DB51T 2167微生物检测领域设施和环境条件监测 指南.docx
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DB51T2167微生物检测领域设施和环境条件监测指南
ICS03.120.10
A00
DB51
四川省地方标准
DB51/T2167—2016
微生物检测领域设施和环境条件监测指南
2016-05-18发布2016-10-01实施
四川省质量技术监督局发布
DB51/T2167—2016
目次
前言II
引言III
1范围1
2规范性引用文件1
3术语和定义1
4一般要求4
5有要求的设施和环境条件识别4
6有监测要求的设施和环境条件识别4
7设施和环境条件监测4
附录A（资料性附录）洁净室及相关受控环境采样布点方法6
附录B（资料性附录）洁净室及相关受控环境的监测8
附录C（资料性附录）仪器和设备18
附录D（资料性附录）培养基和试剂的配制20
参考文献21
I
DB51/T2167—2016
前言
本标准为实验室质量管理和技术运作准，建议实验室将该标准与下列微生物实验室质量管理和技术运作系列标准结合起来使用。
微生物检测实验室安全管理指南微生物检测实验室废弃物处置指南标准菌株的保存与使用指南
微生物检测领域培养基和试剂管理指南微生物检测领域培养基和试剂验证指南
本标准按照GB/T1.1给出的规则进行起草。
本标准由四川省产品质量监督检验检测院提出并归口。
本标准由四川省质量技术监督局批准。
本标准由四川省产品质量监督检验检测院负责解释。
II
DB51/T2167—2016
引言
GB/T27025《检测和校准实验室能力的通用要求》、国家认证认可监督管理委员会（CNCA）发布的
《检验检测机构资质认定评审准则》、中国合格坪定国家決可委员会（CNAS）发布的CNAS-CL09:
2013《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》，以及与微生物检测相关的标准、规范中都对微生物检测实验室设施和环境条件做出了要求。
本标准提出微生物检测领域设施和环境条件监测指南，旨在为实验室提供设施和环境管理的科学路径，以满足相关要求。
GB/T27025中5.3.2和《检验检测机构资质认定评审准则》中提出：
“……依据相关的规范、方法和程序有要求，当影响检验检测结果质量时，应监测、控制和记录环境条件……”的要求。
首先，要求中讲到“相关的规范、方法和程序有要求，或对结果的质量有影响时”才需要“监测、控制和记录环境条件”。
实验室在具体应用中，对相关的规范、方法和程序的要求中，哪些环境条件对结果的质量会造成影响的识别有差异，有些实验室甚至要求每个场所都要记录温度、湿度，因此会由于做很多无用功而大大影响工作效率。
第二，对要求中“控制”的理解。
当相关的规范、方法和程序有要求，或对结果的质量有影响时，实验室应通过布局、使用设施、设备来控制环境条件，使之满足相关的规范、方法和程序的要求，确保对结果不会产生不良影响。
典型的控制如洁净实验室及相关受控环境、涉及生物安全的实验室等等。
第三，对要求中“监测”的理解。
对设施和环境条件的要求，最重要的是持续满足要求。
所以，除了完成建设安装设施设备后的验收之外，持续的监测必不可少，以证明在使用过程中设施和环境条件持续符合相关要求。
然而，持续监测对实验室是较难的工作，不同类型的实验室对环境条件要求不同，使得不同实验室监测的内容也有较大的差异；相同类型的实验室因使用目的不同，监测的内容也不尽相同，因此实验室应针对设施和环境条件有要求的区域，编制专门的作业指导书，用以指导对设施和环境条件的监测。
第四，对要求中“记录”的正确理解包括三个方面，一是控制的记录，即使用设施、设备控制后，环境条件达到要求的验收证明记录；二是检测时，检测人员对环境条件的记录，用以表明环境条件满足相关规范、方法和程序的要求，或对结果的质量不会产生影响；三是定期监测的记录，用以表明环境条件能持续满足相关规范、方法和程序的要求，或对结果的质量不会产生影响。
本标准依据GB/T27025《检测和校准实验室能力的通用要求》、国家认证认可监督管理委员会（CNCA）颁布的《检验检测机构资质认定评审准则》和其他有关准则、规范的要求，从有要求的环境设施条件识别、有监测要求的环境设施条件识别、环境设施条件监测三个方面给出指南。
本标准主要由范围、术语和定义、一般要求、有要求的环境设施条件识别、有监测要求的环境设施条件识别、环境设施条件监测和四个资料性附录构成。
III
DB51/T2167—2016
微生物检测领域设施和环境条件监测指南
1范围
本标准提出了微生物检测领域设施和环境条件监测的指南。
本标准适用于微生物检测领域中有洁净度要求的设施和环境条件监测，并满足GB/T27025《检测和校准实验室能力的通用要求》、国家认证认可监督管理委员会《检验检测机构质认定评审准则》、中国合格坪定国家決可委员会（CNAS）CL09-2013《实验室认可准则在微生物检测领域中的应用说明》的要求。
本标准不涉及实验室如何保护环境的要求，不涉及环境条件控制，不涉及控制和检测过程中对环境条件的记录。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T27025-2008检测和校准实验室能力的通用要求
JG170生物安全柜
JG/T292洁净工作台
国家认证认可监督管理委员会《检验检测机构资质认定评审准则》（2015版）
3术语和定义
GB/T19000、GB/T25915.1、GB/T25915.2、GB50073、GB50333、GB50591、JG/T292中界定的
和以下术语和定义适用于本标准，为方便使用，以下重复列出了GB/T25915.1、GB50073、GB50591中的某些术语和定义。
3.1
洁净室cleanroom
空气悬浮粒子浓度受控的专用空间，其建造和使用方式使房间内进入的、产生的、滞留的粒子最少，房间内温度、湿度、压力等其他相关参数按要求受控。
[GB/T25915.1-2010，2.1.1]。
3.2
洁净区cleanzone
空气悬浮粒子浓度受控的专用空间，其建造和使用方式使区域内进入的、产生的、滞留的粒子最少，区域内温度、湿度、压力等其他相关参数按要求受控。
注1：
洁净区可以是封闭的或开放的，可在也可不在洁净室内。
注2：
参见GB/T25915.1-2010，2.1.2。
1
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3.3
洁净室及相关受控环境cleanroomandrelevantcontrolledenvironments
洁净室及其附属的、辅助的、相联系的开放或封闭的内部或周边空间，该空间空气悬浮粒子浓度、温度、压力以及其它相关参数都能被控制在期望的范围内。
注：
典型的洁净室及相关受控环境包括洁净室及洁净区
3.4
监测monitoring
为检测设施或其部分性能而实施的规定程序。
3.5
悬浮粒子airbornepartice
用于空气洁净度分级的空气中悬浮的固体和液体粒子，其粒径在0.1µm～5µm。
注1：
不适用于表征悬浮粒子的物理性、化学性、放射性和生命性。
注2：
参见GB50073-2013，2.0.7。
3.6
粒径particesize
给定的粒径检测仪所显示的、与被测粒子的响应量相当的球形体直径。
[GB50073-2013，2.0.6]。
3.5
洁净度cleanliness
以单位体积空气中大于或等于某粒径粒子的数量来区分的洁净程度。
[GB50073-2013，2.0.12]。
注1：
本标准关注粒径限于0.5µm～5µm范围。
注2：
洁净度适用于占用状态为静态和动态的洁净室。
3.7
洁净度分级classification
以ISON级表示的、洁净室及相关受控环境按空气悬浮粒子浓度划分的洁净度水平（或规定确定该水平的过程）。
注：
本标准等级范围限于ISO5级～ISO9级且不带小数的等级。
注：
参见GB/T25915.1-2010，2.1.4。
3.8
气流流型airflowpattern
洁净区域内空气的流动形态和分布。
注：
参见GB50073-2013，2.0.13。
3.9
单向流洁净室unidirectionalairflowcleanroom
由方向单一、流线平行且速度均匀稳定的水平或垂直单向流流过房间工作区整个截面的洁净室。
2
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[GB50591-2010，2.0.2]。
3.10
非单向流洁净室turbulentairflowcleanroom乱流洁净室
流线不平行、方向不单一、速度不均匀且有交叉回旋的紊乱气流流过房间工作区整个截面的洁净室。
注：
参见GB50591-2010，2.0.3。
3.11
混合流洁净室mixedairflowcleanroom
同时分别存在单向流和非单向流两种气流流型的洁净室。
[GB50591-2010，2.0.4]。
3.12
浮游菌airbornebacteria悬浮在空气中的带菌微粒。
[GB50591-2010，2.0.8]。
3.13
沉降菌settlementalbacteria
降落在表面的带菌微粒。
[GB50591-2010，2.0.9]。
3.14
空态as-built
室内净化空调设施已建成并运行，但没有设备和人员的状态。
注：
参见GB/T25915.1-2010，2.4.1。
3.15
静态at-rest
室内净化空调设施已建成、设备已安装好并可运行，但没有人员的状态。
注：
参见GB/T25915.1-2010，2.4.2。
3.16
动态operational
室内净化空调设施按规定方式运行，其内规定数量的人员按议定方式工作的状态。
注：
参见GB/T25915.1-2010，2.4.3。
3.17
洁净工作台cleanBench
一种箱式局部空气净化设备，由箱体、风机、预过滤器、高效或超高效空气过滤器及电器控制系统组成。
在工作状态下能始终保持工作空间内的风速、空气洁净度、噪声、振动和照明等性能参数满足使用者的要求。
3
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[JG/T292-2010，3.1.1]。
4一般要求
4.1实验室设施和环境条件管理应满足GB/T27025-2008中5.3，国家认证认可监督管理委员会《检验检测机构资质认定评审准则》中4.3的要求；
4.2如检验方法对实验室设施和环境条件有规定，实验室应满足其要求；
4.3实验室设施和环境条件还应满足安全的要求；
4.4此外，实验室设施和环境条件管理还应满足政府法律法规及行业管理部门的要求。
5有要求的设施和环境条件识别
5.1从检测方法文本中识别对所需环境条件的要求；
示例：
GB4789.1中3.1.4中规定，对食品微生物检验实验室环境的基本要求为实验室内环境的温度、湿度、照度、噪声和洁净度等应符合工作要求。
如医疗用品无菌检验时，需在ISO5级的洁净室进行，实验室应识别所需要的环境并保证其符合规定。
5.2从检测仪器设备使用说明书中或检测仪器设备制造商处，获得运行检测仪器设备对环境条件的要求；
5.3还应从实验室安全方面识别对环境条件的要求，包括对实验室布局及其营造的实验室整体环境、人员、样品、生物、财产等安全保护的要求。
注：
实验室通过布局、安装设施提供符合要求的环境条件，如在洁净室内设置与外部联系的通讯装置以保证发生意外事故时可获得及时的救助。
6有监测要求的设施和环境条件识别
6.1应按照GB/T27025中5.3.2的要求，识别实验室应监测的设施和环境条件；
6.2当实验室的设施和环境条件发生了变化，可能会使结果无效或对所要求的检测质量产生不良影响时，实验室应重新监测这些设施和环境条件；
6.3还应关注影响实验室安全的设施，定期检查或监测，确保其功能不会失效；
示例：
实验室的紧急喷淋设施、洗眼器、消防设施等，确保其功能不会失效，是保证实验室安全的必要手段，因此应定期检查或监测其功能。
7设施和环境条件监测
7.1洁净室及相关受控环境在投入使用之前，应进行综合性能检验，合格后方可运行。
综合性能检验至少应包括（但不限于）以下项目：
送风量、压差、噪声、照度、自净时间、气流流型、甲醛浓度、氨浓度、臭氧浓度和二氧化碳浓度、悬浮粒子或浮游菌、沉降菌等，如安装了紫外线灯，还应检测紫外线灯辐射照度值；
注：
新紫外线灯辐射照度值应不小于90μW/cm2（30W直管型紫外线灯），使用中紫外线灯紫外线灯辐射照度值应不小于70μW/cm2（30W直管型紫外线灯）。
7.2洁净室及相关受控环境开始使用之后，应定期进行监测，以证明其持续符合相关要求。
监测指标及要求参见附录A、附录B；
4
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7.3通常，实验室应具备相应检测能力，便于自行开展监测。
如果实验室自身不具备检测能力，可委托外部有能力的技术机构监测；
7.4自行开展设施和环境条件监测的，检测时所使用的仪器设备应按GB/T27025中5.6的要求进行管理；
7.5应针对实验室内部开展监测的环境条件项目编制作业指导书。
作业指导书包含以下内容：
a）监测目的；
b）适用范围；
c）监测项目及相关要求、监测方法、评价监测结果的方法；
d）监测周期；
e）监测结果不合格时的处置；
f）监测记录或报告格式；
g）记录和报告保存规定。
7.6如果监测结果表明，设施和环境条件已发生偏移，应在记录或报告中说明，并分析原因。
如可能影响检测质量，应给出维修、调整的建议。
7.7任何维修或调整之后，均应对可能受到影响的项目进行监测，合格后方能使用。
7.8记录和报告的保存
监测记录和报告（如果有）应一并存档。
相关管理部门应在规定时间内收集记录原件和报告正本（如果有），按照实验室档案管理程序的要求进行管理。
7.9当使用洁净工作台时，应根据实验室实际情况，按JG/T292的要求监测相应指标，以证明其持续符合相关要求。
7.10当使用生物安全柜时，应根据实验室实际情况，按JG170的要求监测相应指标，以证明其持续符合相关要求。
5
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附录A
（资料性附录）
洁净室及相关受控环境采样布点方法
A.1采样点布置应力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏，下列多点采样的采样点位置图示可作为参考（见图A.1）
图A.1平面采样点布置图
A.2ISO5级单向流区域或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流方向的工作面上，图A.2和图A.3。
图A.2水平单向流的气流形式
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图A.3垂直单向流的气流形式
A.3各指标采样点数目及位置参见附录B。
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附录B
（资料性附录）
洁净室及相关受控环境的监测
B.1目的
对洁净室及相关受控环境进行持续定期监测，以此证明其持续符合规定的要求
B.2监测项目及技术要求
B.2.1物理指标
表B.1给出了洁净室及相关受控环境应监测的物理指标项目、技术要求、持续监测周期等要求。
表B.1洁净室及相关受控环境物理指标监测
监测项目
技术要求
证实持续符合的检测周期
备注
温度（℃）
22～26
不限
满足人体舒适要求
相对湿度（%）
30～50
不限
满足人体舒适要求
送风量
5级（class5）
平均风速（m/s）0.2～0.4
12个月
单向流（静态）
6级（class6）
换气次数n（h-1）50～60
非单向流（静态）
7级（class7）
换气次数（h-1）15～25
非单向流（静态）
8级～9级（class8～9）
换气次数（h-1）10～15
非单向流（静态）
压差
（Pa）
不同等级之间
不小于5
12个月
不适用于非封闭洁净区
洁净室与室外
不小于10
噪声
（dB）
单向流、混合流
≤65
12个月
静态，A声级噪声
非单向流
≤60
照度
（lx）
洁净室
≥350
24个月
—
走廊、辅助用房等
150～300
照度均匀度
≥0.7
24个月
指洁净室内规定表面上的最小照度与平均照度之比，适用时可测
使用中紫外线灯辐射照度值μW/cm2
≥70
6个月
如使用紫外灯（30W直管型）杀菌时需测。
新灯须≥90μW/cm2
注：
洁净度5级相当于原百级，6级相当于原千级，7级相当于原万级，8级相当于原十万级，9级相当于原三十万级。
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B.2.2空气洁净度指标
B.2.2.1悬浮粒子
表B.2给出了静态测试不同洁净度级别的洁净室及相关受控环境时，悬浮粒子最大允许数及证实持续符合要求的检测周期。
表B.2不同洁净度级别的洁净室及相关受控环境悬浮粒子监测要求
洁净度级别
最大允许数（粒/m3）
证实持续符合要求的检测周期
≥0.5μm
≥5μm
5级（class5）
3500
29
6个月
6级（class6）
35200
293
12个月
7级（class7）
352000
2930
8级（class8）
3520000
29300
9级（class9）
35200000
293000
注：
按测量方法相关不确定度要求，上述浓度数据的有效数字不超过3位。
B.2.2.2沉降菌和浮游菌
表B.3给出了不同洁净度级别洁净室及相关受控环境对沉降菌和浮游菌监测和证实持续符合要求的检测周期。
表B.3不同洁净度级别洁净室及相关受控环境沉降菌和浮游菌监测要求
洁净度级别
沉降菌最大平均浓度
（CFU/30min）
浮游菌最大平均浓度
（CFU/m3）
证实持续符合的检测周期
5级（class5）
0.2
5
沉降菌：
每次试验浮游菌：
6个月
6级（class6）
0.4～0.75
10～25
沉降菌：
3个月浮游菌：
12个月
7级（class7）
1.5～2.0
50～75
8级（class8）
4.0
150
9级（class9）
6.0
—
注1：
悬浮粒子、浮游菌可选择二者之一，对于微生物检测实验室，浮游菌更有意义。
注2：
当洁净度6～9级的洁净室及相关受控环境沉降菌监测使用频率较高（如每天使用或每周使用超过3次）时，建议沉降菌的检测周期为1个月。
B.2.3表面染菌密度
当需对室内微生物表面污染状况做细致确认时可测表面染菌密度。
9
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表B.4表面染菌密度要求
洁净度级别
物体表面平均菌落数（CFU/cm2）
5级（class5）
≤5.0
6级（class6）
≤5.0
7级（class7）
≤5.0
8～9级（class8～9）
≤10.0
B.3检测要求
B.3.1温湿度
B.3.1.1检测之前，空调已运转，各项状况如气流等已稳定；
B.3.1.2温度检测仪的最小分度值不大于0.2℃，湿度检测仪的测量精度为±3%；
B.3.1.3每个温控区域至少设置一个测点，并位于房间中间，应在温、湿度读数稳定后记录。
B.3.2送风量
B.3.2.1单向流洁净室应采用平均风速（m/s）、非单向流或混合流洁净室宜采用换气次数（n）表示，换气次数应按下式计算：
式中：
Q—房间送风量（m3/h）；
v—送风面平均速度（m/s）；
F—送风面面积（m2）；
V—房间体积（m3）。
n=Q=
V
v⨯FV
（B.1）
B.3.2.2检测室内微风速仪器的最小刻度不应大于0.02m/s；一般可用热球式风速仪；
B.3.2.3单向流洁净室可采用室截面平均风速和截面积的乘积的方法确定送风量，测点位于高效过滤器出风面约15cm～30cm的位置，截面上测点间距不宜大于0.6m，测点数量不少于4个，取所有读数的算术平均值作为平均风速。
B.3.2.4非单向流或混合流洁净室内安装过滤器的风口可采用套管法、风量罩法或风管法检测送风量，为检测回风口或新风口风量，也可用风口法。
测定时，风口上的任何配件、饰物等一律保持原样。
分述如下：
a）套管法,用轻质板材或膜材做成与风口内截面积相同或近似、长度大于2倍风口边长的直管段作为辅助风管，连接于过滤器风口外部，在套管出口平面上，均匀划分小方格（边长＜200mm），在方格中心设测点。
对于小风口，最少测点数不少于6点。
也可采用锥形套管，上口与风口内截面相同或相近，下口面积不小于上口面积的一半，长度宜大于1.5倍风口边长，侧壁与垂直面的倾斜角不宜大于7.5°（图B.1）），以测定截面平均风速，乘以测定截面净面积，算出风量。
10
图B.1
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b）风量罩法,选用带流量计的风量罩法时，可直接得出风量。
风量罩面积应接近风口面积。
测定时应将风量罩口完全罩住过滤器或出风口，风量罩边与接触面应严密无泄漏。
c）风管法,如为矩形风管，测定面积应按奇数分成纵、横列，再在每一列上分成若干个相等的小截面，每个小截面宜接近正方形，边长不大于200mm，测点设于小截面中心。
小管道截面上的测点数不宜少于6个。
如为圆形风管，则按等面积圆环法划分测定截面和确定测定数。
可在风管外壁针对划分的每行方格中心上开孔，便于插入热球风速仪测杆或毕托管。
用毕托管时应先测定动压，然后由下式确定风量：
Q=1.29F
⎛p+L⎞
（B.2）
（B.4）
上二式中：
Q—风量（m3/s）；
F—管道截面积（m3）；
Pa—平均动压（Pa）；
Pa=⎜i1⎟
⎝n⎟
pi1Lpin—各点动压（Pa）。
d）风口法,测新风量、回风量等负压风量时，如受环境条件限制，无法采用套管或风量罩，也不能在风管上检测时，则可用风口法。
风口上有网、孔板、百叶等配件时，测定面应距其约50mm，测定面积按风口面积计算，测点数同套管法（B.3.2.4a））的规定。
对百叶风口，也可在每两条百叶中间选不少于3点，并使测点正对叶片间的斜向气流。
测定面积应按百叶风口通过气流的净面积计算。
B.3.3压差
B.3.3.1压差检测应在所有房间的门关闭时进行；
B.3.3.2有排风时，检测应在最大排风量时进行；
B.3.3.3宜从平面最里面的房间依次向外检测相邻相通房间的压差，直至测出洁净区域与非洁净区、室外环境（或向室外开口的房间）之间的压差；
B.3.3.4由于所测压差很小，建议设置永久性测点，位于洁净室中央，远离可能影响测点局部压力的送风口和回风口。
11
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