微生物实验指导书新格式.docx
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微生物实验指导书新格式
生物工程专业
学科基础实验
---《微生物学》实验指导书
邵阳学院生物与化学工程系
生物工程教研室
2010年12月
目录
实验一培养基的制备、灭菌与接种…………………………………………3
实验二显微镜的使用及细菌单染色…………………………………………7
实验三显微镜油镜的使用及革兰氏染色法………………………………8
实验四霉菌形态观察…………………………………………………………10
实验五显微镜直接计数法……………………………………………………11
实验六细菌细胞大小的测定…………………………………………………13
实验一培养基的制备、灭菌与接种实验
一、实验目的
1．熟练掌握培养基的制备方法和步骤；
2．了解灭菌的原理；
3．掌握各灭菌方法的操作步骤。
二、实验原理
1．培养基的制备：
微生物生长需要营养物质，培养基便是按照微生物的生长繁殖的需要，用人工的方法将多种物质调制而成的用于培养微生物的营养基质。
这其中包括碳源、氮源、无机盐、水分和生长因子。
微生物生长除需要满足这五大营养要素外，还需要有最适宜的酸碱度范围，才能表现出最大的生命活力，而不同种类的微生物在培养基上生长繁殖的最适酸碱度范围不同，因此应将培养基调节到一定的pH值范围。
培养基的种类很多，就其物理性状而言，可分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基。
2．灭菌：
为了保证微生物菌种的纯培养，所用玻璃器皿和培养基都必须进行灭菌。
常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法。
3．接种：
将一种微生物菌种移接到另一灭过菌的新鲜培养基上的过程称为接种。
接种必须严格按照无菌操作进行，否则将使微生物实验毫无意义。
4．相关知识
A、洗涤技术
（1）洗涤液
铬酸洗涤液是用重铬酸钾（K2Cr2O7）与硫酸（H2SO4）配制而成，可根据需要配制成弱、中、强三种。
（2）洗涤方法
①玻璃器皿洗涤：
新的玻璃器皿上附有游离的碱性物质，其洗涤方法是用1%的HCl溶液浸泡一昼夜，再用合成洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1～2次，干燥后即可使用。
已使用过的试管、烧杯、三角瓶等的洗涤方法是，先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用合成洗涤剂洗刷，用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次。
用过的吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品，需先放入铬酸洗涤液中浸泡两小时以上，取出后经流水冲洗半小时左右，再用蒸馏水冲洗1～2次，然后烘干或晾干。
载玻片和盖玻片容易破碎，洗涤时不宜用力擦洗，其洗涤方法是先用清水冲洗，然后放入铬酸洗涤液中浸泡几小时或用稀铬酸洗涤液煮沸半小时，取出后用清水冲洗干净，将其储藏在95%的酒精中。
②塑料用品洗涤：
塑料用品一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较强，因此冲洗时必须反复多次，最后用蒸馏水冲洗。
③金属用品洗涤：
金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤，需要清洗时，一般用酒精擦洗，并保持干燥。
B、培养基灭菌灭菌、消毒技术
培养基体积与灭菌时间的关系见下表：
培养基体积（ml）灭菌温度（℃）灭菌时间（min.）
20－5012120
50－50012125
500－500012535
三、仪器与试剂
1．仪器：
高压蒸汽灭菌锅、电热干燥箱、电炉、砧板、菜刀、培养箱、铁架台、三角漏斗、天平、酒精灯、接种环、500ml烧杯、玻璃棒、漏斗、试管、三角瓶、培养皿、移液管
2．试剂：
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、蒸馏水、马铃薯、葡萄糖、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、称量纸、棉花、纱布、棉绳、pH试纸、牛皮纸、牛角匙等
四、实验步骤
1．培养基的制备
（1）称量
按培养基配方计算各营养成分并依次准确称取。
（2）量水加热
用烧杯量取少于配制时所需的水量，在石棉网上加热。
（3）溶化琼脂
将称好的琼脂放入烧杯中并加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂或溢出。
（4）加其它成分
将称好的其它各营养成分加入到已溶化的琼脂中并搅拌使其完全溶解。
（5）调pH值
先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,再根据配方的pH值要求,用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节，边加边搅拌，直至所需pH范围。
（6）补足水分
根据所配培养基的量补足所失水分。
（7）分装
按实验要求，将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装过程中不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。
分装是在漏斗、铁架台上进行的。
分装量：
液体培养基分装高度为试管高度的确1/4左右。
固体培养基分装试管不超过管高的1/5，灭菌后摆成斜面。
分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半。
半固体培养基一般以试管高1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
（8）加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。
棉塞的作用有二：
防止杂菌污染；保证通气良好。
因此，棉塞质量的优劣对实验结果有很大的影响。
正确的棉塞要求形状、大小、松紧与试管口（或三角瓶口）完全适合，过紧则妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的。
加塞时，应使棉塞长度的1/3在试管口外，2/3在试管口内。
（9）包扎
加塞后，将试管或三角瓶用牛皮纸包扎好，以防灭菌时冷凝水润湿棉塞。
注意注明培养基的名称、组别、日期。
（10）灭菌
将包扎好的培养基按所需的灭菌时间和温度进行及时灭菌。
如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内作短期保存。
灭菌方法很多，实验室中常用的是高压蒸汽灭菌和恒温干燥箱灭菌，同温度下前者要好。
（11）摆斜面
灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管棉塞端搁置在玻棒（或其它物品）上，并调整斜度，搁置的斜面长度不超过试管总长的一半。
（12）无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24——48小时，以检查灭菌是否彻底。
无菌生长时可以使用,或放置在冰箱或清洁的橱内，备用。
2．斜面接种
（1）在新鲜的斜面试管上，用记号笔将接种的菌名、日期、和接种者写上。
（2）点燃酒精灯。
（3）用左手大拇指和食指、中指、无名指握住菌种试管和待接种的斜面试管，并将中指夹在两试管之间，使斜面向上，成水平状态。
在火焰边用右手松动试管塞，以利于接种时拔出。
（4）右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌，在火焰边用右手掌边缘和小指，小指和无名指分别夹持棉塞，将其取出，并迅速烧灼管口。
（5）将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试管内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再挑取少许菌苔。
将接种环退出菌种试管，迅速伸入待接种的斜面试管，用环在斜面自试管底部向上端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接触管壁或管口。
（6）接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将棉塞塞上。
将接种环逐渐接近火焰，再烧灼。
五、思考题
1、配制培养基有哪几个步骤?
在操作过程中应注意些什么问题?
为什么?
2、培养基配好后，为什么必须立即灭菌?
若不能及时灭菌应如何处理？
如何进行无菌检查？
3、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需的温度高，时间长？
4、显微镜的种类（中文名称和英文名称）。
5、微生物在绝大多数情况下，为什么必须经过染色后才能在显微镜下进行观察？
6、染色的基本原理？
7、细菌为什么常用碱性染料染色？
8、微生物染色时，染料的种类和选择。
9、微生物标本为什么先固定再染色（即固定的目的是什么）？
10、微生物染色方法一般分为哪两大类？
这两大类方法的区别？
简单介绍单染色法的原理和步骤。
实验二、显微镜的使用及细菌单染色
一、实验目的
1．熟练掌握熟悉普通光学显微镜各部分的结构和性能；
2．巩固无菌操作技术；
3．掌握细菌的涂片和单染色技术。
二、实验原理
1．显微镜的使用：
显微镜是微生物学研究工作中不可缺少的工具，显微镜的种类很多，用于微生物形态观察的以普通光学显微镜最常用。
普通光学显微镜由机械装置和光学系统两大部分构成。
机械装置包括：
镜座和镜臂，镜筒，转换器，载物台，调焦装置；光学系统包括：
目镜，物镜，聚光器，反光镜。
显微镜的物镜通常有低倍物镜（16mm，10x）、高倍物镜（4mm，40-45x）和油镜（1.8mm，95-100x）三种。
油镜通常标有黑圈或红圈，也有标有“OI”或“HI”字样。
使用时油镜与其他物镜不同的是载玻片与物镜之间不是隔一层空气，而是隔一层油质，称油浸系。
常用的油是香柏油，它的折射率为1.52，与玻璃相同。
当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。
如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称干燥系。
光线通过玻片后会发生折射，使进入物镜的光线减少，从而，降低了视野的照明度。
利用油镜不但能增加照明度，更重要的是提高数值孔径，从而提高显微镜的放大效能。
2．细菌单染色：
大多数微生物细胞质是带负电荷，简单染色时采用已知的、带正电荷的碱性染料。
染料适用于热固定的涂片，染料与菌体细胞质黏附使菌体着色。
经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明对比。
三、仪器与试剂
1．仪器：
显微镜、载玻片、酒精灯、火柴、接种环；
2．试剂：
大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌的斜面菌种、吸水纸、擦镜纸、吕氏美蓝染色液（亚甲蓝）、石炭酸复红染色液、无菌水
四、实验步骤
1．细菌单染色
（1）涂片:
取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理盐水于载玻片中央，用无菌操作分别挑取苏云金芽孢杆菌和大肠杆菌于二载玻片的水滴中（每一种菌制一片），调匀并涂成薄膜。
注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。
也可采用“三区”涂片法：
在玻片中央偏左和偏右方各加一滴无菌水，先挑取少量的大肠杆菌、苏云金杆菌在左右一方分别涂片后，再将左右方的菌液延伸于中间区，使两种菌相互混合便于对照。
（2）干燥：
自然气干或酒精灯高处微微加热。
（3）固定：
于火焰上通过2—3次。
（4）染色：
在整个涂面上滴加美兰或石炭酸复红，染色１分钟。
（5）水洗：
倾去染液，用自来水细流冲洗至流下的水中无染料颜色为止。
（6）干燥：
空气中自然干燥或在酒精灯高处微微加热。
（7）镜检：
在显微镜下观察细菌形态。
2．显微镜的使用
（1）用前检查：
零件是否齐全，镜头是否清洁。
（2）调节光亮度。
（3）低倍镜观察：
先粗调再微调至物象清晰。
（4）转入中倍、高倍观察，每一不只需调微调旋纽即可看到清晰的物象。
（5）绘出所观察到的细菌形态图像。
（6）换片：
另换新片观察，必须从（3）步开始操作。
（7）用后复原：
观察完毕，上悬镜筒，后将镜体全部复原。
五、思考题
1、镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？
2、涂片在染色前为什么要先进行固定？
固定时应注意什么问题？
3、根据实验体会，你认为制备染色标本时，应注意哪些事项？
4、详细阐述革兰氏染色法的基本原理。
5、详细阐述革兰氏染色法的步骤。
6、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的区别。
实验三、显微镜油镜的使用及革兰氏染色法
一、实验目的
1．学习并掌握油镜的使用技术；
2．掌握细菌的革兰氏染色方法；
3．了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
二、实验原理
1．显微镜油镜的使用原理
显微镜的物镜通常有低倍物镜（16mm，10x）、高倍物镜（4mm，40-45x）和油镜（1.8mm，95-100x）三种。
油镜，即油浸系物镜，通常标有黑圈或红圈，也有标有“OI”或“HI”字样。
当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。
若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近，常用香柏油，它的折射率为1.52，与玻璃相），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。
2．革兰氏染色原理
革兰氏阳性菌的细胞壁主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，细胞壁的通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。
革兰氏阴性菌的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。
三、仪器与试剂
1．仪器：
显微镜、载玻片、酒精灯、火柴、接种环；
2．试剂：
大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌菌种、吸水纸、擦镜纸、香柏油、二甲苯、擦镜纸、革兰氏染色液：
结晶紫，碘液，95%乙醇，沙黄，无菌水
四、实验步骤
1．革兰氏染色
（1）取菌涂片：
取干净的载玻片两片，各滴一滴蒸馏水于载玻片的中央，用无菌操作分别挑取大肠杆菌和苏云金杆菌于两载玻片的水滴中（每种菌各制一片），调匀并涂成极薄的膜。
也可采用“三区”涂片法：
在玻片中央偏左和偏右方各加一滴无菌水，先挑取少量的大肠杆菌、苏云金杆菌在左右一方分别涂片后，再将左右方的菌液延伸于中间区，使两种菌相互混合便于对照。
（2）晾干：
于室温下自然晾干或在远离酒精灯火焰处烘干。
（3）固定：
涂片面向上于火焰上快速通过2-3次，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，使其不易脱落。
但不能在火焰上烧烤，否则将毁坏细菌的形态。
（4）初染：
在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。
（5）媒染：
先用新配的卢戈氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。
（6）脱色：
将载玻片上的水甩净，滴加95%的乙纯脱色至流出的酒精刚刚不出现紫色为止（约20-30秒钟），立即用流水冲洗。
（7）复染：
滴加番红液染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。
（8）晾干：
于室温下自然晾干或在远离酒精灯火焰处烘干。
（9）镜检：
用油镜观察染色结果。
2．油镜的使用
（1）用前检查：
零件是否齐全，镜头是否清洁。
（2）调节光亮度。
（3）低倍镜观察：
先粗调再微调至物象清晰。
（4）转入中倍、高倍观察，每一不只需调微调旋纽即可看到清晰的物象。
（5）油镜观察：
高倍镜下找到清晰的物象后，旋转转换器，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。
（6）绘出所观察到的细菌形态图像。
（7）换片：
另换新片观察，必须从（3）步开始操作。
（8）用后复原：
观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去油镜头上的香柏油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。
五、思考题
1、制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？
2、使用油镜时应注意什么？
3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？
4、为什么说严格掌握酒精脱色程度是革兰氏染色操作的关键？
5、当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能证明你的染色技术操作正确，结果可靠？
实验四、霉菌形态观察
一、实验目的
1．学会用肉眼观察霉菌菌落的特征；
2．掌握观察霉菌形态的基本方法；
3．观察霉菌的形态特征。
二、实验原理
霉菌在自然界分布相当广泛，与人们日常生活和生产关系十分密切。
在固体培养基上，霉菌菌丝呈分枝状生长，形成的菌落以扩散方式向四周蔓延，菌落比细菌菌落大几倍到几十倍。
菌丝较粗长，形成的菌落较疏松，呈绒毛状、棉絮状或毡状。
霉菌菌丝容易收缩变形，且孢子很容易分散。
这给霉菌制片带来了不便。
不能象细菌细胞一样采用涂片法，而是采用水浸片法。
即常用乳酸石碳酸棉蓝染色液制片，使细胞不易干燥，不易变形，同时有染色、杀菌防腐的作用，使标本能保持较长时间。
为了得到清晰、完整、保持自然状态的霉菌形态，可利用玻璃纸透析培养法将霉菌培养在覆盖玻璃纸的培养基上，然后将长菌的玻璃纸揭下并剪取小片，贴在载片上用显微镜观察。
三、仪器与试剂
1．仪器：
显微镜、载玻片、酒精灯、火柴、接种环；
2．试剂：
青霉、曲霉培养物、乳酸石碳酸棉蓝染色液、吸水纸、擦镜纸、无菌水
四、实验步骤
1．培养特征观察----观察霉菌菌落特征
霉菌菌落由分枝状菌丝构成，有基内菌丝和气生菌丝之分，与培养基结合紧密，不易挑起。
菌落干燥，大而疏松，霉菌形成的孢子有不同形状、构造和色素，菌落表面常呈现不同的色泽特点，有的分泌水溶性色素使得菌落背面也呈现一定颜色。
2．个体形态观察
（1）制片观察
在干净载玻片的中央滴加1小滴乳酸石碳酸棉蓝染色液，用解剖针从菌落的边缘挑取少量带有孢子的霉菌菌丝置于其中，细心地将菌丝挑开，盖上盖片，注意避免产生气泡。
先用低倍镜观察，再换高倍镜观察。
（2）玻璃纸透析培养观察
在干净载玻片的中央滴加1小滴乳酸石碳酸棉蓝染色液，揭开并剪取一小片长有菌的玻璃纸置于其中，盖上盖片，用显微镜观察。
五、思考题
1．记录你的平板上霉菌菌落特征。
2．绘图说明你所观察到的几种霉菌形态特征。
实验五、显微镜直接计数法
一、实验目的
1．明确显微镜计数的原理；
2．掌握利用血球计数板对含菌量直接计数的方法。
二、实验原理
在进行微生物科研和生产中，常常需要了解单位体积的样品中所含的微生物细胞个数，利用血球计数板在显微镜下能达到。
这种方法是将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板的计数室中，在显微镜下进行计数。
由于盖上盖玻片后计数室的容积是一定的（0.1mm3），因而可根据在显微镜下观察到的微生物数目换算成单位体积内的微生物数目。
此法的优点是直观、快速。
血球计数板是一块特制的载玻片，其上有四条槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每边的平台各刻有一个方格网。
每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室。
微生物的计数就在计数室中进行。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。
不论哪一规格的计数板，其每个大方格中的小方格数都是相同的即16×25=400个小方格。
每个大方格边长为1mm，则每个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。
计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25就得出一个大方格的菌数，最后再换算成1ml菌液中的菌数。
若A为五个中方格中的总菌数，B为稀释倍数，计数室有25个中方格，则一个大方格中的菌数为A×25×B/5；
所以1ml菌液中的菌数=A×25×10×1000×B/5=5000AB（个）。
三、仪器与试剂
1．仪器：
灭菌三角瓶、移液管、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜，血球计数板；
2．试剂：
苏云金芽孢杆菌悬液、吸水纸、擦镜纸、无菌水
四、实验步骤
1．稀释
取苏云金芽孢杆菌斜面少量菌体至100mL无菌水中，稀释混匀后待用（浓度约为104一105／mL）。
将样品进行适当稀释，若菌量不多则不必稀释。
2．镜检计数室
加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能加样计数。
3．加样
先将盖玻片放在清洁干燥的计数室上，用滴管吸取以上稀释液滴于盖玻片的边缘，让菌液自行渗入到计数板的方格网中，注意不能有气泡。
4．显微计数
静置5分钟，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室的位置，然后用高倍镜计数，调节光亮度至菌体和计数室线条清晰为止，再将计数室一角的小格移至视野中。
顺着大方格线移动计数板，使计数室位于视野中间。
计数时，如用16x25则计数板则按对角线方位，取左上、右上、左下、右下4个大格（共4个大格，100个小格）内的细胞逐一进行计数；
如使用规格为25x16型的计数板，则除取左上、右上、左下、右下4个大格外，还需加中央的一个大格（共5个大格，80个小格）内的细胞。
计数时当遇到大格线上的细菌时，一般只计此大格的上方及右方线上的细胞（或只计下方及左方线上的细胞），即“计上不计下，计左不计右”。
将计得的细胞数填入结果表中．对每个样品重复计数3次，取其平均值，若相差太大，则须重新计数。
按下列公式计算每mL菌液中所含的细菌细胞数。
（见P44）
5．清洗血球计数板：
使用完毕，将血球计数板在水龙头下用水柱冲洗，切勿用硬物洗涮，洗完后自行晾干或吹干。
镜检，观察小格内是否有残留菌或其它杂物。
如有，可用沾有95%乙醇的脱脂棉球轻轻擦洗，再用擦镜纸擦干。
五、思考题
1、将计数结果填入下表中
A表示5个中方格中的总菌数，B表示菌液稀释倍数。
各中方格内菌数
A
B
菌数/ml
三次平均值
1
2
3
4
5
第一次
第二次
第三次
2、根据你实验的体会，说明用血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？
如何尽量减少误差，力求准确？
实验六、细菌细胞大小的测定
一、实验目的
学会利用测微尺的使用和计算方法及对微生物细胞的大小进行测定。
二、实验原理
微生物细胞的大小测定方法通常是在显微镜下利用测微尺进行测量的。
显微镜测微尺有镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
目镜测微尺是用于测量细胞大小的，它是一块圆形玻片，其中有精确的等分刻度，在5mm刻尺上分50等分或100等分的小格。
使用时通常放在目镜的隔板上，所以，通过它测得的大小通常是标本放大以后像的大小，由于不同的显微镜或同一显微镜的不同物镜或目镜，放大倍数不同，即目镜测微尺每小格代表的实际长度随显微镜放大倍数的不同而异，目镜测微尺测得的大小不能代表标本的实际大小。
因此，使用前需用镜台测微尺校正，求得在一定放大倍数时目镜测微尺每格代表的实际长度。
镜台测微尺是中央刻有精确等分线的载玻片。
一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格），每格等于0.01mm（10μm），由于使用时是放在载物台上，所以镜台测微尺每格的长度能代表物体的实际长度，专门用于校正目镜测微尺每格长度的。
三、仪器与试剂
1．仪器：
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸；
2．试剂：
大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌染色玻片标本、香柏油、二甲苯。
四、实验步骤
1．校正目镜测微尺
取出目镜，把目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺放在目镜筒内的隔板上，刻度朝下，旋上目镜，插入镜筒。
将镜台测微尺放在载物台上，使有刻度的一面朝上并对准聚光器。
先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺与镜台测微尺的某一条刻度线重合。
然后于另一端找另一条重合线，计数两对重合线之间目镜测微尺和镜台测微尺各自的格数。
通过如下公式算出目镜测微尺每小格代表的实际长度。
目镜测微尺每格长度（μm）=两重合线间镜台测微尺格数×10
两重合线间目镜测微尺格数
用同样的方法分别测出在高倍镜和油镜下目镜测微尺每格代表的长度。
2．菌体大小的测定
目镜测微尺校正后移去镜台测微尺，换上待测菌标本片，先在低倍镜和高倍镜下找到目的物，然后在油镜下用目镜测微尺测量每个菌体长与宽各占几格。
将测得的格数乘以目镜测微尺每小格的长度即可求得菌体的大小。
一般在同一涂片上测10-20个菌体，求出平均值，才能代表该菌的大小。
五、思考题
1、将测得的微生物大小值记录于下表：
①将目镜测微尺校正结果填入下表：
物镜
目镜测微尺格数
镜台测微尺格数
目镜测微尺每格代表的长度（μm）
低倍镜
高倍镜
油镜
②将测得的微生物大小值记录于下表
菌体编号
长（μm）
宽（μm）
目镜测微尺格数
菌体长度
目镜测微尺格数
菌体宽度
1
2
3
4
5
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