毕业论文铅与VC混用对蛋仔鸡肾脏脂质抗氧化酶的影响.docx

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毕业论文铅与VC混用对蛋仔鸡肾脏脂质抗氧化酶的影响

目录

摘要....................................................................2

前言....................................................................3

1.试验材料及方法.......................................................4

1.1材料..................................................................4

1.1.1实验动物.......................................................4

1.1.2试剂与设备......................................................4

1.2饲料营养成分........................................................4

1.2.1蛋仔鸡饲养标准.................................................4

1.2.2蛋仔鸡饲料各主要营养成分........................................4

1.3方法................................................................5

1.3.1鸡的饲喂方法....................................................5

1.3.2分组方法........................................................5

1.3.3指标测定........................................................5

1.3.4资料统计方法........................................................6

2.结果与分析...........................................................6

2.1铅与Vc对蛋仔鸡肾脏中POD的影响....................................6

2.2铅与Vc对蛋仔鸡肾脏中SOD的影响....................................7

2.3铅与Vc对蛋仔鸡肾脏中SOD的影响....................................9

2.4铅与Vc对蛋仔鸡肾脏中CAT的影响...................................10

3.讨论与小结...........................................................11

3.1关于Pb与Vc对蛋仔鸡肾脏中POD的影响...............................11

3.2关于Pb与Vc对蛋仔鸡肾脏中SOD的影响.................................11

3.3关于Pb与Vc对蛋仔鸡肾脏中MDA的影响.................................12

3.4关于Pb与Vc对蛋仔鸡肾脏中CAT的影响................................12

参考文献.................................................................13致谢........................................................................13

铅与VC混用对蛋仔鸡肾脏脂质抗氧化酶的影响

毕业生:

陈健指导老师:

孙超

（西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100）

摘要：

目的研究铅与Vc对蛋仔鸡肾脏组织抗氧化系统的影响及Vc在铅诱导的氧化反应中的保护作用。

方法：

实验动物为120只出生蛋仔鸡（3日龄），随机分为空白对照组、Vc对照组、四个不同浓度铅组及四个对应Vc+铅组.采用口腔注射法注射Pb,研究了不同浓度Pb对蛋仔鸡肾脏组织抗氧化酶SOD（超氧化物歧化酶）、POD（过氧化物酶）、CAT（过氧化氢酶）活性及MDA（丙二醛）含量的变化。

结果随着Pb含量的增加,能引起仔鸡肾脏脂质过氧化损伤,POD、SOD及CAT活性下降（P<0.05）,而MDA含量则显著上升（P<0.05）.而维生素C能显著增强因Pb中毒导致活性下降的SOD、POD和CAT的活性（P<0.05）,抑制MDA生成量（P<0.05）,可通过改变抗氧化酶类而部分地减轻Pb的毒性,起到解毒的作用。

关键词:

铅，Vc，蛋仔鸡，脂质过氧化

Abstract:

Purpose:

Researchtheinfluenceonegg-chickenkidneytissueanti-oxidationsystemandtheprotectionaboutvitaminCinoxidationreactionbyleadcaused.Measure:

The120experimentalanimalsare3degg-chicken.Theyarerandomdividedtengroups:

Blankcomparisongroup,Vccomparisongroup,fourdifferentconsistencylead-containedgroupandfourdifferentcorresponding-leadvitaminCgroup.Injectleadbynonnasality-injectionmethodandresearchtheinfluenceaboutSOD、POD、CATandMDA’sactivitybydifferentconsistencyoflead.Theresultsuggeststhat,withtheincreasingcontentoflead,itbringslipidperoxidizationonegg-chickenkidney,theactivitydescendaboutPOD、SODandCAT,theriseofMDAcontentobservably.Bycontraries,vitaminCcouldincreasetheactivityofPOD,SODandCAT,restraintheproductionofMDA,alleviatetoxicityoflead,accordingtochangeanti-oxidationenzymeandplayaroleindetoxifying.

Keywords:

leadVcegg-chickenanti-oxidationenzyme

前言

家禽养殖是农业尤其是畜牧业的重要组成部分,其经济利益直接关系到我国畜牧业的健康发展.随着近几年生活水平的不断提高,人们对鸡,鸭,鹅等禽肉及相关畜产品的需求也呈逐年上升趋势.如何提高家禽饲养水平便成了一个迫切解决的问题。

据有关调查和实验研究表明,环境污染物对家禽的生存健康造成很大威胁,其中,重金属元素对禽类生理和生化方面的影响很值得深入研究。

随着工业的发展，环境中的重金属特别是铅的含量越来越高,其毒性已经引起人们的普遍重视.数年来,国内外学者已就铅,镉等重金属对哺乳动物的机体结构和生理生化等方面的影响作了较多研究.结果表明,活性氧是造成机体损伤的一种重要形式.而堪称”活性清道夫”的抗氧化酶活性或含量可因重金属中毒而发生失活.如铅抑制D2氨基乙酰丙酸脱氢酶活性,使D2氨基乙酰丙酸（ALA）积累;在体内,ALA的自氧化形成氧自由基并诱发细胞损伤。

铅诱导的氧化应激很可能在引起各种器官的组织损害中起重要作用。

另一方面铅引起的对其他金属离子（如超氧物歧化酶（SOD）中的铜和锌,过氧化氢酶（CAT）中的血红素铁及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH2Px）中的硒的拮抗作用,又可抑制抗氧化剂系统,加强铅诱导的脂质过氧化。

因此,铅中毒可出现氧化应激增强,并可影响抗氧化剂系统。

.

维生素C是一脂溶性抗氧化剂,具有防治坏血病的功能,故又名抗坏血酸通过清除自由基和阻止脂质双层的氧化性损伤而维持膜的完整性。

作为一种强的还原剂.它的生物化学和生理功能是由它的还原性质----作为一种电子载体所驱动的,由于同氧或金属离子相互反应脱氢成为半脱氢-L-抗坏血酸,一种活性自由基,可被动物中的酶还原成L-抗坏血酸,可保持巯基酶的活性,使之维持还原态而发挥作用,还原性酶可使脂质过氧化物还原,从而消除其对细胞的破坏作用.因而,在给动物服用铅之前先给以Vc,使动物耐受氧化性侵袭。

本实验旨在研究一系列不同浓度铅对蛋仔鸡肾脏抗氧化酶系统的影响，是否引起脂质过氧化以及维生素C对铅的解毒作用。

这将对在当前重金属污染了的环境中，如何使仔鸡快速健康成长具有一定的参考价值。

1.材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物

健康3日龄蛋仔鸡（免疫过）120只,平均体重48.6g,购与西北农林科技大学种鸡场,饲料由西北农林科技大学饲料厂提供.

1.1.2试剂与设备

醋酸铅,维生素C、双氧水、磷酸缓冲液、硫代巴比妥酸（TBA）、甲硫氨酸（Met）溶液、氮蓝四唑溶液（NBT）、核黄素溶液等；721分光光度计、冰箱、恒温水浴锅、微量加样器、具塞试管、低温高速离心机、研钵、紫外分光光度计.100W灯泡,雏鸡饮水器,雏鸡自动饲料喂食器各10只.

1.2饲料营养成分

1.2.1蛋仔鸡饲养标准

蛋仔鸡饲养标准如下:

表1.蛋仔鸡饲养标准

Table1.Eggchickenbreedingstandard

项目所占百分比能量

粗蛋白21.0－

蛋白能量比（/）17.208－

钙0.9-1.1－

总磷0.65-0.75－

食盐1.37－

蛋氨酸0.45－

蛋氨酸+胱氨酸0.84－

赖氨酸1.09－

色氨酸0.21－

代谢能（MJ/Kg）－12.134

1.2.2蛋仔鸡饲料各主要营养成分

蛋仔鸡所用饲料各主要营养成分见表2:

表2.饲料营养成分分析

Table2.Theanalysisofanimalfeednutritioncomposition

项目所占百分比能量

粗灰分8.34%－

钙1.51%－

磷0.61%－

粗纤维1.49%－

粗脂肪4.14%－

粗蛋白18.95%－

干物质89.90%－

无氮浸出物56.98%－

能量（ka/g）－4923.8

1.3方法

1.3.1鸡的饲喂方法:

将每组经免疫过的12只健康3日龄蛋仔鸡采取自由采食的方法进行饲喂.使用小针管每天每次0.2ml的灌服量进行配药灌服。

1.3.2分组方法:

将120只蛋仔鸡随机分成10组,每组12只,.分别置于10个纸笼里饲养,每个纸笼配有灯泡,饮水器,饲料采食器各一个.具体分组及灌服方法如下:

普通对照组：

进行常规饲喂.

Vc对照组：

用量为0.2mg/g，

Pb

（1）组：

用量为0.02mg/g,

Pb

（2）组：

用量为0.05mg/g,

Pb（3）组：

用量为0.08mg/g,

Pb（4）组：

用量为0.11mg/g,

Vc+Pb

（1）组：

Vc用量为0.2mg/g，铅用量为0.02mg/g，

Vc+Pb

（2）组：

Vc用量为0.2mg/g，铅用量为0.05mg/g，

Vc+Pb（3）组：

Vc用量为0.2mg/g，铅用量为0.08mg/g，

Vc+Pb（4）组：

Vc用量为0.2mg/g，铅用量为0.11mg/g，

以上方法饲喂10天,进行屠宰取样.

1.3.3指标测定:

本实验需测出每只鸡所取肾脏样本重量,过氧化物酶（POD）,过氧化氢酶（CAT）,超氧化物歧化酶（SOD）以及丙二醛（MDA）各个酶的活性.其中,CAT用紫外吸收法测定;SOD的测定可通过催化氧自由基的歧化产生过氧化氢,后者被CAT转化成水和分子氧;MDA可在高温及酸性条件下与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应,生成产物在532nm有吸收峰,根据其在532nm处的吸光系数可以计算MDA含量;而POD则能与愈创木酚作用生成红棕色的4-邻甲氨基苯酚,在470nm处有吸收峰,从而间接测定POD活性.

1.3.4:

资料统计方法:

实验资料用统计学方法进行处理,所得结果均为平均数+标准误差.

2结果与分析

2.1铅与Vc对蛋仔鸡肾脏中POD的影响

通过比色法对10组蛋仔鸡肾脏POD的结果见表3和图1:

表3.不同组POD活性的变化（

）

Table3.ThevarietyofactivityofdifferentPOD（

）

项目POD活性（μg·gFW-1）

普通对照组1.163±0.039

Vc对照组1.193±0.056

Pb1组0.916±0.036

Pb2组0.849±0.024*

Pb3组0.599±0.017**

Pb4组0.500±0.012**

Vc+Pb1组1.052±0.038

Vc+Pb2组1.142±0.057b

Vc+Pb3组0.653±0.021**

Vc+Pb4组0.515±0.017**

注：

“**”表示与普通对照组比较,P<0.01（差异极显著）“*”表示与普通对照组比较,P<0．05（差异显著）；a表示Vc与普通对照组比较，0.01

（下同）

图1不同组POD活性的变化

Chart1.ThevarietyofactivityofdifferentPOD

由表3和图1表明,仔鸡肾脏Vc对照组POD酶活性比普通对照组略有升高;Pb1组（醋酸铅含量0.02mg/g）,Pb2组（醋酸铅含量0.05mg/g）的POD活性在与普通对照组比较稍有下降,但与对照组无显著性差异（P>0.05）;随着Pb含量的增加,Pb3组（醋酸铅含量为0.08mg/g）时,SOD活性明显下降,Pb4组（用量为0.08mg/g）POD活性更小,说明在醋酸铅用量>0.05mg/g时,仔鸡肾脏POD受到的影响较大.而在Vc+Pb组中,除Vc+Pb1组,和Pb1组,Vc+Pb2组和Pb2组POD活性差异不大外,其余两组相对于不加Vc的两组POD活性均有显著升高,但都低于普通对照组的正常水平,说明Vc对于铅具有一定的解毒作用.

2.2铅与Vc对蛋仔鸡肾脏中SOD的影响

通过比色法对10组蛋仔鸡肾脏SOD的结果见表4和图2

表4.不同组SOD活性的变化（

）

Table4.ThevarietyofactivityofdifferentSOD（

）

项目SOD活性（μg·gFW-1•h-1）

普通对照组5472.491±351.487

Vc对照组5729.558±324.514

Pb1组4959.119±316.674

Pb2组4727.693±298.698

Pb3组3479.783±247.261**

Pb4组2871.846±157.268**

Vc+Pb1组4676.411±304.629*b

Vc+Pb2组4680.556±310.577*

Vc+Pb3组3626.853±269.963**

Vc+Pb4组3313.412±224.867**b

图2.不同组SOD活性的变化

Chart2.ThevarietyofactivityofdifferentSOD

由表4和图2表明,仔鸡肾脏Vc对照组SOD酶活性比普通对照组略有升高;Pb1组（醋酸铅含量0.02mg/g）,Pb2组（醋酸铅含量0.05mg/g）的SOD活性在与普通对照组比较稍有下降,但与对照组无显著性差异（P>0.05）;随着Pb含量的增加,Pb3组（醋酸铅含量为0.08mg/g）时,SOD活性明显下降,Pb4组（用量为0.08mg/g）SOD活性更小,说明在醋酸铅用量>0.05mg/g时,仔鸡肾脏SOD受到的影响较大.而在Vc+Pb组中,除Vc+Pb1组,和Pb1组,Vc+Pb2组和Pb2组SOD活性差异不大外,其余两组相对于不加Vc的两组SOD活性均有显著升高,但都低于普通对照组的正常水平,说明Vc对于铅具有一定的解毒作用.

2.3铅与Vc对蛋仔鸡肾脏中MDA的影响

通过比色法对10组蛋仔鸡肾脏MDA的结果见表5和图3。

表5.不同组MDA含量的变化（

）

Table5.ThevarietyofcontentofdifferentMDA（

）

项目MDA含量（mmol•gFW-1）

普通对照组2.361±0.347

Vc对照组2.134±0.213

Pb1组2.820±0.397*

Pb2组2.292±0.458

Pb3组3.042±0.471*

Pb4组4.748±0.612**

Vc+Pb1组2.322±0.389

Vc+Pb2组2.481±0.402

Vc+Pb3组2.569±0.403

Vc+Pb4组3.332±0.451**b

图3.不同组MDA含量的变化

Chart3.ThevarietyofcontentofdifferentMDA

由表5和图3表明,Vc对照组MDA含量比普通对照组明显上升;Pb1~3组MDA含量在与普通对照组比较稍有提高,但与对照组无显著性差异（P>0.05）;Pb4组（醋酸铅含量为0.11mg/g）时,MDA含量明显升高,说明在醋酸铅用量>0.08mg/g时,仔鸡肾脏MDA含量受到的影响较大.而Vc+Pb组中相对于不加Vc的MDA含量均有显著降低,但都高于普通对照组的正常水平,说明Vc对于铅具有一定的解毒作用.

2.4铅与Vc对蛋仔鸡肾脏中CAT的影响

通过比色法对10组蛋仔鸡肾脏CAT的结果见表6和图4

表6.不同组CAT活性的变化（

）

Table6.ThevarietyofactivityofdifferentCAT（

）

项目CAT活性（μ•gFW-1•min-1）

普通对照组749.286±25.158

Vc对照组763.934±29.346

Pb1组683.119±21.684*

Pb2组621.004±19.329*

Pb3组554.921±14.473**

Pb4组541.438±13.567**

Vc+Pb1组733.441±27.491

Vc+Pb2组706.013±24.763b

Vc+Pb3组620.888±19.684*

Vc+Pb4组583.218±17.459**

图4.不同组CAT活性的变化

Chart4.Thevarietyofactiv