大肠菌群计数方法.docx

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大肠菌群计数方法

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2011-02-14

A

1

2012-05-25

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分发号:

______（仅适用于控制文件）

（仅盖有红色印章的文件才有效）

1.0目的

规定大肠杆菌计数的方法。

2.0适用范围

适用于加多宝凉茶、浓缩汁或原辅材料中的大肠杆菌群的计数。

3.0术语

3.1大肠菌群：

一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧格兰仕隐形无芽孢杆菌。

3.2MPN最可能数（mostprobablenumber）：

基于泊松分布的一种间接计数方法。

4.0职责

4.1质检部：

负责按此方法对加多宝来凉茶、浓缩汁或原辅材料中大肠菌群进行计数。

5.0流程图

见附录A、附录B。

6.0内容及要求

6.1设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：

6.1.1恒温培养箱：

36℃±1℃

6.1.2冰箱：

2℃-5℃

6.1.3恒温水浴箱：

46℃±1℃

6.1.4天平：

感量0.1g

6.1.5振荡器

6.1.6无菌吸管：

1ml（具0.01刻度）、10ml（具0.1刻度）或微量移液器及吸头。

6.1.7无菌锥形瓶：

容量500ml

6.1.8无菌试管：

18×200ml

6.1.9小导管

6.1.10无菌培养皿：

直径90mm

6.1.11菌落计数器

6.2培养基和试剂

6.2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤

6.2.2煌绿乳糖胆盐（BGLG）肉汤

6.2.3乳糖胆盐发酵培养基（LBB）

6.2.4乳糖蛋白胨培养基（LPB）

6.2.5伊红美蓝琼脂培养基（EMB）

6.2.6结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）

6.2.775%乙醇溶液

6.2.8无菌生理盐水：

称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min

6.3大肠菌群MPN计数法

6.3.1加多宝凉茶、浓缩汁等产品及原辅材料中大肠菌群的测定

6.3.1.1样品稀释

a、固体和半固体样品：

称取25g样品置于盛有225ml无菌生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min，制成1：

10的样品匀液。

b、液体样品：

以无菌吸管吸取25ml样品置于盛有225ml的无菌生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1：

10的样品匀液。

c、用1ml无菌吸管吸取1：

10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，制成1：

100的样品匀液。