SOP-QC-011培养基配制标准操作规程.doc

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文件编号：

SOP-QC-011

文件名称：

培养基配制标准操作规程第3页共3页

1、玻璃器皿的洗涤。

1.1制备培养基所用的吸管、试管，三角瓶和平皿等新的玻璃器皿，因有灰尘和游离碱性物质，先用水冲洗干净。

然后置3％的盐酸中浸泡约12小时。

取出后，用清水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗1～2次，晾干后备用。

1.2凡各种装量大而又不宜高压的含糖培养基，所用的玻璃器皿应事先灭菌，以免因一次性低压灭菌不彻底而染菌。

2、用具包装与灭菌。

2.1硅胶塞：

应用水冲洗干净，再以蒸馏水冲洗1～2次，烘干备用。

2.2试管：

各种试管最好先配上合适的硅胶塞，待高压灭菌后再分装培养基，可防止污染。

2.3平皿：

取洗净凉干的平皿，每7套作一个包装，121℃30分钟灭菌后烘干备用；也可用160℃2小时干热灭菌后备用。

2.4供染菌限度检验用的吸管，应防止堵塞，故选用红刻度粗下口的。

用前洗净烘干，上口塞进少许普通棉花，松紧适度，以防污染。

然后按其容量大小，分别放在用双层牛皮纸作成的纸袋或者金属盒内，包严经121℃30分钟灭菌后烘干备用。

3、操作

3.1根据用途选择培养基，按其用法进行准确称量和加蒸馏水，并填写配制记录如名称、配制量、配比、配制日期、配制者。

3.2培养基完全溶解后，进行过滤和分装，液体培养基一般应澄清无沉淀，否则影响观察细菌生长的结果。

过滤时可用滤纸或脱脂棉。

4、分装

4.1各种液体培养基分装试管时，每支应按试管大小及用途不同定量分装，可用吸管或注射器分装，也可用漏斗分装。

一般漏斗下口连接一段橡胶管，管口插一小段玻璃管，再加上一个弹簧夹控制流量，分装时将漏斗放在支架上，内装培养基，然后将下口插入试管中即可按量将培养基逐管分装，注意，不同品种的培养基用过的漏斗，应充分洗净后再用，以防两种培养基互相混淆，影响使用效果。

4.2固体培养基应趁热分装，以防冷后凝固：

分装时也可用支架漏斗，但须注意勿将培养基沾污管口，以防污染杂菌。

4.3制备固体斜面培养基时，每管装量宜少，堵严硅胶塞灭菌后摆成的斜面，凝固后应大小适宜，否则易染菌。

4.4制备琼脂平板，一般先装在瓶内，高压灭菌后冷至45～50℃时，再倾注平皿，凝固后置温箱内烘干凝结的水分备用。

5、灭菌

5.1各种培养基的灭菌时间和压力，一般按其品种的成分不同而定。

耐热的多采用121℃灭菌15分钟（即15磅15分钟）；但容器和装量较大时，可延长至20分钟。

凡含有葡萄糖或其他糖类等不耐热的成分，宜用116℃灭菌20分钟（即10磅20分钟）；如为装量较小的糖类发酵管，也可用110℃灭菌10分钟（即8磅10分钟），以防压力大、温度高、时间长破坏糖分。

总之，应严格遵守各种培养基规定的灭菌温度和时间。

5.2高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的冷空气，使灭菌物品同器内的温度一致时，再逐渐升压保持预定的压力和时间之后，令其自然降压为宜。

6、培养基的保存

6.1环境条件：

各种培养基均应在洁净的普通冰箱内保存，以5℃左右为宜，不得冻结。

否则，融化后常因理化条件改变而不能再用。

6.2保存时限

6.2.1基础营养培养基应在２周内用完。

6.2.2生化鉴别培养基应在１周内用完。

6.2.3选择性分离鉴别培养基制成平板后当日用完。

6.3管理

6.3.1贮存培养基的冰箱内不得存放食品、饮料等无关物品。

6.3.2管理员应按规定的时间检查培养基的外观，如失水、沉淀、过期、棉花塞松弛或脱落等异常情况。

发现问题及时处理。

7、培养基过滤澄清须注意：

7.1按培养基的制法说明进行加热或煮沸溶化后滤清。

须注意趁热时滤清，因在碱性溶液中加热煮沸后大部分沉淀物均可滤除，冷后较难滤净，灭菌后仍可出现沉淀物。

7.2滤除异物沉淀后，应将蒸发失去的液量按原液量加纯化水补足，以保证原有成分的配比量和理化性能。