7A链在此终止。
据此原理分别设计四个反应，每一反应中存在相同的D\A模板、引物、四种dNTP和一种ddNTP（如ddATP）,则新合成的DNA链在可能掺入正常dNTP的位苣都有可能掺入ddNTP而导致新合成链在不同的位置终止。
由于存在ddNTP与dNTP的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核昔酸片段。
通过PAGE对长度不等的新生链进行分离后，就可根据片段大小直接读出新生DNA链的序列。
2.简述多色荧光标记引物法的原理。
答：
荧光标记引物法是指将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的亍端。
当相同碱基排列的寡核苜酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4种）标记引物。
这四种引物的序列相同，但5'端标记的荧光染料颜色不同。
在测序反应中，模板、反应底物、DNA聚合酶及标记引物等按A、T、C、G编号被置于4支微量离心管中，A、T、C、G四个测序反应分管进行，上样时合并在一个泳道内电泳。
特左颜色荧光标记的引物则与特左的双脱氧核昔酸底物保持对应关系。
3.简述多色荧光标记终I上底物法的原理。
答：
荧光标记终止底物法是指将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核昔酸上。
反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终止的同时，也使该片段丁端标上了一种特泄的荧光染料。
经电泳后将各个荧光谱带分开，根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。
4.荧光标记引物法和荧光标记终止底物法有哪些不同之处？
答：
荧光标记引物法是将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的亍端。
荧光标记终I匕底物法是将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核昔酸上。
两种掺入方式的区别在于，前者的荧光染料标记过程和延伸反应终止分别发生在同一DNA片段的两端，且标记发生在引物与模板的退火过程中，而终止是发生在片段延伸过程中，两者在时间上有一左间隔。
而后者使标记和终止过程合二为一，两者在同一时间完成。
在具体操作中，前者要求A、C、G、T四个反应分別进行，而后者的四种反应可以在同一管中完成。
5.多色荧光标记DNA的检测原理是什么？
答：
在采用多色荧光标记DNA的自动测序系统中，两极间极髙的电势差推动各个荧光DM片段在凝胶高分子聚合物中从负极向正级泳动并达到相互分离，且依次通过检测窗口。
激光器发出的光束激发荧光DNA片段，荧光发色基团发射岀特征波长的荧光。
这种代表不同碱基信息的不同颜色荧光经过光栅分光后再投射到CCD摄像机上同步成像。
收集的荧光信号再传输给讣算机加以处理。
整个电泳过程结束时在检测区某一点上采集的所有荧光信号就转化为一个以时间为横轴坐标，荧光波长种类和强度为纵轴的信号数据的集合。
6.多色荧光标记DNA的检测有哪些优点?
答：
由于采用多色荧光标记技术，一个样本的四个测序反应产物可以同时在一个泳道内电泳，避免单一标记时四个泳道测序因泳道间迁移率不同对精确度的影响，提高了测序精度。
另外，一个样品所有反应产物只需进样一次，所以一次实验便可以处理较之手工方法更多的样品。
在相同样品数的情况下,加样的工作量也大大减少。
7.与同位素标记相比，荧光标记在D7A测序中有哪些优点？
答：
电泳后对不同长度DNA新生链进行分析时，需要有可以检测的示踪信号。
早期采用同位素法标记新生链，因英具有放射性危害、背景髙等缺点而很快被荧光染料标记法所取代。
荧光染料的荧光和散射背景较弱，提高了信噪比；它们的激发光谱较接近而发射光谱均位于可见光范围，且不同染料的发射光谱相互分开，易于监测，故在D\A自动测序中得到广泛应用。
8.简要介绍介绍全自动测序仪的基本结构。
答：
全自动DNA测序仪主要由主机、微型il•算机和各种应用软件等组成。
主机主要包括电泳系统、激光器和荧光检测系统等。
大致可分为以下几个结构功能区：
（1）自动进样器区：
装载有样品盘、电极（负极）、电极缓冲液瓶、洗涤液（蒸怖水）瓶和废液管。
（2）凝胶块区：
括注射器驱动杆、样品盘按钮、注射器固左平台、电极（正极）、缓冲液阀、玻璃注射器、毛细管固左螺母和废液阀等部件。
（3）检测区检测区内有激光检测器窗口及窗盖、加热板、毛细管、热敏胶带。
9.简要说明DNA自动测序仪检测区基本结构及功能。
答：
DNA自动测序仪检测区基本结构包括：
1激光检测器窗口及窗盖：
激光检测器窗口正对毛细管检测窗口，从仪器内部的氮离子激光器发出的激光可通过激光检测器窗口照到毛细管检测窗口上。
电泳过程中，当荧光标记DNA链上的荧光基团通过毛细管窗口时，受到激光的激发而产生特征性的荧光光谱，荧光经分光光栅分光后投射到CCD摄像机上同步成像。
窗盖起固左毛细管的作用，同时可防止激光外泄：
2加热板：
电泳过程中起加热毛细管的作用，一般维持在50°C；
3毛细管：
为填充有凝胶高分子聚合物的玻璃管，直径为50pm,电泳时样品在毛细管内从负极向正极泳动：
4热敏胶带：
将毛细管固定在加热板上。
10.毛细管电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，常见的原因是什么？
答：
最常见的原因是由于电泳缓冲液蒸发使液而降低，而未能接触到毛细管的两端（或一端）。
苴它可能原因包括电极弯曲而无法浸入缓冲液中、毛细管未浸入缓冲液中、毛细管内有气泡等。
因此，遇到此类问题时，应首先检查电极缓冲液，然后再检査电极和毛细管。
11.导致毛细管电泳型DNA测序仪电极弯曲的常见原因是什么？
答：
主要原因是安装、调整或淸洗电极后未进行电极左标操作就直接执行电泳命令，电极不能准确插入各管中而彼样品盘打弯。
其它如运行前未将样品盘归位、或虽然执行了归位操作，但X/Y轴归位尚未结束就运行Z轴归位等情况下，也容易将电极打弯。
12.毛细管电泳型D7A测序仪电泳时产生电弧，常见的原因是什么？
答：
主要原因是电极、加热板或自动进样器上有灰尘沉积，此时应立即停机，并淸洗电极、加热板或自动进样器。
13.简述平板电泳型DNA测序仪的常见故障及维护。
答：
（1）电泳时仪器显示无电流可能原因包括：
①电泳缓冲液配制不正确；②电极导线未接好或损坏；③正极或负极钳金丝断裂；④正极或负极的胶面未浸入缓冲液中。
（2）传热板粘住胶板主要原因为上方的缓冲液室漏液。
此时应将上方的缓冲液倒掉，并卸下缓冲液室，松开胶板固左夹，将传热板顺着胶板向上滑动，直至与胶板分开。
淸洗传热板，同时检査缓冲液室漏液的原因，并采取相应措施，防止漏液。
（3）其它①倒胶前应按照操作要求认真淸洗玻璃板，用未淸洗干净的胶板倒胶时易产生气泡、或者产生较髙的荧光背景：
②配制凝胶时应注意胶的浓度、TEMED含量、尿素浓度等，并注意防止其它物质（尤貝是荧光物质）的污染；③倒胶时需注意不能有气泡，用固龙夹固泄胶板时，四周的力度应均匀一致；④将待测样品加入％孔前，应使用缓冲液冲洗各孔，把尿素冲去，以免影响电泳效果。
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