《生物化学实验》教学大纲.docx
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《生物化学实验》教学大纲
《生物化学实验》教学大纲
一．实验目的
二．实验内容
三．实验学时安排
四．考试方法
五．参考教材
一．实验目的
生物化学是一门实验性学科，其所有知识均来自于实验。
本课程着眼于学生学习和掌握生物化学课程的基本理论、基本知识以及实验技能，培养学生具有初步分析问题和解决问题的能力。
生物化学实验课通过学习滴定、比色、纸层析、电泳、生化制备等基本实验技术，分析研究糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素等生化物质及某些代谢过程，培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科学作风，同时验证生物化学的某些基本理论知识，加深感性认识，并锻炼初步的综合实验能力。
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二．实验内容
∙实验一 糖的呈色反应及还原糖的检验
一．实验目的
学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法；了解鉴定还原糖的方法及其原理。
二．实验内容
Molish反应、蒽酮反应、Seliwanoff反应、Bial反应、Fehling反应。
三.实验过程
1.呈色反应
（1）Molish反应
（2）蒽酮反应
（3）Seliwanoff反应
（4）Bial反应
2.还原糖的检验
（1）Fehling反应
（2）Benedict反应
（3）Barfoed反应
四.作业与思考
1.列表总结和比较本实验7种颜色反应的原理及其应用.
2.应用Molish反应和Seliwanoff反应分析未知样品时，应注意些什么问题？
3.举例说明那些糖属于还原糖.
∙实验二 脂类组成对脂类单分子层通透性的影响
一、实验目的
学习制作脂类单分子层和鉴定它的原理及方法，比较不同脂类所形成的脂类单分子层通透性的差异。
二、实验内容
以脂类单分子层作为模式膜，用甲烯蓝为指示剂，观察不同脂类单分子层通透性的影响。
三.实验过程
1.溶液准备
2.分光光度计测样
四.作业与思考
1.试述生物膜的基本结构与功能
2.解释下列名词：
双亲媒性分子、脂类单分子层、磷脂双分子层、膜的内在蛋白质和外在蛋白质.
∙实验三 蛋白质浓度的测定
（1）——Folin-酚法
一、实验目的
学习Folin-酚法的原理及方法，制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。
二、实验内容
制备Folin-酚法标准曲线，测定未知样品蛋白质浓度。
三.实验过程
1.制备Folin-酚法标准曲线
2.测定未知样品蛋白质浓度
3.计算
四.作业与思考
1.Folin-酚法测定蛋白的原理是什么？
2.有哪些因素可以干扰Folin-酚测定蛋白含量？
3.作为标准蛋白的牛血清清蛋白或酪蛋白在应用时有何要求？
∙实验四 蛋白质浓度测定
（2）——紫外线吸收法
一、实验目的
学习紫外线（UV）吸收法测定蛋白质含量的原理，了解紫外分光光度计的构造原理，掌握它的使用方法。
二、实验内容
标准曲线的绘制及未知浓度蛋白质溶液的测定。
三.实验过程
1.标准曲线的绘制
2.样品测定
四.作业与思考
1.本法与其它测定蛋白质含量法相比，有哪些优点？
2.若样品中含有干扰测定的杂质，应如何校正实验结果？
∙实验五 氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法
一、实验目的
了解氨基酸滤纸层析的原理及操作方法。
二、实验内容
进行氨基酸的纸层析及定性鉴定。
三.实验过程
1.滤纸的剪裁
2.点样
3.展层
4.定性鉴定
5.定量测定
四.作业与思考
1.做好本实验的关键是什么？
2.实验操作过程，为何不能用手接触滤纸？
3.影响Rf制的因素有哪些？
∙实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的
了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术，测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、实验内容
进行血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳并进行结果判断。
三.实验过程
1.仪器与薄膜的准备
2.点样
3.电泳
4.染色与漂洗
5.透明
6.结果判断与定量
四.作业与思考
1.根据人血清中血清蛋白各组分等电点，如何估计它们在pH8.6的巴比妥—巴比妥钠电解缓冲液中移动的相对位置
2.简述醋酸纤维素薄膜电泳原理及优点
∙实验七 蛋白质和氨基酸的呈色反应
一、实验目的
学习常用的鉴定蛋白质氨基酸的方法及其原理；学习几种特定氨基酸的特殊颜色反应及其原理。
二、实验内容
双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、茚三酮反应。
三.实验过程
1.加样
2.观察
四.作业与思考
1.综合分析、对比蛋白质和氨基酸各种鉴定方法的特点和用途？
2.如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反应呈阴性结果，能对此作何结论？
3.茚三酮反应的阳性结果是否是同一色调？
若不是，为什么？
∙实验八 蛋白质的沉淀、变性反应
一、实验目的
了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系；学习盐析和透析等生物化学的操作技术。
二、实验内容
可逆沉淀反应，不可逆沉淀反应。
三.实验过程
1.蛋白质的可逆沉淀反应—蛋白质的盐析作用
2.蛋白质的不可逆沉淀反应
（1）重金属沉淀蛋白质
（2）有机酸沉淀蛋白质
（3）无机酸沉淀蛋白质
（4）加热沉淀蛋白质
3.蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的比较
四.作业与思考
1.为什么鸡蛋清蛋白可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂？
2.蛋白质分子中的那些集团可以与
（1）重金属离子作用而使蛋白质沉淀？
（2）有机酸、无机酸作用而使蛋白质沉淀？
3.高浓度的硫酸铵对蛋白质溶解度有何影响，为什么？
4.在蛋白质可逆沉淀反应的实验中，为何要用蛋白质氯化钠溶液？
∙实验九 酵母RNA的提取与地衣酚显色测定法
一、实验目的
了解并掌握稀碱法提取RNA及地衣酚显色法测定RNA含量的基本原理及具体方法。
二、实验内容
用稀碱法提取酵母细胞RNA，并用地衣酚显色法测定。
三.实验过程
1.酵母RNA提取
2.RNA地衣酚显色测定
（1）标准曲线的制作
（2）样品的测定
（3）RNA含量的计算
四.作业与思考
1.用你所学过的化学知识，分析三种催化剂：
FeCl3·6H2O,CuCl2·H2O
和CuO,哪种催化剂的催化效果更好？
2.地衣酚反应中，干扰RNA测定的因素有哪些？
如何能减少它们的影响？
∙实验十 动物组织DNA的制备
一、实验目的
学习盐溶液法从动物组织中提取脱氧核糖核酸的原理及操作方法。
二、实验内容
以猪肝为原料用不同浓度的盐溶液提取其中的脱氧核糖核酸。
三.实验过程
1.DNA的提取
2.DNA含量的测定
（1）标准曲线的制定
（2）样品的测定
（3）DNA含量的测定
四.作业与思考
1.结合本人实验操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子DNA的降解和断裂。
2.DNA制品都可以用哪几种方法测定其含量？
试从它们的原理、准确性等方面加以比较。
∙实验十一 核酸浓度测定
（1）——定磷法
一、实验目的
掌握利用核酸定磷测定法测定核酸的含量。
二、实验内容
通过对总磷、无机磷的测定，计算未知样品中的核酸浓度。
三.实验过程
1.定磷标准曲线的制定
2.测定总磷量
（1）配制RNA样品溶液
（2）样品的消化、总磷量和回收率测定
（3）无机磷的测定
3.核酸含量计算
四.作业与思考
1.测定磷的回收率有何意义？
2.为什么所用水的质量、钼酸铵的质量和显色时酸的浓度对测定结果影响较大？
∙实验十二 核酸浓度测定
（2）——紫外线吸收法
一、实验目的
了解紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理，并进一步了解紫外分光光度计的使用方法。
二、实验内容
用紫外线吸收法测定核酸浓度。
三.实验过程
1.标准曲线的绘制
2.样品蛋白质浓度的测定
四.作业与思考
1.干扰本实验的物质有哪些？
2.设计排除这些干扰物的实验。
∙实验十三 维生素A、B1、B2的定性鉴定
一、实验目的
了解维生素A、B1、B2定性鉴定的原理及方法。
二、实验内容
维生素A的定性鉴定以及维生素B1、B2的定性鉴定。
三.实验过程
1.维生素A
2.维生素B1（重氮试剂法）
3.维生素B1（荧光法）
4.维生素B2
四.作业与思考
1.举出含有维生素A、B1和B2最丰富的天然食物。
2.说明4种定性鉴定维生素A、B1和B2的基本原理。
3.SbCl3呈色反应检测维生素A实验的重要环节是什么？
4.试把上述4种鉴定方法之一改编为定量检测方法。
∙实验十四 维生素C的定量测定
一、实验目的
了解用2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量的原理及方法。
二、实验内容
用2，6—二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的含量。
三.实验过程
1.提取
2.标准液的滴定
3.样品滴定
4.计算
四.作业与思考
1.为了测定准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？
为什么？
2.试简述维生素C的生理意义。
∙实验十五 酶的激活剂、抑制剂及温度对酶的活性的影响
一、实验目的
了解酶反应的激活剂、抑制剂，了解温度对酶活性的影响。
二、实验内容
了解酶的激活剂、抑制剂、酶的最适反应温度。
三.实验过程
四.作业与思考
1.激活剂可分哪几类？
本实验中的氯化钠、硫酸铜属于哪种类型？
2.抑制剂与变性剂有何不同？
试举例说明。
3.酶反应的最适温度是酶反应的物理常数吗？
它与哪些因素有关？
∙实验十六 血清谷丙转氨酶的测定（King氏法）
一、实验目的
掌握血清谷丙转氨酶（SGPT）活力测定的方法，学习绘制标准曲线，并学习如何设计实验。
二、实验内容
用King氏法测定血清谷丙转氨酶的活性。
三.实验过程
1.制备标准曲线
2.绘制标准曲线
3.样品及回收率测定
4.结果计算
（1）标准曲线测定法
（2）标准管测定法
（3）计算回收率
四.作业与思考
1.什么叫做转氨基作用？
根据所学理论阐明转氨基作用在蛋白质的合成与分解及糖、脂肪代谢中有何重要作用？
2.回收率测定在实际工作中有何用途？
∙实验十七 乳酸脱氢酶活力测定
一、实验目的
学习LDH活力测定原理，测定猪肉提取液LDH活力
二、实验内容
利用动物肌肉制备乳酸脱氢酶的组织提取液，用紫外分光光度法测定LDH的活力。
三.实验过程
1.制备肌肉匀浆
2.LDH活力测定
3.蛋白质含量测定
4.数据处理
四.作业与思考
1.简述用紫外分光光度法测定以NAD+为辅酶的各种脱氢酶测定原理。
∙实验十八 聚合酶链式反应（PCR）
掌握基本PCR技术的原理，学会PCR扩增过程中各步骤的操作，了解PCR扩增仪的使用方法，学会扩增结果的判读（琼脂糖凝胶电泳法）。
二、实验内容
以大肠杆菌23SRNA的DNA中106～476bp的特异性区域为扩增目的片段，通过PCR技术的基本要求，扩增得到370bp的扩增产物，并通过琼脂糖凝胶电泳的方法对结果进行分析。
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三．实验学时安排（总课时为54学时）：
第一学期实验
序号
实验名称
周次
学时
类型
实验1
糖的呈色反应及还原糖的检验
3-4
3
验证
实验2
脂类组成对脂类单分子层通透性的影响
5-6
3
验证
实验3
蛋白质浓度测定
（1）——Folin酚法
7-8
3
综合
实验4
蛋白质浓度测定
（2）——紫外线吸收法
9-10
3
综合
实验5
氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法
11-12
4
综合
实验6
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
13-14
4
综合
实验7
蛋白质和氨基酸的呈色反应
15-16
2
验证
实验8
蛋白质的沉淀、变性反应
15-16
2
验证
实验9
酵母RNA的提取与地衣酚显色测定法
17-18
4
验证
第二学期实验
序号
实验名称
周次
学时
类型
实验10
动物组织DNA的制备
3-4
3
综合
实验11
核酸浓度测定
（1）——定磷法
5-6
3
综合
实验12
核酸浓度测定
（2）——紫外线吸收法
7-8
3
综合
实验13
维生素A、B1、B2的定性鉴定
9-10
3
验证
实验14
维生素C的定量测定
9-10
4
综合
实验15
酶的激活剂、抑制剂及温度对酶的活性的影响
11-12
4
验证
实验16
血清谷丙转氨酶的测定（King氏法）
13-14
2
综合
实验17
乳酸脱氢酶活力测定
15-16
2
综合
实验18
聚合酶链式反应
17-18
4
创新
备注：
根据实际情况选做十六至十八个实验。
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四．考试方法
每次实验上交实验报告，学期末汇总平均分数。
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五．参考教材
《生物化学实验原理和方法》李建武等编.北京大学出版社。
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