液相串联质谱检测方法前处理总结docdeflate.docx

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液相串联质谱检测方法前处理总结docdeflate

首先，作为质检员，不但要掌握专业的检测知识，还需要认真仔细，才能发现问题，找出问题，解决问题。

所以这三个月培训使我受益匪浅。

在检验之前，要学会读懂相关的检验标准，并能融会贯通到实际当中去，并且要做好操作，及时的发现及纠正检验过程中存在的问题。

其次，经过实习，我认为这有助于提高自己的综合素质，全面发展了自己。

古语说得好：

流水不腐，户枢不蠹。

我在大学期间一直学习食品质量安全与检测专业及相关知识。

实习这段时间，我又对各种检测项目等基础知识有了一个清晰的认识。

也是对自己专业知识的重新认识和深化，这也是干好这项工作的业务基础。

再次，我认为自己培养了该职务所必须的素养和品质。

质检工作要求质检员的敬业精神比较强，工作认真负责，勤勤恳恳，任劳任怨，干一行，爱一行，专一行。

尤其是严明的组织纪律性、吃苦耐劳的优良品质、雷厉风行的工作作风，这是干好一切工作的基础。

同时思想上也要求比较活跃，接受新事物比较快，爱学习、爱思考、爱出点子，工作中注意发挥主观能动性，超前意识强，这有利于开拓工作新局面。

其他的如办事稳妥，处世严谨，在廉洁自律信奉诚实、正派的做人宗旨，能够与人团结共事，而且具有良好的协调能力上更应该严格的要求自己，这是做好一切工作的保证，也是新人能够更快地进入质检员角色，开展工作的前提和保障。

实习期间这些方面的要求都有所提高，可谓受益匪浅。

前处理总结

第一部分瘦肉精的检测

一尿样

1试剂：

乙腈（色谱纯）、乙腈水（10+90）（所用水为超纯水）

2器材：

50ml离心管、移液枪（200ul、1ml、10ml）、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器、25ml蒸馏瓶、1ml针管、0.22um有机滤膜。

3实验步骤：

吸2ml尿样于2ml离心管中备用→从尿样中吸取500ul于50ml离心管中→加10ml乙腈→涡旋→离心（6000r/min、5min）→上清液转移入25ml蒸馏瓶中40℃水浴减压蒸干→加2ml乙腈水（10+90）定容后超声溶解→1ml针管吸取0.6-0.7ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。

4理解要点：

1）:

样品稀释倍数为4

2）:

加入乙腈提取之前需要加入标100ul（10ng/ml）,目的是看回收率。

二瘦肉精国标法

1试剂：

0.03mol/L盐酸溶液、甲醇、甲醇氨水（95+5）、氨水乙酸乙酯（3+97）、乙腈水（10+90）、0.2mol/L乙酸钠溶液（称取16.4g溶于1L水中，用冰醋酸调节PH值至5.20）、β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶、同位素标、标准品。

2器材：

电子天平、50ml离心管、10ml离心管、移液枪（200ul、1ml、10ml）、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器（平行振荡器）、25ml蒸馏瓶、MCX固相萃取柱、固相萃取装置、1ml针管、0.22um有机滤膜。

3实验步骤:

1）称取样品2.00g（±0.02g）→加标100ul（10ng/ml）→加10ml乙酸钠→加200ulβ-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酸酯酶→涡旋→超声15min→37℃恒温孵育16小时→离心（6000r/min、5min）→上清液倒入离心管A中→下层残渣再加入10ml乙酸钠重复涡旋、超声、离心步骤，上清液合并入离心管A中→过滤上清液于另一离心管中→吸取10ml滤液过MCX固相萃取柱

2）过柱子顺序：

加甲醇1管→加蒸馏水1管→加0.03mol/L盐酸溶液1管→加10ml样夜→加蒸馏水1管→加甲醇1管→减压抽干→加5ml甲醇氨水（95+5）和5ml氨水乙酸乙酯（3+97）→减压收集于10ml离心管→转移入25ml蒸馏瓶中40℃水浴减压蒸干→加1ml乙腈水（10+90）定容后超声溶解→1ml针管吸取0.6-0.7ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。

3）要点与理解；

①每个加入标100ul（10ng/ml）的目的是看回收率，选取样品加标品100ul（10ng/ml）也是看回收率。

②加酶是为了更好地提取莱克多巴胺。

③乙酸钠调PH值至5.20时，提取效果最好，用冰乙酸调PH值，可避免引入其他杂质离子。

用10ml样液过柱子，1ml乙腈水定容为了和质量相约分，直接出结果，减少换算麻烦。

④过柱子是用0.03mol/L盐酸溶液是提供一个酸性环境，使其更好地吸附克伦特罗。

⑤先加甲醇是为了活化萃取柱，最后再加甲醇是洗脱杂质。

甲醇氨水（95+5）和氨水乙酸乙酯（3+97）的作用是洗脱有效成分。

三瘦肉精反向萃取法（对于骨汤、肉馅等含油比较高的样品）

1试剂：

10%碳酸钠溶液（m/v）、乙酸乙酯，2%甲酸乙腈水、2%甲酸乙腈水饱和正己烷。

2器材：

电子天平、50ml离心管、移液枪（200ul、1ml、10ml）、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器（平行振荡器）、50ml蒸馏瓶、1ml针管、0.22um有机滤膜。

3实验步骤：

称取样品2.00g（±0.02g）→加标100ul（10ng/ml）→加2ml10%碳酸钠溶液→涡旋→加8ml乙酸乙酯涡旋震荡2min→超声提取10min→离心（6000r/min、5min）→吸取上清液于50ml蒸馏瓶中→下层残渣再加入6ml乙酸乙酯提取一次，合并上清液于50ml蒸馏瓶中→40℃水浴减压蒸干→加2%甲酸乙腈水饱和正己烷（肉馅加5ml,骨汤、香精加10ml）,和2ml2%的甲酸乙腈水→超声溶解→转移入50ml离心管中→离心（6000r/min、5min）→1ml针管吸取下层溶液约1ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。

4要点与理解：

1）加碳酸钠溶液是提供一个碱性环境，便于乙酸乙酯提取。

每个加入标100ul（10ng/ml）的目的是看回收率，选取样品加标品100ul（10ng/ml）也是看回收率。

2）用饱和正己烷，是为了除去油性杂质。

用2%甲酸乙腈水去饱和正己烷是为了和定容试剂保持一致，避免引入其他杂质离子。

定容试剂中加入2%甲酸是为了提供一个酸性环境，便于提取克伦特罗，同时和上机流动相保持一致。

3）对于复检样品，超声提取时间可以适当延长。

4）此方法还可以把两次提取液合并于离心管中，分两次加5ml盐酸溶液（0.1mol/L）涡旋离心提取两次，吸出盐酸层，合并盐酸提取液，用100g/L氢氧化钠调节PH值至5.20，过MCX固相萃取柱，然后减压蒸干定容的方法。

β-受体激动剂的检测

根据国标GB/T22286-2008不加酶法

样品：

猪肝

编号：

-1，-2，-1，-1，+1，+2

一、前处理：

①取六个50mL离心管,依次按顺序编上号，分别称取样品2g（±0.02g）,

②分别加入标100μL（10ng/mL）,根据编号加100μL外标（10ng/mL）然后分别加8mL无水乙酸钠（PH=5.2）,混匀充分提取，涡旋10min，离心（6000r,10min）,

③取上清液4mL于离心管A中，加5mL0.1mol/L的高氯酸溶液涡旋混匀，用高氯酸调到PH=1（±0.2大概加用1mL针管加12滴左右），混匀，离心（6000r,10min），上清液转移到离心管B中，用400g/L（10mol/L）的氢氧化钠溶液调到PH=11（±0.2）.

④加入10mL饱和氯化钠和10mL异丙醇-乙酸乙酯（6+4），充分提取涡旋15min,离心（6000r,10min），上清液转移入离心管C中，40℃水浴氮吹至干，加入10mL无水乙酸钠溶液，涡旋超声溶解，备用。

二、过MCX柱子顺序

甲醇1管→水1管→2%甲酸水1管→样液10mL→水1管→2%甲酸水1管→甲醇1管→加压抽干

用5mL5%氨水甲醇溶液洗脱柱子，洗脱液转移到25mL蒸馏瓶中，可在收集管中加入1mL5%氨水甲醇溶沿管壁缓缓冲洗加入，该液也转移到对应蒸馏瓶中。

注意：

过柱子时为不完全通液，过样和洗脱时应控制流速大概2-3秒1滴，洗脱时最好先用洗脱液浸润30s到1min.

三、蒸干浓缩定容

在旋转蒸发仪上40℃水浴蒸干，冷凝水10℃以下，在蒸馏瓶中加入1mL2%甲酸乙腈水，超声溶解1-2min,尽可能最大的把侧壁也超声一下，用1mL针管吸取过0.22μm有机滤膜于进样小瓶中，待上机检测。

第二部分硝基呋喃代物的检测

1试剂：

0.125mol/L盐酸溶液（量取10.6ml盐酸，定容至1000mL。

混匀。

）、0.1mol/L盐酸溶液、0.5mol/L磷酸氢二钾缓冲溶液、100g/L氢氧化钠溶液、甲醇、甲醇水（5+95）、乙腈水（10+90）、乙酸乙酯、水饱和正己烷，0.2mol/LTris试剂（称取14.228g三羟基氨基甲烷溶于1000mL水中）、衍生试剂（0.01g邻硝基苯甲醛溶于1.25ml二甲基亚砜）。

.

2器材：

电子天平、50ml离心管、10ml离心管、移液枪（200ul、1ml、10ml）、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器（平行振荡器）、50ml蒸馏瓶、25ml蒸馏瓶、Strata-X固相萃取柱、固相萃取装置、1ml针管、0.22um有机滤膜。

3实验步骤：

1）称取样品2.00g（±0.02g）→加20ml0.125mol/L盐酸→加200ul衍生试剂→涡旋→超声10min→37℃恒温避光衍生16小时。

2）取出反应后样品冷却至室温，加1ml0.5mol/L磷酸氢二钾缓冲溶液,用100g/L氢氧化钠调节PH值到7.0-7.5之间→加8ml乙酸乙酯涡旋震荡2min→离心（6000r/min、5min）→吸取上清液于50ml蒸馏瓶中→下层再加入6ml乙酸乙酯提取一次，合并上清液于50ml蒸馏瓶中→40℃水浴减压蒸干→加5ml水饱和正己烷和5mlTris试剂→超声溶解→转移入50ml离心管A中→再向蒸馏瓶中加5mlTris试剂→超声溶解→合并入50ml离心管A中→离心（6000r/min、5min）→取下层溶液于离心管B中过Strata-X固相萃取柱。

3）过柱子顺序：

加甲醇1管→加蒸馏水1管→加完全部样夜→加甲醇水1管→减压抽干→加1管半甲醇减压收集于10ml离心管中→移入25ml蒸馏瓶中→40℃水浴减压蒸干→加1ml乙腈水（10+90）定容后超声溶解→1ml针管吸取0.6-0.7ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。

4要点与理解：

1）衍生试剂现配现用。

2）加1ml0.5mol/L磷酸氢二钾缓冲溶液,是为了方便调PH值。

用100g/L氢氧化钠调节PH值到7.0-7.5之间，是为了提供一个碱性环境，有利于乙酸乙酯的提取。

2）用水饱和正己烷是出去油性杂质。

3）收集时，用甲醇洗脱有效成分。

4）空白加标是为了在上机检测时建立标准曲线。

5）呋喃四种混标（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因）100ng/mL加100ul。

第三部分沙星、磺胺类抗生素的检测

1试剂：

无水硫酸钠、乙腈、乙腈饱和正己烷、正丙醇、乙腈水（10+90）、乙腈水饱和正己烷。

2器材：

电子天平、50ml离心管、移液枪（200ul、1ml、10ml）、均质器、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器（平行振荡器）、50ml蒸馏瓶、1ml针管、0.22um有机滤膜。

3实验步骤：

称取样品2.00g（±0.02g）→加3g无水硫酸钠→加9ml乙腈用玻璃棒搅匀或用均质器均质→涡旋→离心（4000r/min、2min）→上清液转入另一离心管A中→下层再加入9ml乙腈如有结块用璃棒搅匀或用均质器均质→涡旋→离心（6000r/min、5min）上清液并入离心管A中。

在离心管A中加入5ml乙腈饱和正己烷→涡旋→离心（6000r/min、5min）→下层溶液转入50ml蒸馏瓶中→加2ml正丙醇→40℃水浴减压蒸干→蒸馏瓶中再加入5ml乙腈水饱和正己烷和2ml乙腈水（10+90）→超声溶解转入离心管B中→离心（6000r/min、5min）→1ml针管吸取下层溶液约1ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。

4要点与理解

1）样品加入无水硫酸钠，是为了除去样品中多余的水分。

样品加入无水硫酸钠后，样品易结块不利于提取，要用玻璃棒捣碎或用均质器均质。

第一次离心可以降低转度、缩短离心时间，减轻样品结块程度。

2）加乙腈饱和正己烷和乙腈水饱和正己烷的目的是为了除去油性杂质。

3）加正丙醇的目的是防止溶液暴沸。

4）标品需要加沙星类混标（4种混标1ug/ml加20ul），磺胺类混标（24种混标1ug/ml加50ul）。

第四部分氯霉素的检测

1试剂：

无水硫酸钠、氨水乙酸乙酯（3+97）、超纯水、水饱和正己烷。

2器材：

电子天平、50ml离心管、移液枪（200ul、1ml、10ml）、均质器、冷冻离心机、超声波清洗器、氮吹仪、迷你震荡器（平行振荡器）、1ml针管、0.22um有机滤膜。

3实验步骤：

称取样品2.00g（±0.02g）→加3g无水硫酸钠→加10ml氨水乙酸乙酯（3+97）用均质器均质→涡旋→离心（4000r/min、2min）→上清液转入另一离心管A中→下层用10ml氨水乙酸乙酯（3+97）→涡旋→超声10min→离心（6000r/min、5min）→上清液并入离心管A中→经氮吹仪吹干→加5ml水饱和正己烷和2ml超纯水→涡旋→超声5min→离心（6000r/min、5min）→1ml针管吸取下层溶液约1ml用0.22um有机滤膜过滤→上机

4要点与理解：

1）氯霉素容易被污染，处理样品时不要徒手操作，要带上手套。

不用洗洁精洗刷容器。

离心管专用。

2）样品加入无水硫酸钠，是为了除去样品中多余的水分。

3）第一次离心可以降低转度、缩短离心时间，减轻样品结块程度。

在第二次提取时可以延长超声时间使结块松动利于提取。

4）均质器均质以后，需要用另一个离心管装10ml氨水乙酸乙酯（3+97）来清洗均质器。

清洗后的洗液供二次提取用。

再用蒸馏水来清洗均质器两次，避免样品间的交叉污染。

5）需要做空白样品来检验检测过程是否被污染。

选择样品加标（10ng/L加100ul）,来检测回收率。

6）用超纯水定容，是为了和上机流动相保持一致。

第五部分：

四环素的检测

1试剂：

甲醇、甲醇水（5+95）、乙腈水（10+90）、乙酸乙酯、水饱和正己烷、乙腈水（10+90）、OTC萃取剂（柠檬酸12.93g、磷酸氢二钠27.55g、乙二胺四乙酸二钠37.23g三种试剂混合溶于水，定容至1L）

2器材：

电子天平、50ml离心管、10ml离心管、移液枪（200ul、1ml、10ml）、冷冻离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、迷你震荡器（平行振荡器）、25ml蒸馏瓶、Strata-X固相萃取柱、固相萃取装置、1ml针管、0.22um有机滤膜。

3实验步骤：

1）称取样品2.00g（±0.02g）→加10mlOTC萃取剂→涡旋→离心（6000r/min、5min）→上清液转入另一离心管A中→下层再加入10mlOTC萃取剂→涡旋→离心（6000r/min、5min）上清液并入离心管A中。

2）在离心管A中加入5ml水饱和正己烷→涡旋→离心（6000r/min、5min）去下层10ml过Strata-X固相萃取柱。

3）过柱子顺序：

加甲醇1管→加蒸馏水1管→加完全部样夜→加甲醇水1管→减压抽干→加2管乙酸乙酯减压收集于10ml离心管中→移入25ml蒸馏瓶中→40℃水浴以下减压蒸干→加1ml乙腈水（10+90）定容后超声溶解→1ml针管吸取0.6-0.7ml用0.22um有机滤膜过滤→上机。

4要点与理解：

1）40℃水浴以下减压蒸干，防止对四环素的破坏。

2）乙酸乙酯洗脱有效成分。

3）标品1ug/ml加100ul（包括土霉素、金霉素、四环素、强力霉素）。

经过实习我充分认识到了自己的不足，而且做实验动手能力更是有待加强，以后做实验要认真仔细，善于发现问题和思考问题及总结，使自己的检验水平更上一层楼，也感老师对我的培养。