最终的烟叶化学成分测定方法.docx

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最终的烟叶化学成分测定方法

植物组织中总氮含量的测定

（凯氏定氮仪自动定氮法）

一、原理：

采用模块式消化，在硫酸作用下样品中的蛋白氮转化为硫酸铵。

通过添加硫酸钾升高沸点，高的沸腾温度有助于打断蛋白中的肽键和把氨基转化成氨离子，加入铜催化剂用于提高反应速率。

氨用碱性蒸馏释放并用标定的酸溶液滴定定量，采用颜色终点检测技术。

最后通过计算得出含氮量。

二、盐酸标定:

a.Na2CO3校正液测定

称取10g左右无水Na2CO3研成细粉，在265C1h或200C2h的条件

下烘干，在干燥器中冷却后移入烧瓶中，盖紧，在干燥器中存放

b.指示剂

将0.1g甲基红溶于100ml乙醇中

c.过程

称取0.1~0.15Na>CO3，记重W，移入锥形瓶中，加20ml水，力口10滴指示剂，用待测的盐酸滴至粉红色，记下所用盐酸毫升数A1，将

锥形瓶中的溶液煮沸几分钟，冷却至室温，此时粉红色褪去，继续用盐酸滴定至粉红色复现，记下滴定毫升数A2。

（A1为25多，可先加20ml后再慢慢滴定）

d.计算：

C（mol/L）=（18.86W1）/（A1+A2）

三、试剂：

1〉浓H2SO4（98%）

2〉含铜凯氏催化片（每片含3.5gK2SO4和0.4gCuSO•5HO。

3〉40%NaOH（W/V）4000g溶于10L水中

4>1%硼酸（H3BO3）吸收液，称取100g硼酸于10L水中，加100ml溴钾酚绿溶液（100mg溴钾酚绿溶于100ml乙醇中），再加入100ml甲基红溶液（100mg甲基红溶于100ml乙醇中。

），最后加适量的4%NaOH溶液，调PH值（H3BO3溶液最后颜色为紫红色为佳）。

5〉0.1mol/L盐酸标准溶液，标定后使用。

四、操作步骤

（1）向每个消化管中加入0.1克样品，一片凯氏催化片，10ml浓硫酸。

接通消化器的电源，加热到420C条件下消化30分钟，直到管内液体变为清澈透明为止。

（2）待消化管冷却后加在全自动凯氏定氮仪，按仪器说明进行操作，最后读数即可。

凯氏定氮仪用下列公式计算%氮含量：

%凯氏氮二[（Vs-Vb）JNX1.401]/（W<10）

其中：

Vs=用于滴定样品的标准酸ml数

Vb=用于滴定试剂空白的标准酸ml数

N=标准HCL的当量浓度（0.1000）

14.01=氮的原子量

W=样品或标准的重量g数

10=把mg/g转变为百分数的因数

3,5—二硝基水杨酸（DNS比色法测还原糖

一、仪器与用具

25ml刻度试管；离心管；100ml玻璃烧杯；100ml三角瓶；刻度吸管

1ml、2ml、10ml；沸水浴；离心机；电子天平；分光光度计。

二、试剂

1.1mg/ml葡萄糖标准液：

准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80C烘至恒重），在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。

2.3,5—二硝基水杨酸（DNS）（显色液）：

6.3g3,5—二硝基水杨酸和262ml2mol/LNaOH加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g无水亚硫酸钠，搅拌溶解。

冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶备用。

三、实验步骤：

1.可溶性糖的提取：

准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%乙醇，于80C水浴浸提30min,冷却后于4000转离心5min收集上清液，残渣再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。

2.标准曲线的绘制：

取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液

（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入DNS试U1.5ml,于沸水浴中加热5min,取出后立即浸入冷水冷却至室温，再用蒸馏水定容至25ml刻度处，摇匀，然后在540nm波长处比色。

3.还原糖的测定：

取提取液1ml于试管中（空白中用1ml蒸馏水代替），加入DNS试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml，摇匀，然后在540nm波长处比色。

4.计算：

还原糖（％）=〔（CXV/a）/（WX1000）〕x100

C—标准曲线方程求得的还原糖含量mg数；

V—提取液的体积（ml）;W—样品重量（g）;a=0.01

、/■I■'。

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注意：

1.在称取烟叶前离心管内先加入4ml80%乙醇，加入烟叶后立即充分摇匀，以防烟叶凝结成块，影响还原糖测定。

2.称取完烟叶后，在浸提之前先混匀后静置10min。

3.在第一次浸提过程中应充分摇匀3-4次，第二次和第三次充分摇匀2次，摇匀之前先将盖子打开，释放管内热蒸汽，以防管内液体喷出。

4.吸取提取液之前应再次摇匀提取液，比色之前也应将待测液充分摇匀后才能进行比色，因为还原糖沉降速度极快，不充分摇匀将严重影响实验数据的准确性。

5.水浴锅内水位必须达到离心管内液面之上

6.比色之前应先检查比色杯空杯（内乘双蒸水）的吸光度是否一致。

最好选用差别在0.003之内的比色杯。

烟叶中烟碱的测定（提取脱色法）

（一）方法原理

由于烟碱和无机酸结合较有机酸强，因此，用一定浓度的无机酸提取，完全可以把烟碱从烟叶中分离出来。

同时，用粉状活性炭脱去提取液中杂色。

然后根据烟碱对紫外光有选择吸收，其吸光度与烟碱含量呈正相关，可由紫外分光光度计测得待测液的浓度，计算出烟碱的含量。

（二）试剂及仪器

47.2g/LHCl：

吸取20mLHC（l37%的盐酸或密度为：

1.18g/ml的盐酸），定容至500ml

分析天平、紫外分光光度计（石英比色皿）、恒温水浴锅。

（三）操作步骤

1．待测液的制备称取粉碎均匀通过60目筛的烟样30mg（0.03g）左右，置于100mL三角瓶中，加入1/3角勺粉状活性炭和HCI20mL,不断振荡10min,然后过滤到100mL容量瓶中，并少量多次用蒸馏水冲洗三角瓶，将洗液滤入容量瓶中，并定容至刻度，充分摇匀，以备测定用。

另把HCI20mL加入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容后，摇匀做空白。

2．测定将上述待测液置紫外分光光度计上,以空白作参比,调吸光度为零，在236nm259nm、282nm处测定待测液的吸光度。

（四）结果计算

1.059X[A259—1/2（A236+A282）]

烟碱%X100X100

W（1-水%X34.3X1000

式中W——干样重（g）;

1.059——换算为重量法测定值的校正系数；

34.3——烟碱的吸光系数。

（五）注意事项

（1）不要用颗粒状活性炭。

（2）及时清洗用具,否则活性炭很难洗干净

烟叶中氯含量的测定（浸提法）

——热蒸馏水法

一、实验原理

依据烟叶中的氯大都以离子状态存在的特点,用热水将氯从烟叶中提取出来,可节省时间、提高效率,但提取液中有影响滴定终点的黄色素。

根据碱性醋酸铅常用作液体澄清剂的特点,在用热蒸馏水浸提烟叶中氯的同时,加入碱性醋酸铅,有效去除浸提液中干扰测定的色素,得到一个快速制备氯待测液前处理的简便方法（浸提法）。

在含有C1-的溶液中，以K2CrO4作指示剂，用AgNO标淮溶液瘸定，由于AgCI的溶解度比AgCrQ小，反过来说，铬酸银的溶液度比AgCI的高，开始时只生成AgCI沉淀，待CI-作为AgCI全部沉淀完毕后，过量一滴AgNO才生成AgCrQ砖红色沉淀。

NaCI十AgNO——>AgCI俘L白色）十NaNQ

铬酸钾和银盐的反应如下：

K26Q十2AgN>2KNO十AgCrQ（砖红色）

由消耗的标准硝酸银用量，即可计算出氯离子的含量。

二、试剂与仪器

1.材料烟叶样品经40C烘干，粉碎过60目筛，混匀。

2.主要仪器和试剂

（1）离心机，恒温振荡器及各种玻璃器皿；

（2）0.01mol/LAgNO标准溶液，50g/LOCrQ，活性炭，12%NqHCO

三、试验方法

1.准确称取0.3g烟叶样品，置于50ml离心管中，加入60C热蒸馏

水25ml,活性炭大约0.4~0.5g,振荡15min。

2.4000转离心6min后，过滤到50ml容量瓶中，冷却后定容至刻度

充分摇匀。

3.吸取滤液25ml于100ml三角瓶中，用12%NaHCO调待测液到微碱性（加0.35ml左右，pH基本在7-9之间）。

4.加入50g/LK2CrO指示剂10滴（0.4ml）,用0.01mol/LAgNO3

标准溶液滴定，不断摇动，当待测液出现砖红色沉淀时，记下AgNO的用量,计算测定结果

四、结果计算

烟叶中Cl%“

NVX0.0355X分取倍数x100

式中V—滴定时所消耗硝酸银的体积

N—硝酸银的当量浓度

W—烟叶称祥重量（克）,

0.0355—每l毫克当量氯离子的克数

100—换算成每100克烟叶中氮的百分含量

五、注意事项

1.用铬酸钾做指示剂只能在中性或微碱性溶液中进行，测定溶液应在

pH6.5—10.5之间。

这是因为在酸性溶液中，指示剂的铬酸根离子与

氢离子发生如下反应：

2H十2CrQ-=2HCrO=CrO-十H2O

因而减低了铬酸根离子的浓度，影响铬酸银沉淀的生成。

然而在强碱性溶液中，则银离子与氢氧根离子反应生成氧化银沉淀，又会影响分

析结果，其反应如下：

2Ag-十20H=2AgOH==AO十HO

2.氯离子含量太高时，生成白色氯化银沉淀过多而影响终点，此时可减少待测液吸取量。

3.大量硫酸盐存在会对测定发生干扰，当待测液中硫酸根离子存在量在32毫克以下时对本测定一般无干扰。

4.滴定时要充分摇动：

在等当点前C1-没有被滴定完，但有一小部分

C「会被AgC1沉淀吸附，特使终点提前，所以要充分摇办使被沉淀吸附的C1—释放出来，以获得准确的结果。

5.可以提前烘干样品，计算时不考虑含水量。

烟叶钾的测定——NH4OAc浸提，火焰光度法

一、方法原理

以NH4OAc作为浸提剂与阳离子起交换作用，NH4OAc浸出液常用火焰光度计直接测定。

为了抵消NH4OAc的干扰影响，标准钾溶液也需要用1molL-1NH4OAc配制。

二、主要仪器与试剂

1.火焰光度计、往返式振荡机

2.试剂

（1）ImolL-1中性NH4OAC（pH=7.0）溶液。

称取化学CH3COONH477.09g加水稀释，定容至近1L。

用HOAc或NH4OH调pH=7.0，在酸度计上调节）。

根据50mL所用NH4OH或稀HOAc的毫升数，算出所配溶液大概需要量，最后调至pH=7.0。

（2）钾的标准溶液的配制。

称取KCI（二级，110C烘干2h）0.1907g溶于1molL-1NH4OAc溶液中，定容至1L,即为含100阳mL-1K的-1

NH4OAC溶液。

同时分别准确吸取此100®mL-K标准液0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0mL放入100mL容量瓶中，1molL-1NH4OAc溶液定容，即得0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0gmL-1K标准系列溶液。

三、操作步骤

称取通过筛的烟样0.02g于50mL离心管中，力口1molL-1NH4OAc溶液25mL,振荡15min,4000r离心4分钟，用干的普通定性滤纸过滤到100ml容量瓶中。

同钾标准系列溶液一起在火焰光度计上测定。

记录其检流计上的读数,然后从标准曲线上求得其浓度。

标准曲线的绘制：

将上面配制的钾标准系列溶液，以浓度最大的一个定到火焰光度计上检流计为满度（100）,然后从稀到浓依序进行测定，记录检流计上的读数。

以流计读数为纵坐标，钾（K）的浓度⑷mL-1为横坐标，绘制标准曲线。

四、结果计算

钾％=待测液（ggmL-1,K）/标准设置倍数乂—X分取倍数+10000m

式中：

V加入浸提剂mL数：

m烘干烟样的质量（g）

10000⑷转化成百分数乘的系数

五、注释

1.含NH4OAC的K标准溶液配制后不能放置过久，以免长霉，影响测定结果。