浅论心理应激在幽门螺杆菌感染胃黏膜过程中的作用.docx

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浅论心理应激在幽门螺杆菌感染胃黏膜过程中的作用

浅论心理应激在幽门螺杆菌感染胃黏膜过程中的作用

【摘要】　　目的：

探讨心理应激在幽门螺杆菌感染胃黏膜过程中的作用。

方法：

选用哥伦比亚培养基培养幽门螺杆菌并鉴定；40只小鼠随机分为双重因素组、单纯Hp组、单纯应激组、对照组，通过Hp菌液灌胃和电击造模，观察胃黏膜损伤情况。

结果：

双重因素组、单纯Hp组、单纯应激组与对照组胃黏膜炎症损伤评分比较，差异均有统计学意义感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡等胃部疾患的主要病因，并且与胃癌的发生密切相关，被WHO列为I类致癌原［1-3］。

　　在发展中国家Hp感染率高达80%以上，然而却仅有20%～30%的感染者会引发慢性活动性胃炎、消化性溃疡等胃部疾患。

其原因可能与Hp种类、环境因素、心理社会因素等有关。

为此，本研究旨在建立一个Hp感染动物模型，并在其基础之上给予心理刺激，观察Hp感染、心理应激在引起胃黏膜损伤过程中的作用，以及两者之间是否存在协同作用，为治疗和预防Hp感染及探讨心理性应激对消化性溃疡产生的影响提供理论依据。

　　1材料和方法

　　材料

　　雄性健康SPF级BALB/C小鼠40只，8～10周龄，体质量17～20g，购自江苏大学动物实验中心。

幽门螺杆菌菌株由中国疾病控制中心传染病预防研究所张建中教授馈赠。

　　哥伦比亚培养基、微需氧袋购自Oxoid公司；无菌绵羊血购自江苏金坛生物制品公司。

　　幽门螺杆菌的培养与鉴定

　　HpNCTC11637标准菌株按常规微需氧方法培养。

接种后，将培养板置厌氧罐中，放入微需氧袋，37℃培养3～4d。

Hp的鉴定采用形态学和生化反应：

先肉眼观察菌落形态，画线接种的菌落呈透明针尖样，直径约1mm。

制作细菌涂片，革兰染色后，显微镜下观察。

典型的Hp为革兰染色阴性，海鸥状、弧形或S形。

生化反应采用尿素酶反应、氧化酶及触酶试验，观察颜色改变。

　　本实验以本室保存的标准株NCTC11637作为阳性对照。

　　实验方法

　　将实验动物随机分成4组，即双重因素组、单纯Hp组、单纯应激组、对照组。

前两组用Hp菌液灌胃，ml/只（约含Hp为109个/ml），所有动物灌胃前禁食12h、禁水4h，隔日1次，连续5次，10天完成［4］；应激和对照两组同时同量给予生理盐水灌胃，灌胃后自由摄食和饮水。

双重因素组和应激组在距末次灌胃4周后给予心理应激，具体操作：

将两组小鼠逐个放入自制的鼠笼，鼠笼底部布有导电的铜丝，相邻两根铜丝通以不同的电极，小鼠一旦接触到两根不同极性的铜丝就被电击，控制调压器，电压在20～80Ⅴ之间，使小鼠每天接受大小不同的电击10次（以两个人同时观察到小鼠被电击后出现惊跳为一次），从而使小鼠产生恐惧、紧张、焦虑甚至愤怒等情绪，连续4天。

单纯Hp组和对照组小鼠同天也放入自制的鼠笼，但不通电源。

所有小鼠4天后全部以脊椎脱臼法处死，处死前禁食、禁水12h。

分离胃组织，将其沿胃大弯纵向剪开，用无菌生理盐水洗净胃内残留物，纵向一分为二，一半用于快速尿素酶试验，另一半以10%甲醛固定，石蜡包埋，5μm切片、染色用于Hp定植评价和炎症程度的评价。

　　Hp定植和胃黏膜炎症的评价

　　组织活检标本分别行快速尿素酶试验及石蜡包埋切片。

按文献报道方法进行甲苯胺蓝染色［5,6］，观察标本Hp定植情况，HE组织学切片染色进行组织炎症及炎症活动度的评价。

　　胃黏膜炎症的组织学评价标准

　　慢性胃炎组织学形态的分类标准［7］是以慢性炎症细胞密集的程度和浸润深度分为4度:

①无明显异常，每高倍视野单核细胞不超过5个，或数量略超过正常而镜下无明显异常；②轻度，慢性炎症细胞较少并局限于黏膜浅层，不超过黏膜层的1/3；③中度，慢性炎症细胞较密集，超过黏膜层1/3，达2/3；④重度，慢性炎症细胞密集，占黏膜全层（计算密度程度要避开淋巴滤泡及周围淋巴细胞区）

　　统计学处理

　　采用SPSS软件进行统计，Hp感染率的比较采用卡方检验，Hp与心理应激在引起胃黏膜损伤中的作用比较采用两因素析因设计方差分析，为差异有统计学意义。

　　2结果

　　幽门螺杆菌的培养与鉴定

　　培养96h的HpNCTC11637经革兰染色后，显微镜下可见海鸥状、弧形、S形的革兰阴性菌；尿素酶、氧化酶、触酶试验均阳性。

　　Hp感染情况

　　小鼠灌胃5周后，3个观察组小鼠各被咬死1只，其余小鼠解剖取胃组织进行快速尿素酶试验，双重因素组和Hp组尿素酶试验阳性（颜色在半小时内改变），应激组和对照组尿素酶试验阴性；所有胃组织进行甲苯胺蓝染色，双重因素组和Hp组小鼠发现胃组织表面的黏液及胃小弯顶部胃组织可见不等量Hp定植；应激组和对照组小鼠胃组织未见Hp定植。

按照两项同时阳性为感染：

双重因素组Hp感染率%，Hp组小鼠Hp感染率%，经χ2检验，两组间差异无统计学意义。

　　胃黏膜慢性炎症评分

　　胃黏膜炎症的组织学评价标准：

无炎症为0分；无-轻为1分；轻度2分；轻-中度3分；中度为4分；中-重度为5分；重度6分。

其评分结果见表1。

胃黏膜炎症组织学形态见图2。

表1胃黏膜炎症的组织学评价

　　经两因素析因设计方差分析：

双重因素组、单纯Hp组、单纯应激组与对照组胃黏膜炎症损伤评分比较，差异均有统计学意义（）；而Hp与心理应激在引起胃黏膜损伤中其协同作用显示无统计学意义（P=），说明Hp、心理应激在引起胃黏膜损伤的过程中是两个相互独立的因素。

　　3讨论

　　本实验使用能为大多数实验室所接受的小鼠动物模型，40只小鼠在灌胃的10天中发现被咬死3只，感染Hp的两组灌胃Hp，出现了需进一步解决的问题：

采用此灌胃方法距最后一次灌胃后5周，没有像相关文献报道的灌胃小鼠快速尿素酶试验100%感染上Hp，而甲苯胺蓝染色观察标本均有Hp定植但Hp定植的量不等，可能是在灌胃前没有用碳酸氢钠和吲哚美辛喂服，因为本实验希望模拟人的生存环境；也可能是标本选取部位的原因。

　　Hp的致病作用主要表现为胃黏膜炎症，其病变机制可能与Hp所致的黏膜上皮损伤和黏膜炎症细胞浸润这两方面有关［8］。

本实验单纯Hp组小鼠10只，实验过程死亡1只，9只出现胃黏膜慢性炎症，表现为轻-中度不等；对照组小鼠胃组织未见明显的病理改变，仅有4例见散在的淋巴细胞及浆细胞浸润。

该实验结果证实幽门螺杆菌感染可以引起胃黏膜上皮细胞的病变和黏膜内炎症细胞反应，是慢性胃炎的病因，是消化性溃疡的重要致病因子。

　　心理刺激会引起情绪反应，长时间强烈的心理刺激可以导致持久而强烈的情绪体验。

每天接受电击10次，电压在20～80Ⅴ之间，连续4天，小鼠产生恐惧、紧张、焦虑甚至愤怒等情绪，造成神经内分泌功能紊乱，出现皮质激素、胃抑制因子、胃运动素等分泌的异常，与对照组相比，应激组均出现胃黏膜慢性炎症，表现为轻-中-重度不等。

该实验结果提示持久的心理刺激可以引起胃黏膜炎症。

　　本实验结果表明：

双重因素组感染Hp，并在此基础之上给予心理刺激，造成双效应，结果均出现胃黏膜慢性炎症，表现为中-重度不等，其中有1例标本肉眼可见胃黏膜溃疡；与对照组相比，可见机体在感染Hp或当机体处于应激状态时，均可引起胃黏膜损伤，特别是在感染Hp的基础之上持续而强烈的心理应激状态将导致严重的胃黏膜损伤，说明心理精神因素是诱发或加重胃黏膜损伤的一个不容忽视的因素。

　　本实验采用小鼠动物模型给予电击很大程度上模拟了人的心理应激过程，在给予心理刺激过程中为了尽量减少物理刺激的干预，采用自制鼠笼，在笼底安装正负电极，小鼠在自由活动中只要两脚同时踩上相邻电极就被电击，这样使物理刺激效应降到最低。

在日常生活中，人在心理应激过程中常常也夹杂物理应激，因此，采用本动物模型可以很大程度上模仿人类的心理应激过程。

尽管受本实验条件限制，其心理刺激的模拟时间较局限，但结果提示心理应激对胃黏膜的损伤是明显的。

感染Hp的人群中仅有少部分发生胃黏膜的损伤，从本实验Hp感染小鼠胃模型中我们观察的胃黏膜炎症程度的结果看，感染Hp的小鼠发生了不同程度的胃黏膜损伤，与感染Hp的人群中仅有少部分发生胃黏膜的损伤有所不同，可能与我们在感染Hp较短的时间内观察胃黏膜损伤有关。

在感染Hp的基础之上给予心理刺激比单纯的Hp感染或单纯的心理应激引起的胃黏膜损伤的程度重，虽然通过析因设计方差分析证实Hp感染、心理应激在引起胃黏膜损伤的过程中是两个相互独立的因素，与我们猜测的Hp和心理应激在引起胃黏膜损伤方面的协同作用并不相符，但Hp感染+心理刺激引起胃黏膜损伤以中-重度损伤为主。

这可能与我们实验小鼠的样本数量不够多或是Hp感染的时间不够长、心理刺激的模拟时间不够等有关，我们准备在进一步的实验中探讨其可能的机制。

【参考文献】

　　［1］SugiyamaT,AsakaM.Helicobacterpyloriinfectionandgastriccancer［J］.MedElectronMicrosc,2004,37（3）:

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