最低抑菌浓度MIC测定.docx
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最低抑菌浓度MIC测定
附件3.4
最低抑菌浓度（MIC）测定
1.菌悬液的制备
刮取18～20小时的培养物，在管壁上充分研磨后混悬于1ml缓冲液中，借助比浊仪，调菌悬液浓度至104/ml，于1小时用多点接种仪接种（放置室温应大于25℃）。
2.MIC测定
（1）抗菌药物储存液制备
⏹抗菌药物称量及配制：
根据各抗菌药物的纯度称取，以目前所用抗菌药物为例。
抗菌素
纯度
称量（mg）
加溶剂（ml）
储存液浓度（μg/ml）
四环素
100%
3.2
1
3200
大观霉素
63.4%
40.38
1
25600
头孢曲松
81.5%
2.45
1
2000
环丙沙星
84.4
3.8
1
3200
⏹分装与保存：
每管200μl，-70℃可保存一年。
（2）抗菌药物工作液制备
青霉素：
管号
原液
0
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
浓度（μg/ml）
3200
1600
800
400
200
100
50
25
12.5
6.25
3.12
1.56
0.78
取量（μl）
200
→
200
→
200→
200
→
200→
200→
200
→
200→
200
→
200
→
200→
200→
200
溶剂（μl）
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
四环素:
管号
原液
0
1
浓度（μg/ml）
3200
1600
800
取量（μl）
200
→
200
→
200
溶剂（μl）
200
200
200
大观霉素：
管号
0
7
6
5
4
3
2
1
浓度（μg/ml）
25600
12800
6400
3200
1600
800
400
200
取量（μl）
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
溶剂（μl）
200
200
200
200
200
200
200
200
头孢曲松:
管号
原液
0
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
浓度
（μg/ml）
2000
200
100
50
25
12.5
6.25
3.12
1.56
0.78
0.4
0.2
取量（μl）
40
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
溶剂（μl）
360
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
环丙沙星：
管号
原液
0
13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
浓度（ug/ml）
3200
1600
800
400
200
100
50
25
12.5
6.25
3.12
1.56
0.78
0.4
0.2
取量（μl）
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
→
200
溶剂（μl）
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
（3）抗菌药物梯度培养皿的制备
⏹培养皿编号：
按各抗菌药物浓度编号。
⏹将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中，与15ml50℃预温的培养基充分混匀，平放在超净台，半开培养皿盖至培养基凝固后，用塑料袋密封保存于4℃冰箱。
（4）菌悬液接种与培养
⏹多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理，其他配件用酒精消毒处理；使用前必须确认完全烘干。
⏹按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿，接种菌后置超净台直至菌悬液渗入。
⏹置35℃～36℃、5%～10%CO2一定湿度的环境中培养。
⏹记录放置时间。
⏹培养18～24小时观察结果。
（5）结果判读
⏹观察细菌生长情况：
-记录结果读取时间。
-在适宜的光线下，观察对照培养皿的菌落生长情况，并对所有菌株进行初步鉴定（涂片染色和氧化酶试验）。
-比较观察对照平皿和抗菌药物平皿，进行判读：
接种点有1个以上菌落或呈菌苔状为生长；接种点无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。
⏹MIC判读与记录：
-MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度，表示单位为μg/ml。
-记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况，在《WHO参考菌株及MIC实验结果记录表》用（+）表示生长，（-）表示无生长。
-每批实验结果必须由另外一名技术人员复读、签字，以确保结果的准确性。
⏹参考菌株的判读：
-本次测定的参考菌株MIC值在标准MIC值围或在标准MIC值±1个浓度围表明本次试验有效。
-本次测定的参考菌株MIC值超出上述围则表明本次试验无效，需重新配制抗菌药物平皿和测定。
3.β－酰胺酶测定
（1）纸片酸度定量法
⏹将一小片滤纸置于空平皿中：
⏹让滤纸吸足青霉素液（pH值8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液100ml+0.2g溴甲酚紫+5g无缓冲剂的结晶青霉素）：
⏹用接种环将10～20个菌落涂到滤纸上，涂膜直径约为5mm，35℃孵育30分钟：
⏹观察结果：
产生β－酰胺酶的淋球菌使滤纸颜色由紫变黄。
（2）产色头孢菌素法
将头孢硝噻吩纸片置于空平皿中，用接种环将菌落涂到纸片上，3分钟观察有无颜色变化，变红者为β－酰胺酶阳性。
附件3.5
WHO参考菌株及淋球菌临床分离株MIC实验结果记录表
记录时间：
实验人员：
核读人员：
①青霉素（P），②四环素（T）及β－酰胺酶：
平皿号
P1
P2
P3
P4
P5
P6
P7
P8
P9
P10
P11
T1
β－酰胺酶
浓度（μg/ml）
0.0078
0.0156
0.0312
0.0625
0.125
0.25
0.5
1
2
4
8
8
A
B
C
D
E
１
２
合计
③大观霉素（S）：
平皿号
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
浓度（μg/ml）
2
4
8
16
32
64
128
A
B
C
D
E
1
2
合计
④头孢曲松（CE）:
平皿号
CE1
CE2
CE3
CE4
CE5
CE6
CE7
CE8
CE9
CE10
浓度（μg/ml）
0.002
0.004
0.0078
0.0156
0.0312
0.0625
0.125
0.25
0.50
1
A
B
C
D
E
1
2
合计
⑤环丙沙星（CI）：
平皿号
CI1
CI2
CI3
CI4
CI5
CI6
CI7
CI8
CI9
CI10
CI11
CI12
CI13
浓度（μg/ml）
0.002
0.004
0.0078
0.0156
0.0312
0.0625
0.125
0.25
0.50
1
2
4
8
A
B
C
D
E
1
2
合计
附件3.6
淋球菌临床分离株对各监测药物MIC结果统计表
①青霉素：
浓度（μg/ml）
0.0078
0.0156
0.0312
0.0625
0.125
0.25
0.5
1
2
4
8
总数
菌株数
②四环素/β－酰胺酶:
浓度（μg/ml）
8
β－酰胺酶
总数
菌株数
③大观霉素：
浓度（μg/ml）
2
4
8
16
32
64
128
总数
菌株数
④头孢曲松:
浓度（μg/ml
0.002
0.004
0.0078
0.0156
0.0312
0.0625
0.125
0.25
0.50
1
总数
菌株数
⑤环丙沙星：
浓度（μg/ml）
0.002
0.004
0.0078
0.0156
0.0312
0.0625
0.125
0.25
0.50
1
2
4
8
总数
菌株数
附件3.7
抗菌药物敏感性的判断标准
敏感（S）
中敏（IS）
耐药（R）
四环素
≤0.5
≥1
≥16（TRNG）
大观霉素
≤64
≥128
头孢曲松
≤0.03
0.06-0.5
≥1
环丙沙星
≤0.03
0.06-0.5
≥1
附件3.8
淋球菌临床分离株对各监测药物敏感性结果统计表
β－酰胺酶
药敏情况
抗菌药物
菌数
＋
－
耐药
中敏
敏感
青霉素
大观霉素
环丙沙星
头孢曲松
TRNG
＋
－
四环素
附件3.9
参考菌株的MIC值
参考
菌株
青霉素
四环素
大观霉素
头孢曲松
环丙沙星
MIC
畴
MIC
畴
MIC
畴
MIC
畴
MIC
畴
WHOA
0．008
S
0.25
>128
R
≤0.0005
S
0.016
S
WHOB
0．06
LS
0.25
≤8
S
0.004
S
0.016
S
WHOC
0.5
LS
1
16
S
0.016
S
0.016
S
WHOD
1
R
4
16
S
0.016
S
0.03
S
WHOE
>2
PPNG
1
16
S
0.004
S
0.016
S
WHOF
0.016
S
≤8
≤64
S
≤0.03
S
0.016
S
WHOG
0.5
LS
32
TRNG
≤64
S
≤0.03
S
0.25
LS
WHOH
0.25
LS
≤8
≤64
S
≤0.03
S
2
R
WHOI
2
R
≤8
≤64
S
≤0.03
S
0.5
LS
WHOJ
>2
PPNG
≤8
≤64
S
≤0.03
S
8
HLR
WHOL
2
R
（CMRNG）
≤64
S
0.125
LS
16
HLR
WHOO
32
R
（PPNG）
>1024
R
0.016
S
0.03
S
WHOQ
1
R
（CMRNG）
≤64
S
≤0.03
S
1
R
●S=敏感LS=低敏R=耐药PPNG=产青霉素酶淋球菌
●TRNG=质粒介导的耐四环素淋球菌HLR=高度耐药
附件3.10
淋球菌质控菌株药物敏感性检测结果报告表
质控菌株号：
监测单位名称
实验人员：
实验日期（年/月/日）
质控菌株
敏感性畴
（μg/ml）
青霉素
敏感（S）/低敏（LS）
耐药（R）/PPNG
头孢曲松
敏感（S）
低敏（LS）
环丙沙星
敏感（S）/低敏（LS）
耐药（R）
大观霉素
敏感（S）/
耐药（R）
四环素
TRNG/
非TRNG
1．MIC值
敏感性畴
2.MIC值
敏感性畴
3．MIC值
敏感性畴
4.MIC值
敏感性畴
5．MIC值
敏感性畴
6.MIC值
敏感性畴
附件4
性病病例报告资料分析方案
一、数据来源
（一）性病监测点管理机构：
从中国疾病预防控制信息系统中的《疾病监测信息报告管理系统》、《中国疾病预防控制基本信息系统》选择本监测点报告的性病和人口等相关数据进行分析。
（二）省级性病监测点管理机构：
从中国疾病预防控制信息系统中的《疾病监测信息报告管理系统》、《中国疾病预防控制基本信息系统》分别下载本省国家级性病监测点报告的性病和人口等相关数据，汇总后进行相关指标分析。
二、指标计算
（一）发病率
1.性病总发病率
性病总发病率（/10万）=5种性病总报告病例数/当地平均人口数×10万。
当地平均人口数＝（年初人口数+年末人口数）/2
2.分病种发病率
分性病病种发病率（/10万）=某种性病报告病例数/当地平均人口数×10万
3.分性别发病率
男性性病发病率（/10万）＝男性性病报告病例数/当地男性平均人口数×10万
女性性病发病率（/10万）＝女性性病报告病例数/当地女性平均人口数×10万
4.分年龄别发病率
某年龄别发病率（/10万）＝某年龄别性病报告病例数/当地该年龄别平均人口数×10万
5.胎传梅毒发病率
胎传梅毒发病率（/10万）＝胎传梅毒报告病例数/当地活产数×10万。
（二）标化发病率
用于不同地区之间性病发病率比较，要求采用直接法进行标化，即以标准人口的年龄别人口数，或标准人口的年龄别构成进行计算。
标化发病率（/10万）＝被标化地区性病预期发病数/标准人口总数×10万。
被标化地区性病预期发病数＝∑（标准人口某年龄别人口数×被标化地区该年龄别发病率）
或
标化发病率（/10万）＝∑（被标化地区某年龄别按标准人口年龄构成的分配发病率）
被标化地区某年龄别按标准人口年龄构成的分配发病率（/10万）＝标准人口某年龄别构成比×被标化地区该年龄别发病率
（三）增长率
1.增长率
报告病例数的增长率（%）＝（本期性病报告病例数-上期性病报告病例数）/上期性病报告病例数×100%。
报告发病率的增长率（%）＝（本期性病报告发病率-上期性病报告发病率）/上期性病报告发病率×100%。
2.年平均增长率
年均增长率（%）＝
其中a1为年初的发病数或发病率，an为年末的发病数或发病率，（n-1）为开（n-1）方。
（四）构成比
1.年龄构成
某年龄组的构成比（%）＝某年龄组的性病报告病例数/各年龄组性病报告病例数总和×100%
2.病种构成
某性病的构成比（%）＝某性病的报告病例数/5种性病报告病例数总和×100%。
（五）性别比
性别比＝男性性病报告病例数︰女性性病报告病例数。
三、分析容
（一）时间分布
1.某季/年性病报告病例数与上年同期比较
季分析：
分析5种性病本年某季的报告病例数较上年同季的增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表1。
表1.某年某季性病病例数汇总及与上年同季比较
病种
本年某季
上年同季
病例数
增减
（％）
病例数
构成（%）
病例数
构成（%）
梅毒
一期
二期
三期
隐性
胎传
淋病
生殖道沙眼衣原体感染
尖锐湿疣
生殖器疱疹
合计
年分析：
分析5种性病本年的报告病例数、报告发病率较上年增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表2。
表2.本年性病病例数、发病率与上年同期比较
病种
本年
上年
病例数/发病率增减
（％）
病例数
构成（%）
发病率（1/10万）
病例数
构成（%）
发病率（1/10万）
梅毒
一期
二期
三期
隐性
胎传
淋病
生殖道沙眼衣原体感染
尖锐湿疣
生殖器疱疹
合计
2.本年某季性病报告病例数与本年上季相比
分析5种性病本年某季报告病例数较本年上季增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表3。
表3.某年某季性病病例数汇总及与本年上季比较
病种
本年某季
本年上季
病例数
增减
（％）
病例数
构成（%）
病例数
构成（%）
梅毒
一期
二期
三期
隐性
胎传
淋病
生殖道沙眼衣原体感染
尖锐湿疣
生殖器疱疹
合计
3.本年截止本期累计发病数与上年同期累计发病数比较
分析5种性病从本年1月1日截止本期的累计发病数与上年1月1日截止上年同期累计发病数的增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表4。
表4.本年截止本期累计发病数汇总及与上年同期比较
病种
本年初截止本期的累计
上年初截止上年同期累计
病例数
增减（％）
病例数
构成（%）
病例数
构成（%）
梅毒
一期
二期
三期
隐性
胎传
淋病
生殖道沙眼衣原体感染
尖锐湿疣
生殖器疱疹
合计
4.本年按季报告病例数及年发病趋势线图
季分析：
按发病日期，以线图的形式绘制出本年度从第1季度至本季度的性病报告病例数线图，在同一图中绘制出历年从1至4季度的性病报告病例数线图比较发病趋势。
年分析：
绘制历年至本年的5种性病发病率线图。
（二）人群分布
1.性别
季分析：
分析男女两性5种性病的报告发病数及与上年同期比较（见表5），并计算男女两性性病报告发病数的性别比。
表5某年某季不同性别性病报告病例数汇总及与上年同期比较
病种
男性（病例数）
女性（病例数）
本年（某季）
上年（同季）
增减（%）
本年（某季）
上年（同季）
增减（%）
梅毒
淋病
生殖道沙眼衣原体感染
尖锐湿疣
生殖器疱疹
合计
年分析：
分析男女两性5种性病的报告病例数及与上年比较（见表5），计算男女两性性别比。
分析男性和女性的性病构成比及发病率（见表6），可以在同一个图表中以直条图的方式表达。
同时分析历年男性与女性的性病发病趋势，绘制趋势线图。
表6某年不同性别性病报告病例数、构成及发病率汇总
病种
男性
女性
病例数
构成（%）
发病率
（1/10万）
病例数
构成（%）
发病率
（1/10万）
梅毒
淋病
生殖道沙眼衣原体感染
尖锐湿疣
生殖器疱疹
合计
2.年龄
年龄分组一般以5岁为一组进行划分，性病分析的年龄组划分要求：
0-，1-，5-，10-，15-，20-，25-，30-，35-，40-，45-，50-，55-，60-。
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