《水环境中吗啡和O6单乙酰吗啡含量的测定 液相色谱串联质谱法》征求意见稿docx.docx
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《水环境中吗啡和O6单乙酰吗啡含量的测定液相色谱串联质谱法》征求意见稿docx
湖南省地方标准
水环境中吗啡和O6-单乙酰吗啡含量的测定液相色谱-串联质谱法
DeterminationofmorphineandO6-monoacetylmorphineinwaterenvironmentwithliquidchromatography-tandemmassspectrometry
（征求意见稿）
XXXX-XX-XX发布
XXXX-XX- 实施
前 言
本标准按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：
标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本标准由湖南省产商品质量监督检验研究院提出。
本标准由湖南省公安厅归口。
本标准起草单位：
湖南省产商品质量监督检验研究院和湖南省毒品检验分析室（长沙市公安局毒品检验鉴定中心）。
本标准主要起草人：
刘红梅、覃汉兵、李欣、钱荣敬、肖蓉、张蕾、唐超群、陈实、叶小兰。
水环境中吗啡和O6-单乙酰吗啡含量的测定液相色谱-串联质谱法
1 范围
本标准规定了水环境样品中吗啡和O6-单乙酰吗啡的测定方法。
本标准适用于水环境样品中吗啡和O6-单乙酰吗啡含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文本必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备
GB/T6041质谱分析方法通则
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
HJ/T91.1污水监测技术规范
3 定义
3.1水环境waterenvironment
水环境是指自然界中水的形成、分布和转化所处空间的环境，是指围绕人群空间及可直接或间接影响人类生活和发展的水体，其正常功能的各种自然因素和有关的社会因素的总体。
本文件中的水环境指的是生活污水、工业废水和自然水体（地表水和地下水）。
4 方法原理
参见DB43/TXXXX-2021。
5 试剂和材料
5.1 试剂
通用要求
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂和实验一级用水。
本标准中所用试剂和溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，均应按GB/T603之规定。
吗啡和O6-单乙酰吗啡标准溶液（ρ=1mg/ml）：
可用标准物质配制或直接购买有证标准溶液。
吗啡和O6-单乙酰吗啡混合标准储备溶液（ρ=10mg/L）：
将吗啡和O6-单乙酰吗啡的标准溶液用甲醇稀释，配制成浓度为10mg/L的混合标准储备溶液。
于0~4℃避光、密封保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。
吗啡和O6-单乙酰吗啡氘代内标标准溶液（ρ=0.1mg/ml）：
可用标准物质配制或直接购买有证标准溶液。
吗啡和O6-单乙酰吗啡混合氘代内标储备溶液（ρ=1mg/L）：
将吗啡和O6-单乙酰吗啡的氘代内标标准溶液用甲醇稀释，配制成浓度为1mg/L的混合氘代内标储备溶液，于0~4℃避光、密封保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。
吗啡和O6-单乙酰吗啡混合氘代内标使用液①（ρ=40μg/L）将吗啡和O6-单乙酰吗啡混合氘代内标储备溶液用甲醇稀释，配制成浓度为40μg/L的混合氘代内标使用液，于0~4℃避光、密封保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。
吗啡和O6-单乙酰吗啡混合氘代内标使用液②（ρ=400ng/L）：
将吗啡和O6-单乙酰吗啡混合氘代内标储备溶液用甲醇稀释，配制成浓度为400ng/L的混合氘代内标使用液，于0~4℃避光、密封保存，使用时应恢复至室温，并摇匀。
甲醇：
质谱级
乙腈：
质谱级
浓盐酸：
优级纯
甲酸：
质谱级
5%氨水甲醇溶液：
将浓氨水与甲醇（5.1.8）以5:
95的体积比混匀。
10%甲醇溶液：
将甲醇（5.1.8）与水以1:
9的体积比混匀。
0.1%甲酸水溶液：
将甲酸（5.1.11）和水以1:
999的体积比混匀。
磷酸盐缓冲溶液：
称取3.024g磷酸二氢钾和4.053g磷酸氢二钾，到20ml水中，混匀，0~4℃保存。
5%甲醇溶液：
将甲醇（5.1.8）与水以5:
95的体积比混匀。
甲酸-甲醇溶液：
将500ml甲醇（5.1.8）与500ml水混合，同时加入1ml甲酸（5.1.11），混匀。
异丙醇+乙腈（1+1）：
将异丙醇和乙腈（5.1.9）以1:
1的体积比混匀。
氮气：
纯度≥99.99%。
5.2 材料
色谱柱：
C18反相高效液相色谱柱3.0mm×150mm,2.7µm或其他等效柱。
固相萃取柱：
离线方法固相萃取柱参考型号为WatersMCX3cc/60mg，在线方法的参考型号为OasisHLBDirectConnectHP（2.1mmI.D.×30mmL.,20μm）。
水系滤膜：
0.45μm或0.22μm。
有机系滤膜：
0.22μm。
6 仪器和设备
6.1 真空抽滤装置
6.2 固相萃取装置
6.3 氮吹浓缩或者真空离心浓缩装置
6.4 液相色谱-三重四级杆串联质谱仪
7 分析步骤
7.1 样品前处理
离线固相萃取法
将待测样品恢复至室温，充分混匀，加入浓盐酸调节pH至小于2。
使用水系滤膜过滤，移取滤液50ml，加入100μL混合氘代内标使用液①（5.1.6），混匀后进行固相萃取，固相萃取参数见下表1，萃取完成后将洗脱液置于浓缩装置中40℃浓缩至尽干，用10%甲醇溶液（5.1.13）200uL复溶，过0.22μm有机滤膜，待测。
以实验用水为空白样品，空白样品与样品同时、同步骤处理。
表1固相萃取条件参数
序号
步骤
溶剂
体积（ml）
流速（ml/min）
1
活化
甲醇
4
3
2
活化
水
4
3
3
上样
/
50
1
4
淋洗
甲醇
4
2
5
洗脱
5%氨水甲醇
4
2
在线固相萃取法
将待测样品恢复至室温，充分混匀，加入浓盐酸调节pH至小于2。
过水系滤膜，移取10ml过滤后水样，加入0.5ml磷酸缓冲盐（5.1.15），混匀，准确移取0.9ml混匀水样，加入400ng/L的混合氘代内标溶液（5.1.7）100μL，混匀后经0.22μm有机滤膜过滤，置于样品瓶中，待测。
以实验用水为空白样品，空白样品与样品同时、同步骤处理。
7.2 仪器检测参考条件
离线固相萃取法仪器参考条件
a）柱温：
40℃；
b）流动相A相：
0.1%甲酸水溶液；
c）流动相B相：
乙腈；
d）流速：
0.4ml/min；
e）进样量：
5µL；
f）洗脱：
梯度洗脱，梯度洗脱条件见表2；
g）扫描方式：
正离子扫描；
h）检测方式：
多重反应监测；
i）吗啡和O6-单乙酰吗啡及其氘代内标的定性、定量离子对和碰撞能量条件见表3。
表2离线固相萃取法梯度洗脱条件
时间（min）
流动相A（%）
流动相B（%）
0.00
95.0
5.0
2.00
95.0
5.0
3.00
85.0
15.0
6.00
45.0
55.0
7.00
15.0
85.0
10.00
15.0
85.0
10.10
0.0
100.0
13.00
0.0
100.0
表3吗啡和O6-单乙酰吗啡及其氘代内标的定性、定量离子对和碰撞能量条件
序号
目标物
母离子（m/z）
子离子（m/z）
碰撞能（V）
1
吗啡
286.1
201.1
30
165.1
40
2
吗啡-D3
289.2
201.1
30
165.1
40
3
O6-单乙酰吗啡
328.1
211.1
30
165.1
40
4
O6-单乙酰吗啡-D3
331.1
211.1
30
165.1
40
注：
对于不同的质谱仪器，参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化至最佳。
在线固相萃取法仪器参考条件
a）柱温：
40℃；
b）流动相A相：
0.1%甲酸水溶液；
c）流动相B相：
乙腈；
d）流速：
0.4ml/min；
e）洗脱：
梯度洗脱，梯度洗脱条件见表4；
f）进样量：
400µL；
g）在线固相萃取条件，萃取液A：
水；萃取液B：
5%甲醇溶液；萃取液C：
甲酸-甲醇溶液；萃取液D：
异丙醇+乙腈（1+1）；在线固相萃取程序见表5；
h）扫描方式：
正离子扫描；
i）检测方式：
多重反应监测；
j）吗啡和O6-单乙酰吗啡及其氘代内标的定性、定量离子对和碰撞能量条件见表2。
表4在线固相萃取法梯度洗脱条件
时间（min）
流动相A（%）
流动相B（%）
0.00
95.0
5.0
5.00
95.0
5.0
6.00
85.0
15.0
9.00
45.0
55.0
10.00
15.0
85.0
15.00
15.0
85.0
15.10
0.0
100.0
20.00
0.0
100.0
表5在线固相萃取程序
时间（min）
萃取液A（%）
萃取液B（%）
萃取液C（%）
萃取液D（%）
流速（ml/min）
0.01
0.0
100.0
0.0
0.0
3.0
2.80
0.0
100.0
0.0
0.0
3.0
2.84
0.0
100.0
0.0
0.0
3.0
2.85
0.0
0.0
100.0
0.0
2.0
5.00
0.0
0.0
100.0
0.0
2.0
5.01
0.0
0.0
0.0
100.0
2.0
10.00
0.0
0.0
0.0
100.0
2.0
10.01
100.0
0.0
0.0
0.0
2.0
15.00
100.0
0.0
0.0
0.0
2.0
15.01
100.0
0.0
0.0
0.0
0.5
20.00
100.0
0.0
0.0
0.0
0.5
仪器调谐
按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行仪器质量数和灵敏度校正，以确保仪器处于最佳测试条件。
标准曲线建立
取与样品等量的实验用水，添加混合标准储备溶液（5.1.3），使得吗啡和O6-单乙酰吗啡的浓度为1ng/L、5ng/L、10ng/L、50ng/L、100ng/L、250ng/L、500ng/L，作为标准曲线添加样品，与样品平行操作，得到标准曲线溶液，按仪器条件进样分析，记录保留时间和峰面积，建立标准曲线。
试样和空白测定
试样和空白样品按照与绘制标准曲线相同的仪器分析条件进行测定。
8 结果计算与表示
8.1 计算含量
记录标准曲线和样品中目标物与相应氘代内标的保留时间和定量离子对峰面积值，以标准曲线中目标物与相应氘代内标的定量离子对峰面积比为纵坐标、标准曲线中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。
根据样品中目标物及相应内标的定量离子对峰面积值，按公式
（1）计算出样品中目标物的含量。
=（Y-a）/b
（1）
式中：
—样品中目标组分i的质量浓度，ng/L；
Y—样品中目标物与相应内标的定量离子对峰面积比；
a—线性方程的截距；
b—线性方程的斜率。
8.2 结果表示
当测定结果小于100ng/L时，保留三位有效数字；当测定结果大于或等于100ng/L时，保留整数。
9 方法检出限和定量限
本方法中目标分析物的检出限为0.3ng/L，定量限为1ng/L。
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