颜生胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定本科学位论文.docx
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颜生胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定本科学位论文
内蒙古医科大学
毕业论文（设计）
题目颜生胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定
学生姓名崔月映
学号2011050921
院系药学院
专业中药学
指导教师顾艳丽
二Ｏ一五年月日
目录
中文摘要............................................................................................................................4
1、仪器与试药................................................................................................................4
二、阿魏酸的定性鉴别.....................................................................................................5
2.1阴性对照的制备.........................................................................................................5
2.2硅胶板的制备..............................................................................................................5
2.3阿魏酸的提取分离.....................................................................................................5
2.4薄层色谱条件..............................................................................................................5
2.5紫外分析仪检测.........................................................................................................5
2.6方法筛选结果..............................................................................................................6
三、阿魏酸的含量测定.....................................................................................................6
3.1供试品溶液的制备.....................................................................................................6
3.2对照品溶液的制备.....................................................................................................6
3.3色谱条件......................................................................................................................6
3.4线性关系......................................................................................................................6
3.5精密度..........................................................................................................................7
3.6空白阴性对照..............................................................................................................7
3.7稳定性..........................................................................................................................9
3.8含量测定......................................................................................................................9
3.9加样回收率...............................................................................................................10
4、结果..........................................................................................................................10
5、讨论..........................................................................................................................10
6、参考文献.................................................................................................................11
七、英文引言....................................................................................................................12
八、致谢............................................................................................................................13
颜生胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定
崔月映、武俊伟
内蒙古医科大学中药学专业，呼和浩特010059
摘要：
目的：
测定颜生胶囊中阿魏酸，以期为颜生胶囊的药品生产提供参考。
方法：
采用薄层色谱法鉴别当归、川芎，采用高效液相色谱法测定阿魏酸。
阿魏酸的色谱条件：
流动相为甲醇-1%冰乙酸溶液（30:
70），柱温为室温，检测波长为320nm。
结果：
通过本课题的研究，薄层鉴别斑点清晰，阴性无干扰。
方法学研究表明，阿魏酸质量浓度在0.2515ug-1.509ug范围内，r=0.9995，溶液的峰面积与质量浓度线性关系良好，为颜生胶囊的进一步研究和开发生产提供了质量控制指标依据，为颜生胶囊的大量开发和应用奠定了一定的基础。
结论：
该方法简便、准确、重复性好、阿魏酸的含量测定用于评价颜生胶囊的质量是可行的。
关键词：
薄层色谱法；高效液相色谱法；颜生胶囊；阿魏酸
颜生胶囊是由五味子、柏子仁、炒枣仁、夜交藤、红花、决明子、大黄、丹参、当归、川芎、何首乌、黄芪、威灵仙、火麻仁组成的复方制剂。
用于养心安神，活血调经、润肠通便、养颜驻容。
本实验以颜生胶囊的主药当归、川芎中含有的阿魏酸为指标成分,采用薄层色谱法和高效液相色谱法进行定性鉴别与含量测定,以控制制剂质量,保证临床疗效。
一、仪器与试剂
三用紫外分析仪（天津天光光学仪器有限公司）
恒温水浴锅（DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器，河南省予华仪器有限公司）；
硅胶（青岛裕民源硅胶试剂厂）；羧甲基纤维素钠（沈阳化学试剂厂）
高效液相色谱仪（岛津SCL-10AVP、MODEL:
SPD-10AVP,CAT.NO.228-40000-38，SERIAL:
NO.C20994111516LP）、
色谱柱：
（DESC:
Kromasi15u100AC18SIZE:
250*460mm5umicromS/NO:
229087-12）
电子天平（AL204和AB135-S）
25mL容量瓶10个
{五味子；柏子仁；炒枣仁；夜交藤；红花；决明子；大黄；丹参；当归；川芎；何首乌；黄芪；威灵仙；火麻仁（武警内蒙古总队医院提供）}
颜生胶囊（武警内蒙古总队医院提供）
阿魏酸对照品（中国食品药品检定研究所编号:
110773-201313id:
3SYD-14YX50mg）、
化学试剂：
乙醚（天津市风船化学试剂科技有限公司）、甲醇（天津市风船化学试剂科技有限公司）、环己烷（天津市福晨化学试剂厂）、冰乙酸（北京北化精细化学品有限责任公司）、二氯甲烷（天津市光复科技发展有限公司）、稀盐酸（天津市化学试剂三厂）、碳酸氢钠（天津市永大化学试剂有限公司）、碳酸钠（天津市永大化学试剂有限公司）、
二、阿魏酸的定性鉴别
2.1薄层板的制备[1]
取5g硅胶G与0.5%CMC-Na的滤液按1:
3比例混合。
研磨均匀后，涂布于玻璃板上（10*15或20*20），厚度为0.25mm室温干燥后，置烘箱中于105摄氏度活化30min，置于干燥器中放冷备用。
2.2阿魏酸的提取分离方法[2-3]
a取当归对照药材粉末和川芎对照药材粉末各2g，加1%碳酸氢钠溶液50ml，超声处理20min离心15min取上清液用稀盐酸调ph至2-3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液。
b取当归对照药材粉末和川芎对照药材粉末各2g，加5%碳酸钠溶液30ml，超声处理40min，滤液用乙醚萃取，弃乙醚层，用稀盐酸调ph值至1-2在用乙醚提取3次，每次15ml，合并乙醚液。
c取当归对照药材粉末和川芎对照药材粉末各2g，加稀盐酸80ml于500ml烧杯中。
超声处理40min后，离心15min，取上清液，用乙醚提取2次每次20ml，合并乙醚液。
d取当归对照药材粉末和川芎对照药材粉末各2g，置于锥形瓶中，加甲醇适量，超声30min，分取甲醇液，水浴蒸干。
残渣加少量水溶解。
用稀盐酸调ph至2左右，乙醚萃取3次（30.20.20ml）。
合并萃取液，回收乙醚，残渣用少许甲醇溶解，得对照药材溶液。
2.3阴性对照的制备按武警内蒙古总队医院提供的处方制法，将含有阿魏酸的当归、川芎两味药材去掉按制法制作，得到阴性对照品。
2.4薄层色谱条件
照薄层色谱法试验[4]，吸取供试品溶液10ul，点于薄层板上，在吸取对照药材溶液各10ul点于同一薄层板上，在吸取阿魏酸标准品溶液10ul点于同一薄层板上，在吸取阴性对照药材溶液10ul点于同于薄层板上，将点样后的薄层板置于以展开系统：
环己烷：
二氯甲烷：
冰乙酸（16ml:
16ml:
2ml）为展开剂的饱和层析缸内（层析缸先饱和1.0h），展开。
2.5紫外分析仪检测
置紫外灯365nm检视，供试品薄层色谱图中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.6方法筛选结果
经实验以上4种提取方法中以第四种方法为佳，提取后所得阿魏酸含量较高。
结果见图1
a方法
b方法
c方法
d方法
图1
3、阿魏酸的含量测定
3.1对照品溶液的制备
取阿魏酸对照品精密称取5.03mg,加甲醇溶解，超声30min,甲醇定容至100ml，摇匀，浓度为0.0503mg/ml,作为对照品溶液。
3.2供试品溶液的制备
取颜生胶囊5粒,去囊壳,取内容物2g精密称量,置锥形瓶中,加甲醇50ml,超声处理30min,分取甲醇液,水浴蒸干,残渣加20ml水溶解,并用稀盐酸调pH1～2,置分液漏斗中,用乙醚萃取3次（30,20,20ml）,合并乙醚萃取液回收乙醚至干,残渣用甲醇溶解定容至25ml,得供试品溶液。
3.3色谱条件
流动相：
甲醇-1%冰乙酸水溶液（30:
70）；等度洗脱，保留时间：
20.465min，流速：
1ml/min；柱温：
25℃；检测波长：
320nm。
理论塔板数按阿魏酸峰计不低于3000。
3.4线性关系
分别精密吸取对照品储备液（5.00mg/100ml）,分别在25ml容量瓶中稀释成0.25ug/ul,0.50ug/ul,0.75ug/ul,1.00ug/ul,1.25ug/ul,1.50ug/ul,按上述色谱条件进样测定，以峰面积积分值A为纵坐标，对照品量C（ug）为横坐标，作线性回归，得回归方程y=131443x+451980,r=0.9995,结果表明，阿魏酸0.25-1.50ug范围内线性关系良好。
结果见图2
图2
3.5精密度
精密吸取对照品溶液1.25ug，及供试品溶液各25ul，分别重复进样5次，按上述色谱条件测定，阿魏酸峰面积积分值相对标准偏差RSD分别为0.35%，0.73%。
结果见表1
编号
1
2
3
4
5
RSD%
标准品
2059799
2057967
2051794
2041411
2052083
0.35
供试品
1432888
1425482
1448862
1441177
1437977
0.73
表1
3.6空白阴性对照
阴性对照溶液的制备按颜生胶囊处方和制法，制成缺当归和川芎阴性制剂，精密称取2g，再按供试品溶液制备方法制备阴性溶液。
进样25ul测定，结果阴性样品在相同位置处无阿魏酸的色谱峰，表明对阿魏酸测定无干扰，
结果见图3
1.标准品阿魏酸；2.阴性对照品；3.颜生胶囊；4.当归对照药材；5.川芎对照药材
（标准品阿魏酸1）
（阴性对照品2）
（颜生胶囊3）
（当归对照药材4）
（川芎对照药材5）
图3
3.7稳定性
取供试品溶液，第1h进样1次（25uL），第2h进样1次，第3h进样1次，第4h进样1次，第5h进样1次，共进样5次，按上述色谱条件分别测定，表明供试品溶液在5h内基本稳定。
结果见表2
编号
1
2
3
4
5
RSD%
供试品
1440143
1458752
1476926
1433247
1418069
1.6
标准品
2059856
2057964
2051894
2041534
2052465
0.35
表2
3.8含量测定
取供试品5粒，定容至25ml容量瓶中，按“3.3”条件测定，分别进样（25ul），
结果见表3
编号
1
2
3
4
5
平均每粒含量mg/粒
RSD%
供试品含量（mg/粒）
0.114
0.115
0.117
0.116
0.113
0.115
1.4
表3
3.9加样回收率实验
取已知含量的样品1.Og，共5份，精密称定，精密加入等量的阿魏酸对照品，按供试品溶液制备项下的方法制备，依法测定，计算回收率。
结果见表4
加样回收率试验
编号
样品中阿魏酸含量（mg）
加入对照品量（mg）
实测阿魏酸含量（mg）
回收率（%）
平均回收率（%）
RSD（%）
1
0.151
0.150
0.299
99.3
99.22
1.4
2
0.154
0.150
0.301
99.0
3
0.156
0.150
0.301
98.4
4
0.150
0.150
0.296
98.7
5
0.145
0.150
0.297
100.7
表4
4、结果
通过实验，建立了颜生胶囊的HPLC分析方法，结果表明颜生胶囊浓度在0.25ug-1.50ug范围内与其峰面积呈良好线性关系，且专属性强，精密度、稳定性和加样回收率均良好，说明该方法灵敏度高，能够检测出颜生胶囊中阿魏酸的含量。
五、讨论
5.1颜生胶囊中阿魏酸提取方法筛选
经反复试验，通过优选实验方法时发现，将药材用碳酸氢钠、碳酸钠提取，酸化后萃取，测到阿魏酸含量很少，即使点样浓度很大，在对照品色谱相应的职位上，显相同颜色的斑点很浅，酸液提取也得不到大量的阿魏酸，而采取分取甲醇液的方法即d方法，可以测到其中的阿魏酸且斑点清晰明亮、现象明显。
此结果说明颜生胶囊复方制剂中含有特殊结构的药材利用d方法可以有效的提取出颜生胶囊中的阿魏酸，经比较之后d方法证明提取阿魏酸量大，斑点清晰、现象程度好，干扰少，且此方法操作简便、稳定，为高效液相色谱法测定颜生胶囊中阿魏酸含量奠定基础。
5.2流动相筛选
采用甲醇溶液为流动相A，0.8%冰乙酸溶液为流动相B且配比为甲醇—0.8%冰乙酸溶液（30:
70）为流动相洗脱时颜生胶囊与杂质无法分离且峰型差，采用甲醇溶液为流动相A，1%冰乙酸溶液为流动相B且配比为甲醇—1%冰乙酸溶液（30:
70）为流动相时洗脱颜生胶囊时分离效果好且峰型好，经过对流动相的筛选最终选择甲醇—1%冰乙酸溶液（30:
70）为流动相
参考文献：
1薄层扫描法测定逍遥丸中阿魏酸的含量许英爱，金瑛（第四军医大学吉林军医学院，吉林132013）
2薄层色谱法鉴定冬葵子中阿魏酸陈燕飞，刘乐乐，王玉华，张翠荣，蒋红，范晓燕，罗素琴（内蒙古医科大学药学院，内蒙古呼和浩特010059）
3脑心通胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定穆惠军，关桂菊，高琴，（1.山东福瑞达生物化工有限公司,山东济南250014;2.济南宏济堂制药有限公司,山东济南250100）
4国家药典委员会，«中华人民共和国药典»2005年版一部[M].北京：
化学工业出版社，2005.289
七、英文引言
JohannesvilhelmJensencapsulequalitativeidentificationandcontentdeterminationofferulicacid
CuiYueying,WuJunwei
InnerMongoliamedicaluniversityofChinesemateriamedicamajor,Hohhot010059
Abstract:
Objective:
todetermineJohannesvilhelmJensencapsuleofferulicacidinordertoprovidereferenceforJohannesvilhelmJensencapsulepharmaceuticalproduction.Methods:
usingTLCtoidentifyradixangelicaesinensis,rhizomaligusticiwallichii,usinghighperformanceliquidchromatography（HPLC）methodfordeterminationofferulicacid.Chromatographicconditionsofferulicacid：
Mobilephaseofmethanolto1%iceaceticacidsolution（30:
70）,andcolumntemperaturetoroomtemperature,detectionwavelengthof320nm.Results:
throughtheresearchofthistopic,thethinlayeridentificationspotswereclear,negativewithoutinterference.
Methodologyresearchshowsthatthequalityofferulicacidconcentrationinug-1.509-0.2515ugrange,r=0.9995,thesolutionofthepeakareaandconcentrationlinearrelationshipisgood,tothefurtherresearchanddevelopmentofJohannesvilhelmJensencapsuleproductionprovidesabasisforqualitycontrolindicators,toalargenumberofdevelopmentandapplicationofJohannesvilhelmJensencapsulelaidacertainfoundation.Conclusion:
thismethodissimple,accurateandreproducible,determinationofthecontentofferulicacidisusedfortheassessmentofthequalityofJohannesvilhelmJensencapsuleisfeasible.
Keywords:
thinlayerchromatography（TLC）;Highperformanceliquidchromatography;JohannesvilhelmJensencapsule;Ferulicacid
八、致谢
在论文完成之际，我们要特别感谢我们的指导老师顾艳丽教授的悉心指导。
实验中顾艳丽教授对实验过程中的问题给我们及时的指导解决；在我们完成论文的过程中，无论是在论文的选题和资料方面，还是在论文的研究方法和成文定稿方面。
在每一次的指导与修改过程中，顾老师都会认真耐心的指出该改进的地方，我们得到了老师悉心细致的教会和温暖无私的帮助，特别是老师渊博的学识、深厚的学术素养、严谨的治学精神和一丝不苟求真务实的工作作风让我们受益终生在此表示真诚的感谢。
感谢药学院领导及我们所在的药剂教研室的全体老师一直以来对我们的帮助！
感谢我们的祖文师兄、贾纳师姐等在论文写作过程中给我的提点和帮助！
感谢实验室全体同学给予我们的关心和帮助！
感谢内蒙古医科大学四年来对我们的培养！
谨以此致谢最后在百忙之中抽出时间
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