一次性使用医疗用品产品细菌和真菌污染的检测.docx

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一次性使用医疗用品产品细菌和真菌污染的检测

一次性使用医疗用品产品细菌和真菌污染的检测

2.1.9.1细菌或真菌污染总菌数的检测

2.1.9.1.1目的

检测一次性使用医疗用品消毒后残存细菌或真菌状况，存放一定时间后是否被细菌或真菌污染及其污染的程。

2.1.9.1.2适用范围

临床用于病人检查、治疗、护理用指套、手套、吸痰管、**窥镜、肛镜、印模托盘、治疗巾、皮肤清洁巾、擦手巾、压舌板、臀垫、中单等接触完整粘膜、皮肤的各类一次性使用医疗、护理用品。

2.1.9.1.3试验器材

（1）营养琼脂培养基：

见附录A。

（2）沙堡琼脂培养基（真菌培养用）：

见附录A。

（3）无菌检查用洗脱液：

见附录A。

（4）磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）：

见附录A。

（5）100级洁净室或100级层流超净工作台（下简称超净台）。

（6）安全操作箱（用于防止真菌孢子污染周围环境）

（7）刻度吸管（1.0mol、5.0mol）

2.1.9.1.4抽样要求

（1）抽样方法

为使样品具有良好的代表性，采用随机抽样方法。

随机选取不同3个批号的产品。

根据检验要求，从每个批号产品中随机抽取同等数量的样品，尽量选自多个大包装。

不得在同一批号内的同一包装内邻近部位集中选取所需全部样品。

（2）抽样数量

①对单一品牌、型别（或规格）产品鉴定取样：

随机选取不同3个批号的产品。

从每个批号产品中随机抽取3个大包装。

从每个大包装中随机抽取20个最小销售包装产品（每个最小销售包装产品重量应达到10g以上；棉签等每个包装内数量达到5支以上，以满足检验最低需要量。

如果重量低于10g或数量少于5支时，适当增加抽取产品的最小销售包装数量。

）作为该品牌、批号产品抽检样品。

其中1/4样品用于首次检测，1/4样品用于留样，2/4样品用于必要时的复测。

样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。

②对同一品牌、不同型别（或规格）产品鉴定取样：

分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。

对每个型别（或规格）产品随机选取不同3个批号产品。

从每个批号产品中随机抽取3个大包装。

以下步骤同2.1.9.1.4

（2）①。

③对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：

分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。

对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取不同3个批号的产品。

从每个批号产品中随机抽取3个大包装。

以下步骤同2.1.9.1.4

（2）①。

2.1.9.1.5检测样本的制作

（1）检测数量

①每批样品首次检测时，检测5个样本，分别在所选的5个最小销售包装内抽取。

②必要时进行复测。

复测时，检测10个样本，分别在所选的10个最小销售包装内抽取。

③以下的样本制作均按首次检测设计，复测时样本量加倍。

（2）样本制作

①垫单、手套等产品的样本制作：

分别在所选5个最小销售包装内样品的不同部位剪取10g重样片。

共5份。

分别剪碎后，各放入一含100ml洗脱液试管中，震荡20s或振打80次。

待样本碎片沉淀后，取各管洗液分别进行检测。

②指套等小件物品的样本制作：

在所选5个最小销售包装内样品中各选一个样本，共5份。

分别剪碎后，各投入含10ml洗脱液试管中，每管一个样本。

震荡20s或振打80次，取各管洗液分别进行检测。

③棉签.在所选5个最小销售包装内样品中，各选5支为一个样本，共5份。

分别直接投入含10ml洗脱液试管中，每管一个样本。

震荡20s或振打80次，取各管洗脱液分别进行检测。

④对不能用上述方法采样的物品，在所选5个小包装中各选一个样本。

共5份。

分别用无菌棉拭子涂抹法采样。

每样本涂抹采样面积25cm。

采样后，按无菌操作原则剪下棉拭采样端置于10ml采样液试管中，每管一份样本。

震荡20s或振打80次，取各管采样液分别进行检测。

2.1.9.1.6细菌检测操作程序

（1）样本制备后，应立即进行检测。

（2）每一样本洗脱液或采样液接种2个平皿，每个平皿接种1.0ml。

当估计含菌量过高时（每平板生长菌落数超过300个），应用PBS对洗脱液或采样液作适当稀释后再接种。

为取得适宜的菌落数，应接种2个～3个不同稀释度样液。

每吸取一个稀释度样液，换一支无菌吸管。

（3）将45℃左右融化的营养琼脂培养基倾注于已加入样液的平皿中。

每平皿约15ml～20ml。

盖好、与样液混均、平放。

待培养基凝固后，翻转平板使底向上，置37℃恒温培养箱内培养48h后，计数菌落数。

（4）菌落数计算：

接种洗脱液或采样液原液进行培养者，即使生长的菌落数<15cfu/平板时，仍按实际生长菌落数计算；接种不同稀释度洗脱液或采样液进行培养时、应选择生长的菌落数在15cfu/平板～300cfu/平板之间的稀释度进行菌落数计算。

（5）检测时应设阴性、阳性对照组。

阴性对照组：

①用同批营养琼脂培养基倾注平板直接培养；②分别吸取1.0ml同批洗脱液与PBS各2份，分别接种平皿、倾注营养琼脂培养基进行培养。

阳性对照组：

接种金黄色葡萄球菌（ATCC6538）18h新鲜肉汤培养物1.0ml于平皿内，倾注营养琼脂培养基进行培养。

培养条件为37℃恒温培养培养48h后观察结果。

若阴性对照组有菌生长，说明其中培养基、洗脱液、PBS灭菌不合格或被污染；若阳性对照组无菌生长或生长的菌落不正常，说明其中使用的培养基、培养条件可能存在问题或均存在问题。

以上两种情况均需更换培养基重新进行试验。

2.1.9.1.7真菌检测操作程序

（1）真菌的检测操作程序与细菌检测操作程序基本相同，主要区别在于所用培养基、培养温度、培养时间不同。

真菌培养使用沙堡琼脂培养基。

倾注法接种。

20℃～25℃恒温培养72h，计数菌落数。

为防止真菌孢子飞扬污染环境，真菌菌落计数应在安全操作箱内进行。

（2）检测时设阴性、阳性对照组。

方法与2.1.9.1.6（5）相同。

阳性对照组接种白色念珠菌（ATCC10231）。

20℃～25℃恒温培养72h观察结果。

2.1.9.1.8结果计算

将2个平板计数所得菌落数的平均值乘以稀释倍数即得洗脱液或采样液中每毫升所含菌量（cfu/mL）。

根据每毫升所含菌量推算出每个样本的菌量。

其表达单位可根据情况使用cfu/cm、cfu/g、cfu/样本。

2.1.9.1.9注意事项

（1）严格无菌操作防止污染。

（2）同批样品检验洗脱振敲次数要保持一致。

振敲轻重尽量保持一致。

（3）吸量管取液量应准确，减少使用中误差。

（4）样液接种后应尽快倾注培养基，避免样液干燥于平皿上，影响结果的准确性。

（5）计算结果时，注意核对接种样液稀释倍数，以免发生计算错误。

22

2.1.9.2无菌检验试验

2.1.9.2.1目的

检测医疗用品经灭菌处理后是否达到无菌标准。

2.1.9.2.2试验器材

（1）需氧-厌氧菌培养基：

见附录A。

（2）无菌试验用真菌培养基（下简称真菌培养基）：

见附录A。

（3）无菌检验用洗脱液（下简称洗脱液）：

见附录A。

（4）100级洁净室或100级层流超净工作台（下分别简称洁净室与超净台）

2.1.9.2.3抽样要求

（1）抽样方法：

为使样品具有良好的代表性，采用随机抽样方法。

随机选取不同3个批号的产品。

根据检验要求，从每个批号产品中随机抽取同等数量的样品，尽量选自多个大包装。

不得在同一批号内的同一包装内邻近部位集中选取所需全部样品。

（2）抽样数量

1）对单一品牌、型别（或规格）产品鉴定取样：

随机选取不同3个批号的产品。

从每个批号产品中随机抽取3个大包装。

敷料、手术衣等织物或纸制产品，从每个大包装中随机抽取8个最小销售包装产品作为该品牌、批号产品抽检样品；针灸针、注射器、输液器等器具，从每个大包装中随机抽取28个最小销售包装产品作为该品牌、批号产品抽检样品。

其中1/4样品用于首次检测，1/4样品用于留样，2/4样品用于必要时的复测。

样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。

2）对同一品牌、不同型别（或规格）产品鉴定取样：

分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。

对每个型别（或规格）产品随机选取不同3个批号产品。

以下步骤同2.1.9.2.3

（2）1）。

3）对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：

分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。

对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取不同3个批号的产品。

以下步骤同2.1.9.2.3

（2）1）。

2.1.9.2.4采样前准备

（1）采用平板尘降法检测洁净室或超净台内空气的含菌量：

用φ9cm双平板暴露30min对空气采样后进行培养。

平均菌落数≤1.0cfu/平板为合格。

（2）需氧-厌氧培养基培养性能检查：

接种1.0ml含10个以下的藤黄微球菌[Micrococcuslutea，CMCC

（B）28001]菌悬液，置30℃～35℃培养24h后，应生长良好。

另接种1.0ml含50个以下的生孢梭菌

[Clostridiumsporogenes，CMCC（B）64941]菌悬液，置同样条件，亦应生长良好。

（3）真菌培养基培养性能检验：

接种1.0ml含50cfu以下的白色念珠菌[Candidaalbicans，CMCC（F）98001]菌悬液，置20℃～25℃培养24h后应生长良好。

（4）洗脱液无菌检查：

于无菌检查前3d，向需氧-厌氧菌培养基与真菌培养基内各接种1.0ml洗脱液，分别置30℃～35℃与20℃～25℃条件下，培养72h后应无菌生长。

（5）培养基无菌检查：

于无菌检查前3d，将未种菌的需氧-厌氧菌培养基与真菌培养基分别置30℃～35℃与20℃～25℃条件下，培养72h后应无菌生长。

（6）阳性对照菌悬液制备：

于无菌试验前一天，取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]普通琼脂斜面新鲜培养物1接种环，接种于需氧-厌氧菌培养基内，在30℃～35℃培养16h～18h备用。

用时以无菌生理盐水稀释至1：

10。

（7）无菌室与试验台消毒：

对无菌室地面与桌面以及试验台台面擦净消毒后，将无菌试验用的培养基、洗脱液、供试品及其他需用器材放妥。

开启紫外线灯消毒1h。

2.1.9.2.5操作程序6

（1）工作人员穿戴无菌隔离衣、帽、口罩、鞋后进入无菌室，用70%乙醇棉球消毒双手。

（2）将供试品外包装用70%乙醇擦拭消毒后放于试验台上。

（3）取需氧-厌氧培养管与真菌培养管各1支，打开盖（或塞）置试验台上，直至样本无菌检查试验完毕。

盖上盖（或塞）与供试品一起培养，作为阴性对照。

（4）按无菌操作要求打开供试品外包装，按以下规定方法制备样本接种需氧-厌氧培养管与真菌培养管。

2.1.9.2.6检测样本的制作

（1）检测数量

1）每批样品首次检测时，检测1/4样本，分别在所选的最小销售包装内抽取。

2）必要时进行复测。

复测时，检测2/4样本，分别在所选的最小销售包装内抽取。

3）以下的样本制作均按首次检测设计，复测时样本量加倍。

（2）样本制作

1）敷料、手术衣等非管道类样本。

取2个包装内的样本，于不同部位剪取约1cm×3cm大小的样片21片，接种需氧-厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。

每培养管含培养基40ml，各接种3片样片。

在其中一加有样本的需氧-厌氧培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.9.2.4（6）]作为阳性对照。

2）注射针、针灸针、缝合针、棉签等样本。

在所选7个最小销售包装内样品中，各选1支为一个样本，分别接种于需氧-厌氧培养管5管与真菌培养管2管，每管含培养基15.0ml，在其中一支加有样本的需氧-厌氧菌培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.9.2.4（6）]作为阳性对照。

3）输液（血）器等导管类样本。

在所选7个最小销售包装内样品中，各选1支为1个样本，各以无菌注射器吸取5.0ml～10.0ml无菌洗脱液注入管内往返摇荡5次。

将各样本洗脱液分别接种需氧-厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。

培养管含培养基15.0ml，每管接种样本洗脱液1.0ml。

在其中1支加有样本洗脱液的需氧-厌氧菌培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.9.2.4（6）]作为阳性对照。

4）注射器样品。

在所选7个最小销售包装内样品中，各选1支为1个样本，各吸取经灭菌合格的洗脱液2ml～10ml，将芯杆抽取至全程刻度，振摇5次。

将各管洗脱液分别接种需氧-厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。

洗脱液接种量，对1ml注射器为0.5ml；2ml注射器为1.0ml；5ml～10ml注射器为2.0ml；20ml～50ml注射器为5.0ml。

培养管中的培养基量，对洗脱液接种量在2ml以下者，每管为15.0ml；接种量在5ml者，每管为40.0ml。

在其中1支加有样本洗脱液的需氧-厌氧菌培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.9.2.4（6）]作为阳性对照，

5）其他样本。

不能用上述方法处理的，可用无菌棉拭子涂抹法采样。

每个样本涂采面积不得少于25cm。

采样后将棉签直接剪入培养管中。

每次检测7个样本，分别接种需氧-厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管，每支培养管含培养基15.0ml。

在其中1支加有采样棉拭子的需氧-厌氧菌培养管中接种1.0ml金黄色葡萄球菌稀释悬液[见2.1.9.2.4（6）]作为阳性对照。

6）将上述接种样本或接种样本洗脱液、采样棉拭子后的需氧-厌氧菌培养管、阳性对照管与阴性对照管[见2.1.9.2.5（3）]同时放入30℃～35℃恒温培养箱内、连续培养5d，逐日观察培养结果。

将上述接种样本或接种样本洗脱液、采样棉拭子后的真菌培养管、阳性对照管与阴性对照管[见

2.1.9.2.5（3）]同时放入20℃～25℃恒温培养箱内、连续培养7d，逐日观察培养结果。

阳性对照管应有菌生长，阴性对照应无菌生长，否则试验重做。

2.1.9.2.7结果评价

当阳性和阴性对照管培养的结果符合2.1.9.2.6（6）所示要求，接种有样本或样本洗脱液、采样棉拭子的需氧-厌氧菌培养管及真菌培养管（不包括阳性对照管）均呈澄清（或虽浑浊但经证明并非有菌生长者），应判供试品合格。

2

如接种样本或样本洗脱液、采样棉拭子（不包括阳性对照管）的需氧-厌氧菌培养管及真菌培养管中有任何一管呈浑浊，并确认有菌生长时，应用同批样本进行复测。

复测中，除阳性对照管外，其他各管均无菌生长，仍可判为合格，否则应判供试品不合格。

2.1.9.2.8注意事项

（1）严格无菌操作，防止污染。

（2）试验前各项准备工作和试验中的阳性和阴性对照，均不可省略，否则难以下结论。

2.1.9.3卫生监督抽样

2.1.9.3.1细菌或真菌污染总菌数的检测抽样要求

（1）抽样方法

采用随机抽样方法。

随机选取同一个批号的产品。

（2）抽样数量

1）对单一品牌、型别（或规格）产品取样：

从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。

从每个大包装中随机抽取5个最小销售包装产品（每个最小销售包装产品重量应达到10g以上；棉签等每个包装内数量达到5支以上，以满足检验最低需要量。

如果重量低于10g或数量少于5支时，适当增加抽取产品的最小销售包装数量。

）作为该品牌、批号产品抽检样品。

其中1/3样品用于首次检测，2/3样品用于必要时的复测留样。

样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。

2）对同一品牌、不同型别（或规格）产品取样：

分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。

对每个型别（或规格）产品随机选取同一个批号产品。

从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。

以下步骤同2.1.9.3.1

（2）1）。

3）对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：

分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。

对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取同一个批号产品。

从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。

以下步骤同2.1.9.3.1

（2）1）。

（3）样品处理及检验操作程序等步骤同2.1.9.1.5～2.1.9.1.9。

2.1.9.3.2无菌检验试验抽样要求

（1）抽样方法

采用随机抽样方法。

随机选取同一个批号的产品。

（2）抽样数量

1）对单一品牌、型别（或规格）产品取样：

从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。

敷料、手术衣等织物或纸制产品，从每个大包装中随机抽取2个最小销售包装产品作为该品牌、批号产品抽检样品；针灸针、注射器、输液器等器具，从每个大包装中随机抽取7个最小销售包装产品作为该品牌、批号产品抽检样品。

其中1/3样品用于首次检测，2/3样品用于必要时的复测留样。

样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。

2）对同一品牌、不同型别（或规格）产品取样：

分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。

对每个型别（或规格）产品随机选取同一个批号产品。

从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。

以下步骤同2.1.9.3.2

（2）1）。

3）对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：

分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。

对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取同一个批号产品。

从同一批号的产品中随机抽取3个大包装。

以下步骤同2.1.9.3.2.

（2）1）