植物组织培养实验报告.docx

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植物组织培养实验报告

名词解释

1.细胞的全能性：

指植物体的任何一个有完整细胞核的活细胞都具有该植物的全套遗传基因和产生完整植株的潜在能力。

2.分化：

指细胞、组织、器官或整株植物从分生组织或幼小状态发育为成熟状态的过程，并在生理、形态上发生的变化。

其最大的特征是失去分裂能力。

3.脱分化：

植物离休的器官、组织、细胞在人工培养基上，经过多次细胞分裂而失去原来的分化状态，形成无结构的愈伤组织或细胞团的过程，使其回复到胚性细胞的状态。

其特征是已失去分裂能力的细胞重新获得了分裂能力。

4.再分化：

指由脱分化的细胞再度分化成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至最终再生成完整的植株的过程。

5.试管苗：

指在无菌离体条件下，对植物组织、细胞、器官进行组培所获得的的再生植株。

6.根芽激素理论：

根和芽的分化由生长素和细胞分裂素的比率所决定，这一比率高时促进生根，比率低时促进茎芽的分化，比率适中时，组织则倾向于以一种无结构的方式生长。

通过改变培养基中这两类生长调节物质的相对浓度可以控制器官的分化。

7.污染：

批在组培过程中，由于真菌、幼苗等微生物的侵染，在培养容器内滋生大量的菌斑，使试管苗不能生长和发育的现象。

8.褐变：

指在组培过程中，培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。

9.玻璃化现象：

指试管苗因生理失调而引起的嫩茎、叶片出现半透明状和水渍状的现象。

10.无菌操作：

亦称接种。

指将经过表面灭菌后的植物材料在无菌环境中切碎或分离出器官、组织或细胞转移到无菌培养基上的过程。

由于整个过程均在无菌条件下进行，所以将这个过程称为无菌操作。

11.植物组织培养：

指在无菌条件下，将离体的植物器官（如叶、花、未成熟的果实、种子）、组织（如形成层、花药组织、胚乳）、胚胎（如成熟和未成熟的胚）、细胞或原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整的植株或生产具有经济价值的其他产品。

这是广义的植物组织培养概念，而狭义的植物组织培养是指以植物各部分离体组织或愈伤组织为外植体的离体无菌培养。

12.培养基：

培养基是提供植物或其他生物生长发育所需各种养分的介质。

13.胚状体：

亦称体细胞胚。

指在组培过程中，由植物体细胞所形成的类似于合子胚的结构。

它具有根、茎结构，能够一次性形成再生植株。

其与正常的受精卵发育方式相似，在形成过程中也要经过原胚、球形胚、心形胚等阶段。

14.外植体：

由活体植物上切取下来，用以进行离体培养的那部分组织或器官。

15.愈伤组织：

原指植物在受伤后伤口表面形成的一团无序生长的薄壁细胞，在组织培养中，是指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。

其特点是：

细胞分裂快，结构疏松，缺少结构组织，颜色浅而透明。

16.初代培养：

是指在组培过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段。

即无菌接种完成后，送入培养室的外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝（或称茎梢）、不定芽（丛生芽）、胚状体或原球茎等中间繁殖体的过程。

17.中间繁殖体：

通过初代培养所获得的不定芽、无菌茎梢、胚状体或原球茎等无菌材料。

18.继代培养：

中间繁殖体由于数量有限，所以需要将他们切割、分离后转移到新的培养基中培养增殖的过程。

19.繁殖系数：

指单位植物种苗的收获量与接种量之比。

20.原球茎：

亦称绿色小球。

多指兰科植物的茎尖经组培，形成一个扁形球状物，，其基部生有假根。

它们在形态上与种子萌发时由胚形成的原球茎相似。

21.悬浮培养：

亦称植物细胞悬浮培养。

指使细胞团在液体培养基中进行培养的一种方法。

通常可分为成批培养和连续培养两种类型。

22.后生遗传变异：

亦称驯化现象。

指细胞在发育、分化过程中，对基因表达的调控上所发生的变化，其不涉及基因结构的变化。

后生遗传变异在取消诱发条件后，还能通过细胞分裂在一定时间内继续存在。

在一般情况下，它不通通过再生过程遗传给植株，因而这种变异无法继续表现在再生植株的二次组培中。

23.嵌合体：

亦称异源嵌镶体。

植物体的突变往往只影响分生组织的一部分，使突变的组织呈扇状或层状。

用这种分生组织所繁殖的植物，因同时具有两个或多个遗传性状不同的组织，而表现出不同的性状和特点的现象。

24.原生质体融合

25.早熟萌发

26.单倍体植株

27.外植体

28.愈伤组织培养：

29.玻璃化现象

30.体细胞胚

31.无病毒苗

32.植板率

33.cDNA检测法

选择题

1．一植株下列（B）部位病毒的含量最低。

A叶片细胞B茎尖生长点细胞

C茎节细胞D叶柄细胞

2．对于不易生根，较难形成完整植株的植物来说，最好的脱毒方法是（C）。

Ａ茎尖脱毒Ｂ愈伤组织脱毒　　

Ｃ微尖嫁接脱毒　Ｄ花药脱毒

3．培养基的pH一般是（C）。

A4.8～5.0B5.0～5.6

C5.8～6.0D6.0～7.0

4．下列不属于生长素类的植物激素是（A）。

AKtBIAA

CNAADIBA

5．1962年，Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了（B）培养基，其特点是无机盐浓度较高。

ＡＷhite　ＢＭＳ　

ＣN6　ＤＭiller

6．第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是（B）。

AMorel　BHaberlandt　

CSchleidenDWhite

7．下列不属于大量元素的盐是（C）。

ANH4NO3BKNO3

CZnSO4·7H2ODMgSO4·7H2O

8．在组织培养中，IAA、ZT和GA必须用（B）法灭菌

Ａ高压灭菌　Ｂ过滤灭菌　

Ｃ干燥灭菌　Ｄ照射灭菌

9．要配置母液浓度为0.1mg/ml的IBA500ml，需要IBA（B）mg。

A20B50

C100D1000

10．下列不属于微量元素的盐是（A）

ACaCL2·2H2OBZnSO4·7H2O

CH3BO3DCuSO4·5H2O

11．对于不易生根，较难形成完整植株的植物来说，最好的脱毒方法是（C）。

A．茎尖脱毒B．愈伤组织脱毒

C．微尖嫁接脱毒D．花药脱毒

12．禾本科植物的花粉培养一般采用下列哪种培养基（B）。

A．B5B．N6

C．HD．尼许

13．培养基的pH一般是（C）。

A．4.8～5.0B．5.0～5.6

C．5.8～6.0D．6.0～7.0

14．下列不属于生长素类的植物激素是（A）。

A．KtB．IAA

C．NAAD．IBA

15．1962年，Murashige和Skoog为培养烟草花叶细胞设计了（B）培养基，其特点是无机盐浓度较高。

A．WhiteB．MS　

C．N6D．Miller

16．第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是（B）。

A．MorelB．Haberlandt　

C．SchleidenD．White

17．花药培养中，大多数植物适宜的花粉发育时期是（B）。

A．四分孢子期B．单核后边期

C．双核期D．三核期

18．能打破种子休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发的激素是（A）。

A．GAB．IAA；

C．NAAD．ZT

19．在成批培养过程中，细胞数目呈（C）曲线变化。

A．Y型B．X型

C．S型D．Z型

20．要配置母液浓度为0.1mg/ml的IBA500ml，需要IBA（B）mg。

A．20B．50

C．100D．1000

21.第一次提出植物细胞具有全能性的理论概念的科学家是_________：

AMorel；BHaberland；

CSchleiden；DWhite

22.下列培养基中_______无机盐的浓度最低。

AMS培养基；BB5培养基；

CWhite培养基；N6培养基

23.高温易被破坏分解的植物激素是_________。

AIAA；BGA；

CNAA；DZt

24.细胞悬浮成批培养过程中，细胞的生长，大致经历________四个时期。

A对数生长期；B停止期；

C延缓期；D减慢期

25.下列不属于活性炭在组织培养中作用的是_______。

A吸附有毒物质；B减少褐变，防止玻璃化；

C创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长；

D增加培养基中的养分；

26.下列不属于细胞分裂素类的植物激素是_________。

A6-BA；BNAA；

CZt；DKt

27.下列不属于大量元素的盐是_________。

ANH4NO3；BKNO3；

CZnSO4.7H2O；DMgSO4.7H2O

28培养室里的湿度一般保持在_________

A30~40%；B50~60%；

C70~80%；D80~90%

29.吲哚乙酸（IAA）需要用_________法灭菌。

A灼烧灭菌；B干热灭菌；

C过滤灭菌D高压湿热灭菌

30.适宜的花粉发育时期：

________。

A单核早期；B双核期；

C三核期；D单核中、晚期

31.下列不属于生长素类的植物激素是________。

AKt；BIAA；

CNAA；D6-BA

32.影响培养基凝固程度因素有________。

A琼脂的质量好坏；B高压灭菌的时间；

C高压灭菌的温度；D培养基的PH

33．从单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织，大致经历________三个时期。

A诱导期；B潜伏期；

C分化期；D分裂期

多项选择题

1．响培养基凝固程度因素有（ABCD）。

A．琼脂的质量好坏B．高压灭菌的时间

C．高压灭菌的温度D．培养基的PH

2．活性炭在组织培养中的作用有（ABC）。

A．吸附有毒物质

B．减少褐变，防止玻璃化；

C．创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长；

D．增加培养基中的养分；

3．下列具有细胞全能性的细胞是：

（ABCD）。

A．成熟的老细胞B．幼嫩的组织细胞

C．愈伤组织细胞D．番茄的受精合子

4．下面属于处于愈伤组织分裂期的特征是（ABCD）。

A．细胞分裂加快

B．正在分裂的细胞体积小，内无大液泡

C．细胞的核和核仁增至最大

D．细胞中RNA的含量减少，而DNA含量保持不变

5．组织培养按培养方式可分为（AC）。

A．固体培养B．叶培养

C．液体培养D．生根培养

6．由植物器官分离单细胞的方法有（AB）

A．机械分离法B．酶解法

C．离心法D．振荡法

7．影响褐变的主要因素有（ABCD）。

A．基因型B．外植体的生理状况

C．培养基的成分D．材料转移时间

8．最常用的植物病毒鉴定方法有（ABCD）。

A．抗血清鉴定法B．分子生物学鉴定法

C．指示植物法D．直接鉴定法

9．根据培养基作用不同，培养基可分为下列哪几种（BCD）。

A．基本培养基B．诱导培养基

C．增殖培养基D．生根培养基

10．外植体的选择原则主要从以下哪些方面考虑？

（ABCD）

A．植物的基因型B．生理状态

C．取材季节D．取材部位

11．活性炭在组织培养中的作用有（ABC）。

A．吸附有毒物质

B．减少褐变，防止玻璃化；

C．创造黑暗环境，增加培养基的通透性，利于根的生长；

D．增加培养基中的养分；

12．幼胚培养时，其发育过程有（ABC）三种方式。

A．胚性发育　B．早熟萌发　

C．产生愈伤组织　D．器官发生

13．组织培养按培养方式可分为（AC）。

A．固体培养B．叶培养

C．液体培养D．生根培养

14．由植物器官分离单细胞的方法有（AB）

A．机械分离法B．酶解法

C．离心法D．振荡法

15．影响褐变的主要因素有（ABCD）。

A．基因型B．外植体的生理状况

C．培养基的成分D．材料转移时间

16．常用的植物脱毒方法有（ABCD）

A．茎尖培养脱毒B．愈伤组织培养脱毒

C．微尖嫁接脱毒D.花药培养脱毒

17．单倍体植株染色体加倍的方法有（ABCD）。

A．自然加倍法B．秋水仙素法

C．组织创伤法D．氟乐灵法

18．最常用的植物病毒鉴定方法有（ABCD）。

A．抗血清鉴定法B．分子生物学鉴定法

C．指示植物法D．直接鉴定法

19．根据培养基作用不同，培养基可分为下列哪几种（BCD）。

A．基本培养基B．诱导培养基

C．增殖培养基D．生根培养基

20．外植体的选择原则主要从以下哪些方面考虑？

（ABCD）

A．植物的基因型B．生理状态

C．取材季节D．取材部位

填空题

1．在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以_________mm、带________个叶原基为好。

0.3～0.5，1～3

2．去除植物病毒的主要方法是_______________和____________两种方法，当把二者结合起来脱毒效果最好。

茎尖培养脱毒，热处理脱毒

3．花药培养是____________培养，花粉培养属于________培养，但二者的培养目的一样，都是利用了花粉粒染色体数目的___________，最后发育成__________。

器官，细胞，单倍性，单倍体，

4．要配制培养基成分为MS+IAA1.0+6-BA2.0的培养基2L需要吸取母液浓度均为0.1mg/ml的IAA__________ml，6-BA___________ml。

20，40

5．比值的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进芽的生长，这时细胞分裂素占主导地位；比值高促进根的生长，这时生长素占主导地位。

细胞分裂素，生长素

6．在组织培养中，不耐热的物质用___________灭菌，而培养基常用_____________灭菌。

过滤法，湿热法

7．组织培养中有三大不易解决的问题是_______、_______与__________。

污染、褐变、玻璃化

8．组织培养中培养室的温度一般控制在__________，湿度一般控制在___________。

25℃±2℃，70%~80%

9．植物组织培养根据培养方式可分为_____________和_____________。

固体培养，液体培养

10．烘箱用于干燥玻璃器皿的温度可以设在_________的范围内，用于高温干燥灭菌则需在____________的温度下1-3小时；用于烘干植物材料的温度是______________。

100-130℃，160-180℃，80℃

11．植物胚胎培养包括幼_________、_________、_________、_________以及子房培养。

胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、胚乳培养

12．一粒成熟的种子含有一个________，构成胚的所有细胞几乎都处于__________的状态和旺盛的细胞_______能力，这些细胞叫胚性细胞，或叫分生性细胞或未分化细胞。

其特征是具有_________。

胚，未分化，分裂，分裂能力

13．一个已分化的细胞或组织若要表现其全能性，一般要经历两个过程：

________和_________。

脱分化，再分化

14．中间繁殖体由于数量有限，所以需要将他们切割、分离后转移到新的培养基中培养增殖，这个过程就称为继代培养。

继代培养是继__________之后的连续数代的扩繁培养过程，旨在繁殖__________的无根苗，最后能达到边繁殖边生根的目的。

初代培养，相当数量

15．根据培养物的进程和培养基的作用不同，培养基可分为诱导（启动）培养基、_________________及________________________。

增殖（扩繁）培养基，壮苗生根培养基。

16．根据其营养水平不同，分为___________和___________。

基本培养基，完全培养基

17．外植体的消毒原则是既要_________离体材料表面的全部微生物，又不_____________植物材料。

杀死，损伤或只轻微损

18．胚胎培养是将植物的　　和母体分离，培养在已知化学成分的培养基上，胚胎培养包括　　、　　、　　、以及　　和　　　　培养。

19．细胞平板培养法一般包括、、、、和五个步骤。

20．无病毒原种苗只是脱除了原母株上的特定病毒，　并末增加，因而在自然条件下易变而丧失其利用价值，同时受自然条件影响，无病毒原种易　。

正确保存无病毒原种苗的方法有　和　两种。

21．花粉植株的形成有两条途径：

一是划分形成　，再分化诱导成苗，二是花粉分化成而直接成苗。

22．植物组织培养的发展过程大致可分为三个阶段：

⑴阶段（初至30年代中）

⑵阶段（30年代末至年代中）

⑶阶段（年代至现在）

23请写出下列响应的名称或代号

A.维生素C

B.NAA

C.6-BA

D.吲哚-3-丁酸

E.水解酪蛋白

F．CM

G．IAA

H．维生素B1

I．维生素C

J．NAA

K．6-BA

24．愈伤组织的形成一般要经过、、三个时期。

25．FDA染色法是常用且比较理想的检测原生质体活性的方法，FDA本为荧光极性，可自由透过原生质体质膜，在原生质体内易受的分解，而产生荧光的，它不能自由进出原生质体的质膜，所以在荧光显微镜下可观察到的原生质体，表明是有活力的原生质体，的原生质体，则是无活力的原生质体。

26．在花药培养中花粉粒经或途径形成孢子体（植株）。

27．在细胞培养中，目前常用　酶和　酶从植物不同组织中直接制备单细胞，然后再通过　培养、　培养或　培养方法，即可获单细胞　系。

28．植物脱毒一般包括、、、四种途径，其中脱毒效果最好的是。

29．胚乳再生植物根据细胞核变化与分化器官的表现可分为和两类。

30．植物组织培养按培养的方式分为_______培养和_______培养。

31．植物组织培养的应用有：

______、____、、______、、等。

32．花粉细胞通过和途径形成再生植株

33．在组织培养中，不耐热的物质用__________法灭菌，而培养基常用__________法灭菌。

34．6-BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值_________促进根的生长，这时__________占主导地位；比值________促进芽的生长，这时__________占主导地位。

35．在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以________mm、带________个叶原基为好。

36．一个已停止分裂的成熟细胞转变为_________状态，并形成__________的现象称为"脱分化"。

37.植物组织培养按培养对象分为_______、_________、_________、__________、等几种类型。

判断题

1.灭菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有有生命的物质全部杀死。

（√）

2.消毒是杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

（√）

3.草莓一般利用花药培养进行脱毒。

（√）

4.禾本科植物和芸薹科植物的花粉培养的最适时期是单核晚期。

（×）

5.在小麦胚培养过程中，小麦胚的褐色面向上。

（√）

6.由性细胞发育而成的胚叫做合子胚，而由体细胞发育而成的胚叫做胚状体。

（√）

7.一个已分化的细胞若要表现其全能性，首先要经历脱分化过程。

（√）

8.由胚乳培养获得的三倍体植株，也一定要进行染色体倍数的检查。

（√）

9.一般来说，光照强度较强，幼苗容易徒长，而光照强度较弱幼苗生长的粗壮。

（×）

10.经过花药培养所获得的植株都是单倍体。

（×）

11.幼年细胞和组织比成年细胞和组织诱导愈伤组织容易。

（√）

12.一般的说，PH值高于6.5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。

（√）

13.在配制6-BA母液时，要先加少量的1mol的HCl溶解，再加蒸馏水定容。

（√）

14.无病毒苗指一点病毒也没有的苗。

（×）

15.通过子房的培养，即可能等到单倍体植株，有能得到二倍体植株。

（√）

16.用于外植体、手、超净台等的表面消毒酒精浓度越大，消毒效果越好越好。

（×）

17.1/2MS培养基的所有成分都是MS培养基用量的一半。

（×）

18.利用芦荟的吸芽和侧芽进行组织培养时，采集外植体是最好用手掰，而不用刀割。

（√）

19.组织培养中，一般木本植物比草本植物易发生褐变。

（√）

20.诱发融合产生的一定是异核体。

（×）

21.植物病毒遗传信息大多数都是DNA。

（×）

22.禾本科植物和芸薹科植物的花粉培养的最适时期是单核早期。

（√）

23.在叶片培养时，叶组织上表皮朝上接种在培养基上有利于愈伤组织的生长和分化。

（√）

24.幼胚培养需要的培养基比成熟胚简单。

（　×　）

25.由性细胞发育而成的胚叫做胚状体，而由体细胞发育而成的胚叫做合子胚。

26.在配制培养基时，加入琼脂的作用是丰富培养基的营养成分。

（×）

27.培养是指把接种后的培养材料放在培养室里，使之生长脱分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。

（√）

28.用10倍的大量母液配制10L培养基，其用量为100ml。

29.在细胞的成批培养整个过程中，一般要先后经过对数生长期、延迟期、减慢期、静止期这四个阶段。

30.在诱导器官分化培养中，愈伤组织能否变绿是芽分化的前提。

31.一般来说，幼年植株的花药反应能力较好。

32.一般来说，在配制生根培养的培养基是，应降低无机盐浓度，增大蔗糖浓度，有利幼苗发根。

33.经高压高温灭菌后，培养基的PH值会下降0.5个单位左右。

34.植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水迹状，这种现象通常称为玻璃化现象。

玻璃化苗一般增殖容易，生根也较普通苗容易。

35.“KT/IAA的比值高时，利于根分化，比值低时，利于芽分化，比值适中时，产生愈伤组织。

”此为激素控制理论。

激素控制理论最早是由Steward提出的。

36.山梨醇、甘露醇是我们常用的渗透压稳定剂，且易被吸收，可促进细胞增殖和生长。

37.花粉在单核靠边期时最易做花粉培养，因为此时期的花粉对离体培养的刺激最敏感。

38.外植体中已分化的活细胞，在外源激素的诱导下通过脱分化后形成愈伤组织，这一过程被大致划分为三个时期（诱导期、形成期和分裂期）。

39.幼年细胞和组织比成年细胞和组织诱导愈伤组织容易。

40.一般的说，PH值高于6.5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。

41.在配制6-BA母液时，要先加少量的1mol的HCl溶解，再加蒸馏水定容。

42.未成熟胚较小、较嫩、