USP55 生物指示剂抗性测试.docx
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USP55生物指示剂抗性测试
USP
55
BIOLOGICALINDICATORS—RESISTANCEPERFORMANCETESTS
生物指示剂－抗性测试
TOTALVIABLESPORECOUNT
活孢子数总数计数
Removethreespecimensoftherelevantbiologicalindicatorfromtheiroriginalindividualcontainers.Dispersethepaperintocomponentfibersbyplacingthetestspecimensinasterile250-mLcupofasuitableblendercontaining100mLofchilled,sterilizedPurifiedWaterandblendingfor3to5minutestoachieveahomogeneoussuspension.Transfera10-mLaliquotofthesuspensiontoasterile,screw-capped16-×125-mmtube.
从生物指示剂的原包装袋中取出3支作为样本。
把待测样品放入一个已灭菌的250mL有搅拌器的杯子里，杯子内装100mL放冷的灭菌纯化水。
把杯子里的纸片磨碎成纤维状，并混合3～5min使之成为均一的悬浮液。
转移10ml的整数倍的悬浮液至一个已灭菌的16×125mm的螺盖管中。
ForBiologicalIndicatorforSteamSterilization,PaperCarrier,heatthetubecontainingthesuspensioninawaterbathat95
to100
for15minutes（heatshock）,startingthetimingwhenthetemperaturereaches95
.
如果是纸载的蒸汽灭菌生物指示剂，则把装有悬浮液的管放入95℃～100℃水浴15min（热休克），在悬浮液温度达到95℃时开始计时。
ForBiologicalIndicatorforDry-HeatSterilization,PaperCarrier,andforBiologicalIndicatorforEthyleneOxideSterilization,PaperCarrier,heatthetubecontainingthesuspensioninawaterbathat80
to85
for10minutes,startingthetimingwhenthetemperaturereaches80
.Coolrapidlyinanicewaterbathat0
to4
.
如果是纸载的干热灭菌生物指示剂及环氧乙烷灭菌生物指示剂，则把装有悬浮液的管放入80℃～85℃水浴10min，在悬浮液温度达到80℃时开始计时。
在0℃～4℃冰浴中迅速冷却。
Transfertwo1-mLaliquotstosuitabletubes,andmakeappropriateserialdilutionsinsterilizedPurifiedWater,thedilutionsbeingselectedascalculatedtoyieldpreferably30to300colonies,butnotlessthan6,oneachofapairofplateswhentreatedasdescribedbelow.
转移2个1ml的悬浮液到合适的试管，用灭菌纯化水进行适宜的系列稀释，所选稀释液要求在进行下述操作后能达到30～300CFU／皿，但不少于6CFU／皿。
Wherethebiologicalindicatorhasalowsporeconcentration,itmaybenecessarytomodifythedilutionseriesandtousemoreplatesateachdilution.Prepareaseparateseriesofplatesforeachaliquot.Place1.0mLofeachselecteddilutionineachoftwo15-×100-mmPetridishes.Within20minutes,addtoeachplate20mLofSoybean–CaseinDigestAgarMedium（seeMicrobialLimitTests
61
）thathasbeenmeltedandcooledto45
to50
.Swirltoattainahomogeneoussuspension,andallowtosolidify.
如果此生物指示剂的孢子浓度较低，则有必要改变稀释系列，在每个稀释级增加更多的平皿。
每一取整数倍制备一个单独的系列平皿。
分别取1.0mL所选的稀释液加入两个15×100mm的平皿中。
在20min内，向每个平皿中倒入20mL溶解并冷却到45℃～50℃的大豆－酪蛋白消化物琼脂（参考MicrobialLimitTests
61
）。
混合均匀，待其凝固。
Incubatetheplatesinaninvertedpositionat55
to60
forBiologicalIndicatorforSteamSterilization,PaperCarrier,andat30
to35
forBiologicalIndicatorforEthyleneOxideSterilization,PaperCarrier,andforBiologicalIndicatorforDry-HeatSterilization,PaperCarrier,orattheoptimalrecoverytemperaturespecifiedbythemanufacturer,andexaminetheplatesafter24and48hours,recordingforeachplatethenumberofcolonies,andusingthenumberofcoloniesafter48hourstocalculatetheresults.
倒扣平皿进行培养，纸载蒸汽灭菌生物指示剂：
55℃～60℃培养，纸载的干热灭菌生物指示剂及环氧乙烷灭菌生物指示剂：
30℃～35℃培养，或在供应商指定的有最佳回收率的温度下培养，24h和48h后检查平皿，记录各皿的菌落数，用48h后的菌落数进行结果计算。
Calculatetheaveragenumberofsporesperspecimenfromtheresults,usingtheappropriatedilutionfactor.ThetestisvalidifthelognumberofsporesperCarrierat48hoursisequaltoorgreaterthanthelognumberafter24hoursineachcase.ForBiologicalIndicatorforSteamSterilization,Self-Contained,asepticallyremovethesporestripfromthecontainer,andproceedasdirectedforBiologicalIndicatorforSteamSterilization,PaperCarrier.
由上述结果计算每个样本的平均孢子数，使用恰当的稀释因子。
如果每个悬浮液48h的孢子数的对数等于或大于其24h的孢子数的对数，则实验成立。
对于预装式蒸汽灭菌生物指示剂，在无菌条件下从容器中取出孢子条，根据纸载蒸汽灭菌生物指示剂的指示操作。
DVALUEDETERMINATION
D值的确定
Foralltestsdescribedinthissection,handleeachtestspecimenwithasepticprecautions,usingsterilizedequipmentwhereapplicable.
在本部分的所有实验中，要在无菌的条件下处理各检测样品，并使用无菌的器具。
Apparatus
设备
ForBiologicalIndicatorforDry-HeatSterilization,PaperCarrier,useanapparatusofknownthermodynamiccharacteristicsthathasbeenvalidatedforcompliancewiththerequirementsforsafety1andperformance,2thatconsistsofasterilizingchamberequippedwithameansofheatingthecontainedair,preferablyelectricallyratherthangasfired,andthathasadequatemovementoftheairthroughforcedventilation（bymechanicaldevicessuchasblowers）,withsensingandcontroldevicesfortemperatureandtimingcapableofindicatingwithanaccuracyofnotmorethan0.5
and1-secondintervals,respectively.
对于纸载的干热灭菌生物指示剂，使用已知热力学特性的、经过验证符合安全1和性能要求的设备2，此设备带有一个可以加热空气的灭菌腔，最好是电加热而不是煤气加热，而且通过强制通风有足够的空气对流（通过如鼓风机这样的机械设备），此灭菌室还带有温度和时间的探测和控制装置能适时调节使温度精度不超过0.5℃，时间精度不超过1秒。
Thegeometricalpatternoftheheatsource（s）issuchastoenablethebiologicalindicatorsundertesttobeuniformlyheatedunderthespecifiedconditions.Thetemperatureprofileinthechamberisknown,andcoldspots,hotspots,andslowheatzonesidentified.
热源的几何模式是用来确保受测的生物指示剂能在特定的条件下受热均匀。
腔内的温度曲线图是已知的，并且冷点、热点和慢热区域已被确定。
Thechamberhasthecapabilitytoworkwithinatemperaturerangeof40
to300
withanaccuracyatanyparticularsettingofnotlessthan±2
.Theapparatusisequippedwithasuitableadditionalaccessdoororportsoastoenabletheentryandinsertion（orremoval）ofspecimenswithin6secondsandtoenablethetemperaturetoreturntothesettemperaturewithin0.5minutewherethespecifiedtemperatureis120
to190
andwithin1.0minutewheresuchtemperatureis220
andabove.
灭菌腔能够在40℃～300℃的温度范围内运行，在任何特定设置点的精度不少于±2℃。
设备还应配备一个额外的通道门或舱，可以使样品的插入（或取出）在6秒钟之内，并且若设定温度在120℃～190℃时能使温度在0.5min内恢复到设定温度；若设定温度在220℃时能使温度在1.0min内恢复到设定温度。
ForBiologicalIndicatorforEthyleneOxideSterilization,PaperCarrier,useanapparatusthatconsistsofatestchamberwithameansofensuringadequatemixingofthesterilantgasandameansofheatingthesterilantgastonotlowerthanthepreselectedoperatingtemperaturesothatnoliquidentersthetestchamber,equippedwithtemperaturecontrolandmonitoring,pressurecontrol,humidification,andgasconcentrationmonitoringdevices.
对于纸载环氧乙烷灭菌生物指示剂，使用带有测试腔的设备，此测试腔可以确保灭菌气体充分混匀，并且可以把灭菌气体加热到不低于预设的运行温度从而没有液体进入这个测试腔。
设备带有温度控制和监测装置、压力控制装置、潮湿装置和气体浓度监测装置。
DetailedspecificationsandoperationalparametersforsuitableapparatusarethosepublishedinStandardforaBiologicalIndicator—EvaluatorResistometerforEthyleneOxideGasVessels（BIER/EO）GasVessels.3设备的详细说明和
和运行参数发表载在《生物指示剂标准－环氧乙烷气体管道（BIER/EO）气体管道镍铬表评估》。
3
ForBiologicalIndicatorforSteamSterilization,PaperCarrier,andforBiologicalIndicatorforSteamSterilization,Self-Contained,useanapparatusthatconsistsofachamberequippedwithheating,temperature,andsteamcontrolandmonitoringdevices.DetailedspecificationsandoperationalparametersforsuitableapparatusarethosepublishedinStandardforaBiologicalIndicator—EvaluatorResistometerforSaturatedSteam（BIER/SteamVessels）.4
对于纸载的蒸汽灭菌生物指示剂和预装式蒸汽灭菌生物指示剂，使用的设备需带有一个有加热、温度及蒸汽控制和监测装置的腔室。
设备的详细说明和
和运行参数发表载在《生物指示剂标准－饱和蒸汽（BIER/蒸汽管道）镍铬表评估》。
Procedure
测试程序
CarryoutthetestsforDvalueateachoftheapplicablesetsofsterilizationconditionsforwhichthepackagedbiologicalindicatorundertestislabeledforuse.Takeasufficientnumberofgroupsofspecimensofbiologicalindicatorsintheiroriginalindividualcontainers,eachgroupconsistingof5to10specimens.
对每一个运用了生物指示剂的灭菌条件进行D值测试。
从生物指示剂的原包装盒里取出足量的一组生物指示剂样本，每组包含5～10个样本。
ThenumberofgroupsprovidesarangeofobservationsfromnotlessthanonelabeledDvaluebelowthelabeledsurvivaltimethroughnotlessthanonelabeledDvalueabovethelabeledkilltime.Placeeachgrouponaseparatesuitablespecimenholderthatpermitseachspecimentobeexposedtotheprescribedsterilizingconditionataspecificlocationinthesterilizingchamber.
每组样本的数量提供了从不少于一个标示D值低于标示存活时间到不少于一个标示D值高于标示灭活时间的观察范围。
把每一组置于一个适宜的样本容器中，使灭菌腔中特定位置的每个样本都能暴露于以上所述的灭菌条件。
Checktheapparatusforoperatingparametersusingspecimenholderswithoutspecimens.Selectaseriesofsterilizingtimesinincrementsfromtheshortesttimeforthespecimenstobetested.Thedifferencesinsterilizingtimesovertheseriesareasconstantasfeasible,andthedifferencebetweenadjacenttimesisnogreaterthan75%ofthelabeledDvalue.
用没有样本的样本容器来检查设备的运行参数。
选择一系列以样本检测用最短时间为基础不断增加的灭菌时间。
系列灭菌时间的差异要尽可能恒定，邻近灭菌时间的差异不大于标示D值的75%。
ForBiologicalIndicatorforDry-HeatSterilization,PaperCarrier,preheatthesterilizingchamberfor30minutes.Opentheaccessdoororport,placeoneoftheholderswithagroupofspecimensinthesterilizingchamber,closetheaccessdoororport,andcontinuetooperatetheapparatus.Commencetimingtheheatexposurewhenthechambertemperaturereturnsto2
belowthespecifiedtemperature.
对于纸载的干热灭菌生物指示剂，灭菌腔需预热30min。
打开通道门或舱，放入装有一组样本的容器，关闭通道门或舱，持续运行灭菌设备。
当灭菌腔温度回升至设定温度以下2℃时开始计算曝热时间。
Afterthecontentshavebeensubjectedtothesterilizingconditionforapredeterminedtimeselectedfromaseriesoftimeincrements,removetheholderwiththeheatedspecimens,andreplaceitwithanotherholderwithspecimens.Repeatthesterilizingproceduresimilarly,butforanotherpredeterminedtime,andcontinuewithsuccessivegroupsuntilallhavebeenheatedappropriately.
腔内的样本接受了系列递增预设时间中某个特定时间的灭菌后，取出装有样本的容器，然后再将另一个容器进行灭菌。
重复相似的灭菌程序，但用的是另一个预设时间，用同样的方法做其它的样本组直到所有的样本都被加热灭菌。
ForBiologicalIndicatorforEthyleneOxideSterilization,PaperCarrier,proceedasfollows:
对于纸载的环氧乙烷灭菌生物指示剂，检测程序如下：
1.Evacuatethetestchambertoapressureofnotmorethan100±3mmofmercury.灭菌腔抽真空使其压力不大于100±3mm汞柱。
2.Injectsufficientwatervapor（e.g.,saturatedsteam）tobringthechambercontentstowithin10%relativehumidityoftherequiredhumidificationcondition,andallowthechambertoequilibratewithmoistureandtotemperatureforabout30minutes.打入足量的水气（如饱和蒸汽）使腔内含有10％以下的相对湿度，让腔内湿度和温度平衡
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