OKY046英文译文2.docx
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OKY046英文译文2
OKY-046对由致痉剂诱导的致敏和非致敏豚鼠气管收缩反应的
抑制效果
摘要：
本实验对奥扎格雷对由不同致痉剂诱导的致敏与非致敏豚鼠离体肺及气管收缩反应的抑制活性进行了研究，结果显示，奥扎格雷对组胺、前列腺素D2（PGD2）、和STA2（TXA2的稳定模拟剂）诱导的离体气管和肺实质标本收缩均无影响，同时，尽管奥扎格雷在离体气管中，对由白三烯肽（LTS）和血小板活化因子（PAF）诱导的收缩反应无影响，但在离体肺中对由这两种收缩剂（LTS和PAF）诱导的收缩反应，奥扎格雷却呈现出显著的量效关系抑制作用，这提示在致敏豚鼠的过敏性气管收缩反应中有TXA2的参与。
免疫刺激反应能够引起肺内二十碳酸化合物释放已有报道（1，2），在此二十碳酸化合物中，由血小板、单核细胞、肺组织细胞及其他细胞产生的TXA2被认为是引起刺激性呼吸道疾病（如哮喘）的重要调节物之一（3—7），因为它能有效促进肺内气管和血管中血小板的聚积（4，8）。
但是由于TXA2在血液中的半衰期较短，故对其在生物体内对呼吸道活动的影响很难评估（9）。
在本试验中，我们主要研究豚鼠使用奥扎格雷（一种有效的特异性TXA2合成酶抑制剂）后（10），在过敏性气管收缩反应中TXA2的情况。
此外，还研究了在生物体内外，奥扎格雷对不同致痉剂（如组胺，LTS，PAF）所引起的气管收缩反应的抑制情况。
试验准备与试验方法
试验动物：
雄性哈特利（Hartley）豚鼠，250-500g。
药品：
奥扎格雷钠盐或奥扎格雷盐酸盐，LTD4、LTC4、LTE4、PGD2、STA2（类似TXA2片）、PAF。
给药方法：
体内试验：
奥扎格雷和消炎痛分别溶于生理盐水和7%的碳酸氢钠，分别在抗原或其他致痉剂发生作用前2分钟静脉内给药。
体外试验：
奥扎格雷溶于生理盐水，在各种收缩因子发生反应前20分钟加入器官培养槽中。
体内试验：
致敏过程：
试验动物腹膜注入1mg的OVA（相当于5×109的灭活百日咳杆菌）0.5ml，静注OVA后15～17天动物出现致敏反应。
在4小时和第8天出现相似的皮肤过敏反应，此时的过敏反应被认为是由于致敏过程中抗体IgG的产生所致（11）。
气管收缩反应的测定：
将气管插管插入用戊巴比妥麻醉动物的气管中，绑扎固定，另取两个插管分别插入颈动脉和颈静脉中，分别用来监控血压、血管给药及抗原测定。
气管插管固定在一个恒定体积的呼吸器上，给以动物人工体外呼吸，呼吸器体积固定在5ml，呼吸频率为70次/分。
在气流恒定的情况下，通过固定在气管插管上的压力转换器测定注气压力变化，这个压力变化以最大压力增加百分率来表示。
抗原和致痉剂对气管收缩的影响：
在实验初期，单纯注入OVA（0.2mg/kg）诱导产生最大气管收缩量的70%，在15分钟后监测到气管收缩出现。
LTC4（2.0μg/kg）、LTD4（2.0或5.0μg/kg）、LTE4（5.0μg/kg）、PAF（0.3μg/kg）和PGD2（100μg/kg）静脉内给药，并给予组胺（10μg/kg，i.v.）和STA2（3.0μg/kg，i.v.）数次，直至产生稳定的气道收缩反应。
体外实验：
离体豚鼠气管和肺实质标本的制备：
击动物头部致死，取出气管和肺。
将气管上的多余脂肪和结缔组织剪去，制备气管和肺实质标本。
每个标本都以0.5g张力悬挂在10ml器官培养液（KressHenselert溶液）中，该培养液需在37℃、PH值为7.4的条件下保存，并不断的充气（95%氧气～5%二氧化碳）。
测量此组织的收缩强度，用等渗传感器（NihonKohden，TD112S）测量气管的收缩强度，用拉力传感器（NihonKohden，TB611T）测量肺实质的收缩强度。
在每个组织平衡达到稳定0.5～1.0小时后开始实验，分别在氨甲酰胆碱（10-6M）和乙酰胆碱（10-5M）溶液中测定气管和肺实质的收缩反应情况。
对致痉剂诱导的收缩反应的影响：
当获得氨甲酰胆碱最大有效浓度（10-5M）和乙酰胆碱最大有效浓度（10-3M）之后，向器官培养液中加入收缩激动剂，如组胺、LTC4、LTD4、STA2和PGD2等，逐渐升高收缩激动剂浓度而得到他们的浓度—反应曲线。
由于PAF的快速致敏作用，他能使同类动物的所有标本在同一浓度致敏（12）。
对于两种不同组织的最小变化，用它们在氨甲酰胆碱（10-5M）和乙酰胆碱（10-3M）中的最大收缩百分率来表示。
统计分析：
采用T检验，显著性水平为P＜0.05。
结果：
体内试验：
对抗原诱导的气管收缩的抑制活性：
致敏豚鼠抗原的表达促使气管收缩迅速产生（在30秒内）和长时间持续（超过15分钟），其特征表现为注气气压的显著增加（4分钟最大增加量为77.3±4.8%），短暂的突发性血压升高（2分钟达34.4±8.4mmHg），随后血压轻微下降（15分钟血压为-6.3±2.2mmHg）。
在抗原诱导过敏反应发生后2～5分钟和1～3分钟时分别出现气管收缩和血压升高现象。
通过对奥扎格雷不同给药剂量的考查（测量范围1mg/kg～10mg/kg）显示奥扎格雷能够抑制抗原诱导的气管收缩及血压升高。
而消炎痛只在致敏发生后1分钟内表现出抑制气道反应的作用，且对产生的高血压现象也只是起到一个预防作用（见图1）。
血压变化（Δmmhg）
最大注气压力增加率（%）
图1奥扎格雷及消炎痛对抗原诱导致敏豚鼠气管收缩和血压变化的影响，每点表示每组数据的平均值，○－○：
控制组（N=10）；
●－●：
奥扎格雷组，1mg/kg，i.V.（N=7）；▲－▲：
奥扎格雷组，3mg/kg，i.V.（N=7）；■－■：
奥扎格雷组，10mg/kg，i.V.（N=7）；△－△：
消炎痛组，2mg/kg，i.V.（N=8）；***和***表示与控制组有显著差异，P值分别为P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001。
对各类致痉剂诱导反应的抑制作用：
当以30mg/kg静注给药时，奥扎格雷对组胺（10μg/kg，i.v.），PGD2（100μg/kg，i.v.）和STA2（3μg/kg，i.v.）诱导的气管收缩没有抑制作用（表1）。
表1奥扎格雷对由组胺、STA2和PGD2诱导的豚鼠气管收缩反应的影响
致痉剂
剂量
（μg/kg.i.v.）
N
注气压力增加率（%max）
P值
控制组
奥扎格雷组
组胺
10
5
63.8±4.3
66.1±3.9
＞0.1
STA2
3
5
60.5±3.1
60.9±2.3
＞0.1
PGD2
100
5
45.6±5.4
55.4±9.6
＞0.1
奥扎格雷在各种拮抗剂（30mg/kg）静注后2分钟静脉给药，每个值代表平均值=SEM，使用T检测进行检测，各组与控制组比较有显著差异。
静脉给予LTC4（2μg/kg），在30～60秒和3～4分钟时出现峰值，表示在这两个时间段分别出现两个阶段性气管收缩现象，并引起短暂性血压升高现象，给药2～4分钟后血压下降（见图2）。
在给予奥扎格雷0.1～1mg/kg时对初期气管收缩产生初步抑制作用，但对收缩后期无影响。
消炎痛也能抑制1分钟时的气道过敏反应，但他同时还能增强在3分钟和4分钟时LTC4的致敏效果。
奥扎格雷能够终止由LTC4所诱导的血管收缩反应，同时还起到抑制血管收缩的作用（见图3）。
奥扎格雷对LTD4（2μg/kg，i.v.）和LTE4（5μg/kg，i.v.）所诱导类似LTC4介导的气道反应产生相似的抑制作用。
使用消炎痛与不用消炎痛相比，应用消炎痛能终止LTD4（0.5μg/kg）诱导的气道反应，奥扎格雷（10mg/kg，i.v.）对用消炎痛后LTD4诱导的气道反应不能显示出抑制作用（见图4）。
图2静注LTC4（2μg/kg，i.V.）后注气压和血压随时间变化情况。
血压
注气压力力
图3奥扎格雷及消炎痛对由LTC4（2μg/kg，i.V.）诱导的豚鼠气管收缩反应和血压变化的影响，每点表示每组数据的平均值，●－●：
控制组（N=10）；○－○：
奥扎格雷组，0.1mg/kg，i.V.（N=7）；△－△：
奥扎格雷组，0.3mg/kg，i.V.（N=7）；□－□：
奥扎格雷组，1mg/kg，i.V.（N=7）；▲－▲：
2mg/kg，i.V.（N=3）；***和***表示与控制组有显著差异，P值分别为P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001。
血压变化（Δmmhg）
最大注气压力增加率（%）
图4应用消炎痛（2mg/kg，i.V.，○－○，N=3）及不用消炎痛（●－●，N=3）时，LTD4对注气压和血压的影响，奥扎格雷（△－△，10mg/kg，i.V.，N=3）在应用消炎痛治疗的豚鼠中的作用效果，每点表示每组数据的平均值，**和***表示与非治疗组有显著差异，P值分别为P＜0.01和P＜0.001。
血压变化（Δmmhg）
最大注气压力增加率（%）
静脉给予PAF迅速引起短暂性气管收缩反应（30秒内），伴随注气压力的增加（61.9±7.9%），存在血压的持续下降（3～10分钟）。
在1～10mg/kg范围给药时，奥扎格雷对减缓气管收缩和高血压反应存在量效关系。
消炎痛也有抑制气管痉挛和高血压时PAF活性的作用（见图5）。
图5奥扎格雷（A）及消炎痛（B）对PAF（0.3μg/kg，i.V.）诱导的豚鼠气管收缩反应和血压反应的影响，每点表示每组数据的平均值，A：
●－●，控制组（N=5）；○－○，奥扎格雷组，10mg/kg，i.V.，（N=5）；B：
■－■，控制组（N=5）；▲－▲，消炎痛组，2mg/kg，i.V.，（N=5）；***和***表示与控制组有显著差异，P值分别为P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001。
血压变化（Δmmhg）
最大注气压力增加率（%）
体外试验：
奥扎格雷（10-4M）对由组胺、PGD2、STA2、LTC4和LTD4诱导的离体气管收缩反应没有任何抑制作用（见表2）。
奥扎格雷（10-4M）对由组胺、PGD2、STA2诱导的肺收缩反应也无抑制作用。
而当奥扎格雷的浓度为10-5M～10-4M时，对LTD4诱导的肺收缩反应具有显著的抑制作用，并将其浓度—反应曲线转向右侧肺实质（见图6）。
消炎痛对LTD4诱导的肺收缩反应也具有显著的抑制作用（见图6）。
奥扎格雷和消炎痛都是以浓度依赖性的方式对PAF诱导的收缩反应发挥抑制作用（见图7）。
表2奥扎格雷对由各种致痉剂诱导的豚鼠离体肺及气管标本收缩反应的影响
致痉剂
致痉剂用量（M）
奥扎格雷用量（M）
奥扎格雷作用效果
气管标本
肺标本
组胺
10-8～10-3
10-4
无效果（5）
无效果（5）
STA2
10-10～10-6
10-4
无效果（5）
无效果（5）
PGD2
10-8～10-4
10-4
无效果（5）
无效果（5）
LTC4
10-10～10-6
10-4
无效果（5）
NDa
LTD4
10-10～10-6
3×10-5～10-4
无效果（5）
抑制b
括号内的数字表示使用的标本号，a代表没有使用，b代表见图6
最大注气压力增加率（%）
图6奥扎格雷和消炎痛对由LTD4诱导的豚鼠肺实质收缩反应的影响，每点表示平均值，括号内的数字表示用于实验的动物数量，***和***表示与控制组有显著差异，P值分别为P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001。
最大注气压力增加率（%）
图7奥扎格雷和消炎痛对由PAF诱导的豚鼠肺实质收缩反应的影响，每点表示4～7个标本的平均值，*和**表示与控制组有显著差异，P值分别为P＜0.05和P＜0.01。
结论：
本文研究了奥扎格雷对致敏豚鼠试验性支气管哮喘的影响。
研究表明奥扎格雷对抗原诱导的气管收缩具有量效关系抑制作用，而消炎痛没有。
因为各类致痉剂在过敏反应中起着重要作用，因此我们考查了奥扎格雷对致痉剂诱导的支气管收缩的影响。
体外试验中，奥扎格雷对由组胺、STA2和PGD2诱导的离体气管和肺实质收缩反应没有抑制作用。
试验结果暗示，由致痉剂诱导的呼吸组织收缩反应与TXA2活性无关，且奥扎格雷对致痉剂没有直接拮抗作用。
对LTD4诱导的离体肺实质收缩反应，奥扎格雷和消炎痛都起抑制作用。
Weichman的报道（13），显示LTS诱导的肺实质收缩可能与环氧化酶的代谢产物有关，有证据表明，当肺实质被LTS刺激时，有TXA2释放（13、14）。
此外，体外试验的研究结果还提示，在LTS诱导肺实质收缩反应过程中，TXA2是环氧化酶代谢物的激烈竞争物质。
尽管TXA2由血小板、单核细胞、肥大细胞及其他细胞产生，但肺实质中的TXA2的来源还不清楚。
另一方面，奥扎格雷对LTC4和LTD4诱导豚鼠气管收缩反应无影响，提示TXA2在LTS诱导的气管收缩反应中合成作用减弱。
尽管豚鼠气管组织能合成TXA2，但气管组织的环氧化酶的主要代谢产物是PGE2（15）。
Ally（16）等报道：
豚鼠肺实质合成大部分的TXA2，因此，奥扎格雷对气管和肺实质的不同作用主要取决于LTS在这两种组织中介导产生的TXA2量的不同。
抗原能够刺激致敏豚鼠肺中LTS的释放（17），同时LTS能引起机体内外呼吸组织的收缩（18—21）。
Andersson（22）报道说，LTS存在于由LT拮抗剂FPL55712引起的过敏性气管收缩。
在当前体内试验研究中，我们发现奥扎格雷能减缓由LTS引起的短暂性气管收缩及血压升高。
奥扎格雷不影响应用消炎痛治疗的由LTD4诱导的气管收缩，对LTD4诱导的肺实质收缩有抑制作用，但对气管组织的收缩无效。
这进一步说明LTS促进肺实质（14）及再灌注肺（23）中TXA2的释放。
奥扎格雷对LTS诱导的气管收缩反应的抑制作用，可能通过抑制呼吸道中TXA2的合成来实现。
最初消炎痛减缓气管收缩反应（与奥扎格雷相似）可能也是通过减少TXA2合成来实现。
PAF释放取决于豚鼠肺对抗原应答反应（24）。
Lagente证明（25）Ro19-3704（一种PAF拮抗剂）抑制过敏性气管收缩反应。
这提示PAF在抗原诱导的气管收缩反应中起着重要作用，我们确信PAF是一种有效的致痉剂（见图5）。
尽管奥扎格雷和消炎痛都能抑制由PAF诱导的气管收缩反应，但把它们的作用机制直接归就于对PAF的抑制作用是不确切的，因为它们不能抑制静注PAF所致的低血压作用。
PAF能诱血小板依赖性气管收缩（26），并刺激肺组织中TXA2的释放（27）。
另外，当豚鼠给药后，PAF还能促进豚鼠血小板聚积及血小板和白血球增高（25、28）。
因此，奥扎格雷和消炎痛在PAF诱导气管收缩反应中，对血小板聚集的抑制作用可能是通过抑制TXA2的合成来实现的。
奥扎格雷能减弱由LTS、PAF及抗原所诱导的高血压反应。
Katsure报道（29），STA2能导致气管收缩及高血压反应。
因此，由LTS、PAF和抗原诱导的血压变化主要取决于TXA2的作用。
组胺被认为是在豚鼠体内由抗原激发产生气管收缩反应的一种重要调节剂（30，31）。
奥扎格雷对外源性组胺诱导的收缩反应没有抑制效果。
因此，奥扎格雷的平喘作用不是以通过拮抗组胺活性的方法来实现的。
消炎痛在抗原激发致敏反应1分钟后，对抗原诱导的气管收缩反应不起任何作用（见图1）。
Krell（32）和Hitchock（33）的报导表明，消炎痛能加强豚鼠离体气管对LTS和抗原的收缩反应。
对于消炎痛对抗原诱导的气管收缩反应存在着几个假说：
（1）消炎痛能增强嗜碱细胞和气道组织中组胺的释放（34，35）。
（2）消炎痛抑制气管扩张剂PGS（如：
PGI2）的合成，和/或者同时抑制花生四烯酸向5-脂氧化酶的转化。
综上所述，我们能证实奥扎格雷抑制致敏豚鼠体内由抗原诱导的过敏性气管收缩。
奥扎格雷的抑制作用取决于在抗原—抗体反应中对TXA2合成的抑制作用，和/或同时存在对外周气管中LTS和PAF的间接抑制作用。
参考文献：
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