选修一 生物技术实践 高考真题学生版.docx

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选修一生物技术实践高考真题学生版

选修一《生物技术实践》高考真题

1、（2013全国卷Ⅰ）回答下列有关泡菜制作的习题：

（1）制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是      。

为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是             。

（2）泡菜制作过程中，乳酸发酵过程即为乳酸菌进行      的过程。

该过程发生在乳酸菌的      中。

（3）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有    、     和    等。

（4）从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是                ，原因是              。

2、（2013全国卷Ⅱ）临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。

实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。

回答下列问题：

（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用法或法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2）取该单菌落，用法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的。

（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素。

3、（2013海南卷）根据相关知识，回答胡萝卜素提取和酶应用方面的问题：

（l）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，通常在萃取前要将胡萝卜粉碎和，以提高萃取效率：

水蒸气蒸馏法（填“适合”或“不适合”）胡萝卜素的提取，原因是___；鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时，通常可采用法，并以样品作为对照。

（2）若要提高衣物上血渍的去除效果，可在洗衣粉中加入酶，因为该酶能将血红蛋白水解成可溶性的或；若要提高衣物上油渍的去除效果，洗衣粉中可添加___酶；使用加酶洗衣粉时，水温过低或过高时洗涤效果不好的原因分别是。

4、（2013山东卷）胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，流程如下：

（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用      或平板划线法接种。

采用平板划线法接种时需先灼烧接种环，其目的是     。

（2）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R生长提供    和 。

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和    以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用   方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目是      。

（4）纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。

鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为     。

5．（2013四川卷）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。

（1）图甲中，过程①需要的酶有。

为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以作为唯一碳源。

②、③过程需重复几次，目的是。

（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。

该同学的接种方法是；推测该同学接种时可能的操作失误是。

（3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种菌的发酵罐需要先排气，其原因是

。

（4）用凝胶色谱法分离α淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较。

6、（2014全国卷Ⅰ）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。

回答下列问题:

（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合物，其中的葡萄糖糖苷酶可将     分解成     。

（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成   色复合物。

用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的     。

（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基

（成分见下表）

酵母膏

无机盐

淀粉

纤维素粉

琼脂

CR溶液

水

培养基甲

+

+

+

+

-

+

+

培养基乙

+

+

+

-

+

+

+

 注：

“+”表示有，“－”表示无。

据表判断，培养基甲    （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是  

；培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是      ； 

7、（2014全国卷Ⅱ）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。

回答下列问题：

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。

在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是                         ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。

据此可得出每升水样中的活菌数为     。

（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。

操作时，接种环通过   灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。

这样做的目的是           。

（3）示意图A和B中，    表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。

结果发现：

振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。

分析其原因是：

振荡培养能提高培养液的     的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高       的利用率。

8、（2014山东卷）玉米是重要的粮食作物，深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。

流程如下：

（1）玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。

培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供。

发酵过程中检测酵母菌数量可采用法或稀释涂布平板法计数。

（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用法或法从玉米胚芽中提取。

（3）玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。

利用技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。

（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐高温的催化。

PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、和三步。

9、（2014四川卷）有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。

研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。

分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是。

（2）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和，这些植物激素一般需要事先单独配制成保存备用。

（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是。

划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。

造成划线无菌落可能的操作失误有。

（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。

该实验的假设是，该实验设计是否合理？

为什么？

。

10、（2014江苏卷）为了获得β胡萝卜素产品，某小组开展了产β胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。

请回答下列问题：

（1）实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该。

（2）为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是。

（3）如图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是。

（填序号）

①安全阀、放气阀、压力表　②放气阀、安全阀、压力表

③安全阀、放气阀、温度表④放气阀、安全阀、温度表

（4）为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是。

（5）为增加β胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是；研磨时（填“需要”或“不需要”）添加CaCO3，理由是。

11、（2015全国卷Ⅰ）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。

脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。

回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用染色。

微生物A产生的油脂不易挥发，可选用（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用直接计数；若要测定其活菌数量，可选用法进行计数。

 （4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，℃条件下该酶活力最小。

为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕℃设计后续实验。

12、（2015全国卷Ⅱ）回答与胡萝卜素有关的问题：

（1）胡萝卜含有的胡萝卜素中，最主要的是       （填“α-胡萝卜素”、“β-胡萝卜素”或“γ-胡萝卜素”），该胡萝卜素在人体内可以转变成两分子    ，后者缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症，该疾病称为     ，胡萝卜素是   （填“挥发性”或“非挥发性”）物质。

（2）工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时，   （填“需要”或“不需要”）将鲜活的盐藻干燥。

（3）现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的      作为胡萝卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是                   。

13、（2015北京卷）乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。

乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

（1）筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用__________作为培养基中的唯一碳源。

培养基中琼脂的作用是___________。

从功能上讲，这种培养基属于___________。

（2）培养微生物L前，宜采用__________方法对接种环进行灭菌。

（3）纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。

在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越。

（4）乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的   确定其应用价值。

除化学结合法外，酶的固定化方法还包括     、     、离子吸附法及交联法等。

14．（2015广东卷）泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。

某兴趣小组准备参加“科技创新大赛”，查阅资料得到下图。

（1）制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是。

乳酸菌发酵第一阶段的产物有。

（2）据上图，与第3天相比，第8天后的泡菜更适于食用，因为后者；pH呈下降趋势，原因是。

（3）该小组得到一株“优选”乳酸菌（亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5倍），拟参照资料的实验方案和食盐浓度（4%～10%），探究与普通乳酸菌相比用“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低，并确定其最适条件。

请你设计一个实验结果，并推测实验结论。

记录表：

结论：

15．（2015海南卷）生产果汁时，用果胶酶处理果泥可提高果汁的出汁量。

回答下列相关问题：

（1）某同学用三种来源的果胶酶进行三组实验，各组实验除酶的来源不同外，其他条件都相同，测定各组的出汁量，据此计算各组果胶酶活性的平均值并进行比较。

这一实验的目的是

。

（2）现有一种新分离出来的果胶酶，为探究其最适温度，某同学设计了如下实验：

取试管16支，分别加入等量的果泥、果胶酶、缓冲液，混匀，平均分为4组，分别置于0℃、5℃、10℃、40℃下保温相同时间，然后，测定各试管中的出汁量并计算各组出汁量平均值。

该实验温度设置的不足之处有和。

（3）某同学取5组试管（A～E）分别加入等量的同种果泥，在A、B、C、D4个实验组的试管中分别加入等量的缓冲液和不同量的同种果胶酶，然后，补充蒸馏水使4组试管内液体体积相同；E组加入蒸馏水使试管中液体体积与实验组相同。

将5组试管置于适宜温度下保温一定时间后，测定各组的出汁量。

通过A～D组实验可比较不同实验组出汁量的差异。

本实验中，若要检测加入酶的量等于0而其他条件均与实验组相同时的出汁量，E组设计（填“能”或“不能”）达到目的，其原因是

16、（2015江苏卷）关于“腐乳的制作”实验，下列叙述错误的是（　　）

A．将腐乳坯堆积起来会导致堆内温度升高，影响毛霉生长

B．腐乳坯若被细菌污染，则腐乳坯表面会出现黏性物

C．勤向腐乳坯表面喷水，有利于毛霉菌丝的生长

D．装坛阶段加入料酒，可有效防止杂菌污染

17、（2015江苏卷）做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（　　）

A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

18、（2016全国卷Ⅰ）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。

某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。

实验步骤如下：

①配置培养基（成分：

牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;

②制作无菌平板；

③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；

④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题:

（1）该培养基中微生物所需的氮来源于。

若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是。

（2）步骤③中，实验组的操作是。

（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了现象。

若将30（即36-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法（填“正确”或“不正确”）。

19、（2016全国卷Ⅱ）苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的，回答下列为题：

（1）酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。

图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的_________________中进行，其产物乙醇与_________________试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；过程③在酵母菌细胞的________________中进行，与无氧条件相比，在有氧条件下，酵母菌的增殖速度______。

（2）第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在________条件下才能完成。

（3）在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度_______（填“低于”或“高于”）第二阶段。

（4）醋酸杆菌属于_______核生物，其细胞结构中（填“含有”或“不含有”）线粒体。

20、（2016全国卷Ⅲ）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。

分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。

回答下列问题：

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_________________。

（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有

和。

分离纯化时应挑选出的菌落作为候选菌。

（3）乳酸菌在-20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的（填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”）。

21、（2016江苏卷）为了使牛仔裤呈现“穿旧”效果，在工业洗衣机中用酶洗代替传统的浮石擦洗，是目前重要的生产手段（工艺流程见下图）。

下列叙述中错误的是（多选）（）

A．纤维素酶在仿旧中的作用机理与其在洗衣粉中去污的机理相似

B．在上述工艺中，为重复使用纤维素酶，可选用适当的包埋剂固定化酶

C．在上述工艺中，通过调节温度、酸碱度、处理时间可控制仿旧颜色的深浅

D．纤维素酶催化葡萄糖残基间磷酸二酯键的水解分解纤维素

22、（2016江苏卷）下列关于中学“腐乳的制作”实验，叙述正确的是（）

A.加盐主要是为了调节水分，利于毛霉生长

B.加料酒主要是为了灭菌，避免腐败变质

C.发酵过程中起主要作用的是乳酸杆菌

D.实验室制作的腐乳不宜直接食用

23、（2016江苏卷）漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。

下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（多选）（）

A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品

B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落

C．在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化

D．斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株

24、（2016四川卷）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

（1）图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添加作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。

（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

该过程采取的接种方法是，每克土壤样品中的细菌数量为×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较。

（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAG、UGA和UAA）。

突变基因转录的mRNA中，终止密码为，突变基因表达的蛋白质含个氨基酸。

25、（2016天津卷）天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图。

（1）在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶。

（2）在酒精发酵阶段，需添加酵母菌。

在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。

通气能提高的数量，有利于密闭时获得更多的酒精产物。

（3）在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发酵30天。

工艺如下。

①发酵过程中，定期取样测定醋酸杆菌密度变化，趋势如下图。

据图分析，与颠倒前相比，B层醋酸杆菌在颠倒后密度变化的特点是，由此推断，影响醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是。

②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。

发酵过程中，发酵缸中层醋醅有利于乳酸菌繁殖，积累乳酸。

③成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期营养物质消耗等环境因素的变化，加剧了不同种类乳酸菌的，淘汰了部分乳酸菌种类。

26、（2016海南卷）

（1）蛋白酶甲、乙、丙三者的活性随pH的变化如图所示。

通常，用清水洗涤衣服上的新鲜血迹时，不应该使用开水，原因是。

若要去除衣服上的血渍，应选择含有（填“蛋白酶甲”、“蛋白酶乙”或“蛋白酶丙”）的碱性洗衣粉，理由是。

（2）某同学为了洗去衣服上的油渍，洗衣时在市售的蛋白酶洗衣液中添加脂肪酶，该同学的做法

（填“合理”或“不合理”），理由是。

（3）已知溶液的pH可以影响酶的活性，请推测pH影响某种蛋白酶活性的原因可能是其影响了酶和底物分子中（填“羧基和氨基”、“氨基和甲基”、“羧基和甲基”或“甲基和甲基”）等基团的解离状态。

27、（2017全国卷Ⅰ）某些土壤细菌可将尿素分解成

和

，供植物吸收和利用。

回答下列问题：

（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生　　　　　。

能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物

作为碳源，原因是　　　　　。

但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是　　　　　

（答出两点即可）。

（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择　　　　　（填“尿素”“

”或“尿素

”）作为氮源，不选择其他两组的原因是　　　　　

。

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有

和

，其作用有　　　　

。

（答出两点即可）。

28、（2017全国卷Ⅱ）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。

为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在32h内定期取样观测发酵效果。

回答下列问题：

（1）该实验的自变量是、。

（2）如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是。

（3）如果在实验后，发现32h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事情

。

（4）从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为，脂肪转变为。

29、（2017全国卷Ⅲ）绿色植物甲含有物质W，该物质为无色针状晶体，易溶于极性有机溶剂，难溶于水，且受热、受潮易分解。

其提取流程为：

植物甲

粉碎

加溶剂

振荡

收集提取液

活性炭处理

过滤去除活性炭

蒸馏（含回收溶剂）

重结晶

成品。

回答下列问题：

⑴在提取物质W时，最好应选用的一种原料是（填“高温烘干”“晾干”或“新鲜”）的植物甲，不宜选用其他两种的原因是。

⑵提取物质W时，振荡的作用是。

⑶活性炭具有很强的吸附能力，在提取过程中，用活性炭处理提取液的目的是。

⑷现有丙酮（沸点

）、乙醇（沸点约

）两种溶剂，在提取物质W时，应选用丙酮作为提取剂，理由是。

⑸该实验操作过程中应注意的事项是。

（答出两点即可）。

30、（2017江苏卷）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。

小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。

请回答下列问题:

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐，以达到富集酚降解菌的目的。

若上图平板中菌落过于密集，应进一步，以便于菌落计数与分离。

制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加。

（3）下图为连续划线法示意图，在图中（填图中序号）区域更易获得单菌落。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。

先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为。

管号

1

2

3

4

5

6

苯酚浓度（mg/L）

1

如果废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_____________（填序号：

①5②10③20