纯化水R2A培养基适用性验证.docx
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纯化水R2A培养基适用性验证
编号：
FAL-YZ-005.1
R2A培养基适用性
验证报告
编制/日期
审核/日期
评审会签
姓名
部门
职务
评审意见
日期
批准/日期
科技开展
序号
内容
页号
1
目的
3
2
范围
3
3
依据
3
4
职责权限
3
5
验证方法
3
验证内容和结果
3－8
验证结论
9
6
附件
10-12
R2A培养基适用性验证报告
1.目的
因2015版药典纯化水检验用培养基变更,依1105非无菌产品微生物限度检查方法,通过此次实验对所更换的R2A琼脂培养基进行适用性检查，以证明该方法及所采用的培养基适用于纯化水微生物限度检查日常检测。
2.范围
适用于本公司纯化水的微生物限度检查。
3．依据
中华人民共和国药典〔2015年版〕
4.职责权限
姓名
部门
分工职责
组长：
组织确认或验证工作，批准方案和报告
负责编制方案、实施、总结报告及微生物检测
负责设备样品提供,配合实施方案的工作
负责微生物检测
5.验证方法
R2A培养基的适用性检查
R2A培养基应进行培养基的适用性检查。
菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代,试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
菌液制备铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上振荡混匀,制成1ml（相当于10～100cfu/ml）菌悬液。
适用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各10～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养不少于5天，计数；
结果判定被检定的固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
实验前的准备
设备名称
设备编号
设备状态
压力蒸汽灭菌器
10-11-53
□未检定□己检定在有效期内
激光尘埃粒子计数器
Y09-3016
□未检定□己检定在有效期内
温湿度计
JWS-A3
□未检定□己检定在有效期内
微压差表
B10093624
□未检定□己检定在有效期内
微压差表
B10090070
□未检定□己检定在有效期内
细菌培养箱
SPX-100B-Z
□未检定□己检定在有效期内
霉菌培养箱
MLX-150-1
□未检定□己检定在有效期内
确认人:
日期:
微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空
气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按?
医药工业洁净室〔区〕悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法?
的现行国家标准进行洁净度验证。
器具无菌培养皿：
〔直径90mm〕1ml注射器
计数方法的验证
当建立纯化水微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。
假设产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及以下要求进行。
对各试验菌的回收率应逐一进行验证。
菌种及菌液制备同计数培养基的适用性检查
验证方法验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验
菌每次试验的回收率。
〔1〕试验组
薄膜过滤法计数时，取1ml纯化水，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中参加10～100cfu试验菌，过滤，滤膜置于R2A琼脂培养基上。
〔2〕菌液组将相当于10～100cfu/ml菌悬液置于100ml过滤。
〔3〕供试品对照组取1ml纯化水供试液置于100ml，过滤，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。
结果判断在3次独立的平行试验中，试验组菌落数减去供试品对照组菌落的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5～2范围内。
5.2.4.试验样品
纯化水
器具无菌培养皿：
〔直径90mm〕一次性注射器
验证用微生物名称及其编号
菌株名称
编号
铜绿假单胞菌
CMCC（B）10104
枯草芽孢杆菌
CMCC〔B〕63501
5.培养基
名称
生产商
培养基批号
有效期
琼脂培养基S〔R2A琼脂〕
青岛尼赛欣合生物技术
20151009
20181008
5.2.5验证试验操作
5.2.试验菌的制备和稀释
铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上振荡混匀,制成1ml（相当于10～100cfu/ml）菌悬液.再用将其稀释制成10～100cfu/ml的菌悬液。
5.2.5.2将试验分为3组
A样品试验组取纯化水1ml，或均质袋中，充分振摇1分钟。
每张滤膜抽滤100ml的供试液,用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml冲洗滤膜,最后参加10～100cfu试验菌,每株试验菌平行制备2个平皿,按膜过滤法测定其菌数。
B菌液组将10-100cfu/ml菌悬液置于装有100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的三角烧瓶中或均质袋中，充分振摇1分钟。
每张滤膜抽滤100ml的供试液通过一张滤膜,平行制备两个.以测定所加的菌数。
C供试品对照组取纯化水1ml，置于装有PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml的三角烧瓶中或均质袋中，充分振摇1分钟。
每张滤膜抽滤100ml的，平行制备2个平皿,按膜过滤法计数测定供试品的本底菌数。
5.2.培养枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌在30～35℃下培养不少于5天，将点计菌落数。
并将结果记录于附件。
5.2.6试验结果
试验组的菌的回收率
接入菌种
菌落计数〔cfu/皿〕
回收率
试验组
供试品对照组
菌液组
铜绿假单胞菌
平均值
枯草芽孢杆菌
平均值
表中：
回收率=〔试验组的平均菌落数－供试品对照组的平均菌落数的值〕÷菌液组的平均菌落数×100%。
检测人:
复核人:
复核日期:
5.3.1计数性培养基适用性检查结论:
试验组菌落数减去供试品对照组菌落的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
判定R2A琼脂培养基的适用性检查符合规定。
可用于本公司纯化水微生物限度检查实验。
校正因子（修正系数）
校正因子=1/回收率
批号:
产品试验组的微生物生长检查记录：
菌种名称
产品试验组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
菌液组的微生物生长检查记录
菌种名称
菌液组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
供试品对照组的微生物生长检查记录
供试品
供试品对照组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
1
2
测试人/测试日期：
复核人/复核日期：
批号:
产品试验组的微生物生长检查记录：
菌种名称
产品试验组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
菌液组的微生物生长检查记录
菌种名称
菌液组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
供试品对照组的微生物生长检查记录
供试品
供试品对照组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
1
2
测试人/测试日期：
复核人/复核日期：
批号:
产品试验组的微生物生长检查记录：
菌种名称
产品试验组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
菌液组的微生物生长检查记录
菌种名称
菌液组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
供试品对照组的微生物生长检查记录
供试品
供试品对照组计数结果〔cfu/皿〕
平均值
1
2
测试人/测试日期：
复核人/复核日期：
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