完整版基因工程原理练习题及其答案.docx
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完整版基因工程原理练习题及其答案
基因工程原理练习题及其答案
、填空题
1.基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2.基因工程的两个基本特点是：
（1），
（2）。
3.基因克隆中三个基本要点是：
;和
4.碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用、—
5•同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。
6.部分酶切可采取的措施有：
（1）⑵⑶等。
7.第一个分离的限制性内切核酸酶是;而第一个用于构建重组体的限制性内切
核酸酶是。
&限制性内切核酸酶BsuRI和HaeM的来源不同，但识别的序列都是,它们属于
9.DNA聚合酶I的Klenow大片段是用切割DNA聚合酶I得到的分子量为
76kDa的大片段，具有两种酶活性：
⑴;⑵的活性。
10.为了防止DNA的自身环化，可用去双链DNA。
11.EGTA是离子螯合剂。
12.测序酶是修饰了的T7DNA聚合酶，它只有酶的活性，而没有
酶的活性。
13.切口移位（nicktranslation）法标记DNA的基本原理在于利用的和
的作用。
14.欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用
或。
15.反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有的作用，可以将DNA-
RNA杂种双链中的水解掉。
16.基因工程中有3种主要类型的载体：
、、
17.就克隆一个基因（DNA片段）来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分:
、、。
另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
18.琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是
19.如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为。
20.影响限制性内切酶活性的因素、
21.连接反应的实用温度为。
22.pUCI8质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过
和两种质粒改造而来。
它的复制子来自，Amp
抗性基因则是来自。
23.噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因
;二是
24.野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是
和。
25.黏粒（cosmid）是质粒一噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序
列来自，最大的克隆片段达到。
26.野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：
（1）
（2）-（3）.。
27.噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是，而来自噬菌体的主要结构是。
28.噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基
因组的的范围内。
29.在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是
30.用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCI和NaAc，
其目的是。
31.引物在基因工程中至少有4个方面的用途：
⑴⑵
⑶.⑷.。
32.Clark发现用TaqDNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出
碱基末端的双链DNA分子。
根据这一发现设计了克隆PCR产物的。
33.在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在
34.乙醇沉淀DNA的原理是。
35.假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：
⑴⑵
（3）。
36.受体细胞的感受态是。
37.DNA重组连接的方法大致分为四种：
⑴
（2）
（3）（4）。
38.将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个，各种此类质
粒的集合体称之为构建了一个。
39•将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个，源于同一批RNA制备
物的克隆群则构建了一个。
40.只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用可以将这段DNA进行百万倍的扩增。
41.人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为时吸附DNA,时摄人
DNA。
42.目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。
大致可以分为：
⑴⑵⑶
⑷等。
43.PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于。
44.核酸杂交探针可分为两大类：
DNA探针和RNA探针。
其中DNA探针又分为
探针禾廿探针。
45.RNaseH的活性为。
46.第一个用于基因克隆的天然质粒。
47.噬菌粒载体的包装需要的帮助下才能完成。
48.cDNA文库的特点：
、、、。
49.用处理大肠杆菌，能增加膜的通透性。
50.在技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜（或尼龙膜）上，然后与放射性的DNA探针杂交。
51.可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有和
的活性。
52.根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：
（1）
（2）（3）。
53.Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：
⑴
（2）。
54.外源基因导入植物细胞的方法有：
。
答案
1.70
2.
（1）分子水平上的操作；
（2）细胞水平上的表达
3.克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择
4．增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械力（震荡）的作用而降解5．超螺旋大于线性大于开环。
6．
（1）减少酶量；
（2）缩短反应时间；（3）增大反应体积
7.
EcoK；EcoRl
8.
GGCC;异源同工酶
9.
枯草杆菌蛋白酶；
（1）5'-3'合成酶的活性；
（2）3'-5'外切核酸酶
10.
碱性磷酸酶；5'端的磷酸基团
11.
Ca2+
12.
5'-3'合成；3'-5'外切
13.
DNA聚合酶1:
5'一3'外切核酸酶；5一3'合成酶
14.
S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平
15.
核酸水解酶H；RNA
16.
质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体
17.
复制区:
含有复制起点；选择标记:
主要是抗性基因；克隆位点:
便于外源
DNA的插入
18.
正比
19，
星号（*）活性
20.
DNA的纯度、DNA的甲基化程度、
温度、缓冲液（Buffer）
21.
4~16C
22.
PBR322和M13；pMBI;转座子
23.
它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源
DNA的扩增；对某些噬菌体（如噬菌
的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽
24．没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记
25．质粒；噬菌体；45
26．
（1）分子量大，
（2）酶的多切点，（3）无选择标记
27．复制区；IG区
28.75%〜105%
29．螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性
30.中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力
31.⑴合成探针；⑵合成cDNA;（3）用于PCR反应；⑷进行序列分析
32.T—载体
33.第二链合成时形成的发夹环?
34.乙醇使DNA分子脱水
35.
（1）保持正确的可读框
（2）能够使其转录的启动子（3）具有翻译的起始和终止信号
36.接受外源DNA的生理状态
37.
（1）黏性末端连接；
（2）平末端连接；（3）同聚物接尾连接；（4）接头连接法
38.基因组DNA克隆；基因组DNA文库
39.cDNA克隆；cDNA文库
40.聚合酶链式反应（PCR）
41.0C；42C
42.
（1）遗传学方法；
（2）物理筛选法；（3）核酸杂交法；（4）表达产物分析法
43.插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选
44.基因组DNA；cDNA
45.5'3'或3'5'方向特异地水解RNA-DNA杂交双链中的RNA链
46.pSC101
47.辅助噬菌体
48.
（1）不含内含子序列。
（2）可以在细菌中直接表达。
（3）包含了所有编码蛋白质的基
因。
（4）比DNA文库小的多，容易构建
49.CaCl2
50.Southern印迹
51.5'3'合成酶；3'5'外切核酸酶
52．
（1）克隆的是完整的基因；
（2）使用的是表达载体；（3）不含内含子
53．
（1）印迹的对象不同：
Northern是RNA，Southern是DNA；
（2）电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件
54．叶盘法、电击法、基因枪法
二、选择题（单选或多选）
1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是（）
（a）A．Kornberg（b）W．Gilbert（c）P．Berg（d）B．McClintock
2．第一个作为重组DNA载体的质粒是（）
（a）pBR322（b）ColEl（c）pSCl01（d）pUCl8
3．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。
（a）由作用于同一DNA序列的两种酶构成
（b）这一系统中的核酸酶都是n类限制性内切核酸酶
（c）这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
（d）不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统
4.n型限制性内切核酸酶：
（）
（a）有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列
（b）仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
（c）限制性识别非甲基化的核苷酸序列（d）有外切核酸酶和甲基化酶活性
（e）仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?
（）
（a）限制酶是外切酶而不是内切酶
（b）限制酶在特异序列（识别位点）对DNA进行切割
（c）同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的
（d）一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端
（e）—些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端
6•第一个被分离的n类酶是：
（）
（a）EcoK（b）Hind川（c）Hindn（d）EcoB
7.在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?
（）
端（e）以上都不是
11.
可识别并切割特异DNA序列的酶是（）
（e）DNA酶
12.
克隆所依赖的DNA载体的最基本性质是（）
（c）自我复制能力（d）自我表达能力
（e）自我转录能力
13．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?
（）
（a）质粒（b）.黏粒（c）酵母人工染色体（YAC）（d）.噬菌体（e）cDNA表达载体14．关于cDNA的最正确的说法是：
（）
（a）同mRNA互补的单链DNA（b）同mRNA互补的双链DNA（c）.以mRNA为模板合成的双链DNA（d）以上都正确15．关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?
（）
（a）功具有可诱导性（b）细菌生长的任何时期都可以出现（c）具有可转移性（d）不同细菌出现感受态的比例是不同的
16．Southem印迹的DNA探针（）杂交。
（a）只与完全相同的片段（b）可与任何含有相同序列的DNA片段（c）可与任何含有互补序列的DNA片段（d）可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段（e）.以上都是
17．在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是（）
（a）诱导宿主的a肽的合成（b）诱导宿主的3肽的合成
（c）作为酶的作用底物（d）作为显色反应的指示剂
18．用免疫化学法筛选重组体的原理是
19.在基因工程中，DNAt组体是指
20.重组DNA的筛选与鉴定不包括哪一方法
（e）抗药筛选
（a）仅位于质粒载体中（b）具有多种酶的识别序列（c）不同酶的识别序列可以有重叠
（d）一般是人工合成后添加到载体中
22.在cDNA技术中，所形成的发夹环可用（）
（a）限制性内切核酸酶切除（b）用31外切核酸酶切除（c）用S1核酸酶切除
（d）用51外切核酸酶切除
23.下列对逆转录酶描述正确的是：
（）
（a）依赖于RNA的DNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶
（b）依赖于cDNA的DNA聚合酶或称为cDNA指导的DNA聚合酶
（c）依赖于DNA的DNA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶
（d）依赖于RNA的RNA聚合酶或称为rNA指导的RNA聚合酶
24.T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是（）
（a）2-OH和5-（b）2'-OH和3'-P（c）3'-OH和2'-P（d）3'-OH和5-P
25.下列哪一种酶作用时需要引物?
（）
（a）限制酶（b）末端转移酶（c）反转录酶（d）DNA连接酶
26.用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。
（a）
Southem印迹杂交
（b）Northem印迹杂交
（c）
Western印迹
（d）原位菌落杂交
27.Klenow
酶与DNA聚合酶相比，
前者丧失了（）的活性。
（a）
5，--3，合成酶，
（b）3，--5，外切酶
（c）5，---3，外切酶
（d）转
移酶
28.在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?
（）
（a）反应时间（b）酶量（c）反应体积（d）酶反应的温度
29.黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）
（a）产生新切点（b）易于回收外源片段（c）载体不易环化（d）影响外源基因的表达
30．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是（）
（a）charomid（b）plasmid（C）cosmid（d）phagemid
31．第一个作为重组DNA载体的质粒是（）
（a）pBR322（b）ColEl（c）pSCl01（d）pUCl8
32.Ti质粒：
（）
（a）可从农杆菌转到植物细胞中（b）作为双链DNA被转移
（c）在植物中导致肿瘤（d）介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素
（e）需要细菌的vir基因帮助转移（f）在植物细胞中作为染色体外质粒
33.黏粒（cosmid）是一种人工建造的载体，（）
（a）它具有COS位点，因而可进行体外包装（b）它具有质粒DNA的复制特性
（c）进入受体细胞后，可引起裂解反应（d）进入受体细胞后，可引起溶源化反应
34.有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：
化学序列分析法（Maxam-Glbert）和酶学序列分析
法（Sanger）。
酶学测序法的基本原理/优点是：
（）
（a）碱基与特殊染料间不同的相互作用
（b）一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
（c）限制性位点与DNA末端标记的相关性
（d）可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
（e）反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。
这样既减少纯化步骤，也节约了开支。
35.关于cDNA的最正确的说法是：
（）
（a）同mRNA互补的单链DNA（b）同mRNA互补的双链DNA
（c）以mRNA为模板合成的双链DNA（d）以上都正确
36.用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：
（）
（a）染色体DNA断成了碎片（b）染色体DNA分子量大，而不能释放
（c）染色体变性后来不及复性（d）染色体未同蛋白质分开而沉淀
37.关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?
（）
（a）溶液I的作用是悬浮菌体（b）溶液H的作用是使DNA变性
（c）溶液川的作用是使DNA复性
（d）质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性
Clark做了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加（）．
（a）dGTP（b）dATP（c）dCTP（d）dTTP根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。
在下列文库中，
（）属cDNA文库
（a）YAC文库（b）MAC文库（c）扣减文库（d）BAC文库下面关于多克隆位点（multipleclonesite,MCS）的描述，不正确的—句是（）
（a）仅位于质粒载体中（b）具有多种酶的识别序列
（c）不同酶的识别序列可以有重叠（d）—般是人工合成后添加到载体中
在cDNA技术中，所形成的发夹环可用（）
（a）限制性内切核酸酶切除（b）用31外切核酸酶切除
（c）用S1核酸酶切除（d）用51外切核酸酶切除
在DNA的酶切反应系统中，通常：
（）
（a）用SSC缓冲液（b）加入Mg2+作辅助因子
（c）加入BSA等保护剂（d）上述说法中，有两项是正确的
黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）
（a）产生新切点（b）易于回收外源片段（c）载体不易环化
在下列表型中，（）是基因工程上理想的受体菌表型
（a）r+m+rec*（b）r-m-rec-（C）r-m-rec+（d）r+m+rec-
关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确
（a）给外源DNA添加适当的切点（b）人工构建载体
（c）调整外源基因的可读框（d）增加调控元件
cDNA文库包括该种生物的（）
（a）某些蛋白质的结构基因（b）所有蛋白质的结构基因
（c）所有结构基因（d）内含子和调控区
下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?
（
（a）从特定组织或细胞中提取DNA或RNA
（b）用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA
（c）以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA
（d）
新合成的双链DNA甲基化
下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的?
（
（a）操作方便（b）易于回收片段
（c）易于定向重组（d）载体易于自身环化，降低重组率
关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?
（
38.
39．
40．
41．
42．
43．
44．
45．
46．
47．
48．
49．
50．
51．
52．
53．
（d）影响外源基因的表达
?
（）
）
）
）
（功具有可诱导性（b）具有可转移性
面关于用T4多核苷酸激酶标记5'端制备探针的描述中（）是不正确的。
（a）既能标记DNA，又能标记RNA（b）既能标记双链DNA又能标记单链DNA
（c）只能标记突出的5'端不能标记其他类型末端
（d）
DNA或RNA必须有5'-OH的存在
（d）可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段（e）以上都是
用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。
（a）Southem印迹杂交（b）Northem印迹杂交
（c）Western印迹（d）原位菌落杂交
列哪一个不是Southern印迹法的步骤?
（）
（a）用限制酶消化DNA⑻DNA与载体的连接
（c）用凝胶电泳分离DNA片段（d）DNA片段转移至硝酸纤维素膜上
（e）用一个标记的探针与膜杂交
54．报告基因（）
（a）以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列
（b）以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区
（c）能用于检测启动子的活性（d）能用于确定启动子何时何处有活性
55．在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是（）
（a）诱导宿主的a肽的合成（b）诱导宿主的3肽的合成
（c）作为酶的作用底物（d）作为显色反应的指示剂
56.切口移位是指在（）作用下，使（）带上放射性标记。
（a）DNA聚合酶I，RNA（b）DNA聚合酶I，DNA
（c）DNA聚合酶川，RNA（d）DNA聚合酶川，DNA
57．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的（）
60．随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?
（）
（a）双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的（b）不需要用DnaseI预处理
（c）反应时可用Klenow酶（d）反应时可用DNA聚合酶1
61．在切口移位标记DNA探针时只能使用（）
（d）DNA聚合酶川
（d）T7DNA聚合酶
（a）Klenow酶（b）DNA聚合酶I（c）DNA聚合酶n
62．要对一双链的DNA分子进行31末端标记，可用（）
（a）Klenow酶（b）DNA聚合酶I（c）T4DNA聚合酶
答案
1.c；2
.c；3.
b；4.
b
5.
b，c，d，
e；
6.c；7.b；
8.d；9.d；10.
a；
11.b；
12.c；
13.c；
14.c
15.
b；
16.c；
17.
a；18.a；19.b
；20.c；21.a；22.
c；
23.a；
24.d；
25.c；
26.c；
27.
c；
28.a；
29.
b；30.a；31
.c；32.a,c,d,e，
33.
a，b，
c；34.
b；35.
c；36.
c；
37
.d；38
.b；
39.c；40.a；
41.c；42.a，b，
c；
43.b；
44.b；
45.d；
46.a；
47.
a；
48.c；
49.
c；50.b；51.
c；52.c；53.b；
54
.a,c,d；
55.a；
56.b
；57.a，
b；
58.c；59
.a；
60.d；61.b
；62.c；
三、简答题
1．说明SangerDNA测序法的原理。
2．某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?
3.在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的n类限制性内切核酸酶的识别序列,该位点的序列可能是什么?
4•下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是n类酶的识别序列：
GAATC
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