组织培养实验报告记录.docx

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组织培养实验报告记录

组织培养实验报告记录

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植物组织培养实验报告

一、实验目的

1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；

2．通过配置ms培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；

4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法；5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整再生植株的过程,加深对植物细胞的全能性的理解。

二、实验原理

（一）植物组织培养

植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。

植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。

这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。

（二）植物细胞的全能性

植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。

（三）组织的分化与器官建成

外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。

有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。

（四）培养基的组成

培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。

营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。

三、实验器材

高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻

璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。

四、实验材料

豌豆种子

五、实验药品

药品、70%酒精、0.1%升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、84消毒液、蔗糖、琼脂等。

六、实验步骤

（一）培养基母液的配制

表1.ms培养基个成分的含量（单位：

mg/l）

表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数

名称大量元素微量元素ca盐mg盐fe盐有机肌醇激素

扩大倍数5050505050100100100

定容体积（ml）

50050050050050020020050

吸取毫升数/l

202020202010105

（注：

吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积）

表3.配制母液所需的药品及称取量

（注：

根据表1与表2计算各物质的称取量）

药品名称nh4no3kno3kh2po4

称取量（mg）

41250475004250

药品名称ki

na2mno4?

2h2ocuso4?

5h2o

称取量（mg）

20.756.250.625

cacl2?

2h2o11000cocl2?

6h2o0.625mgso4?

7h2o9250肌醇2000feso4?

4h2o695甘氨酸40na-edta932.5盐酸硫胺素8mnso4?

7h2o557.5盐酸吡哆醇10znso4?

7h2o215烟酸10h3bo3155

（1）ms大量元素母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ml存放于冰箱中备用。

名称

重量（mg）

名称

重量（mg）

nh4no3kno3

4125047500

kh2po4cacl2·2h2o

425011000

（2）ms微量元素母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ml存放于冰箱中备用。

名称kih3bo3mnso4·7h2oznso4·7h2o

重量（mg）20.75155557.5215

名称na2moo4·2h2ocuso4·5h2ococl2·6h2o

重量（mg）6.250.6250.625

（3）ms有机母液参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至200ml存放于冰箱中备用。

名称肌醇烟酸盐酸吡哆醇

重量（mg）

名称盐酸硫胺素甘氨酸

重量（mg）

20001010

840

（4）ms铁盐母液的配制参考表3称取一定量的下列药品用蒸馏水溶解，定容至500ml存放于冰箱中备用。

名称edta二钠

重量（mg）

932.5

名称feso4·4h2o

重量（mg）

695

（5）ms钙盐母液的配制

参考表3称取11000mg的cacl2?

2h2o用蒸馏水溶解定容至500ml，保存于冰箱备用。

（6）ms镁盐母液的配制参考表3称取9250mg的mgso4?

7h2o用蒸馏水溶解定容至500ml，保存于冰箱备用。

（7）ms肌醇母液的配制参考表3称取2000mg的肌醇用蒸馏水溶解定容至200ml，保存于冰箱备用。

（8）ms激素母液的配制各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的naoh溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。

一般取100mg配成100ml母液。

（二）培养基的配制

以配制1l的ms培养基为例进行如下操作：

（1）取1l的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾；

（2）分别取

（一）中配制的8种母液放入小烧杯中，然后加入，边加边搅拌；

（3）称取30g蔗糖加入，边加边搅拌；

（4）称取8g琼脂加入，边加边搅拌，知之琼脂粉溶解；（5）定容至1l，加入激素母液，用naoh调ph6.0左右；

（6）将培养基分别分装于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮纸用绳子扎紧；

（7）放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右；

（8）灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。

（三）高压蒸汽灭菌锅的使用方法

具体操作步骤：

（1）高压锅放水至平把架；

（2）把包扎好的培养基装入高压锅；

（3）盖上热压锅盖,上紧螺帽（注意对角拧紧螺帽）关上气阀和安全阀；（4）然后接通电源；

（5）压力计升至0.05mpa时，打开放气阀,排除冷空气（此步很重要）；

（6）排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11mpa位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：

当压力锅指针升至0.12mpa时，关闭电源，待指针下降至0.11mpa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟；

（7）灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀（注意要逐渐放气）待篇二：

组培实验报告

植物组织培实验报告学院：

生命科学技术学院班级：

10级生物技术植物班学号：

2010193042姓名：

高学深

养

植物组织培养实验报告

实验一母液的配制与保存

一、实验目的

1.学习母夜的配制方法和母液的保存方式。

2.熟悉掌握制备母液的操作。

二、实验原理

培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。

主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。

配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。

三、实验材料、试剂和仪器设备1．试剂

nh4no3,kno3,kh2po4,cacl2·2h2o,mgso4·7h2o,feso4·7h2ona2-edta,mnso4·4h2o,znso4·7h2o,h3bo3,ki,na2moo4·2h2o

cuso4·5h2o,cocl2·6h2o,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。

2.仪器设备

电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶（1000ml、500ml、100ml），移液管（10ml，5ml，

1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。

四、实验步骤

1.、计算：

计算各化学成分所需要的量。

大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。

有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。

计算后制成配方表。

2、制定标签：

裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上ms，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日

期。

。

以大量为例如图：

3、大量元素母液的配制：

先用量筒量取300ml蒸馏水放入500ml烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：

nh4no3,kno3,kh2po4,待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并置于冰

箱中低温保存备用。

4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取mnso4·4h2o,znso4·7h2o，h3bo3,ki,na2moo4·2h2o。

cuso4·5h2o和cocl2·6h2o先稀释后用移液管吸取,按制备母液i的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，洗涤烧杯，然后定容至500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

5、铁盐母液的制备把feso4·7h2o和na2-edta分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把feso4倒入na2-edta溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调ph到5.5，将溶液转移至500ml容量瓶中，洗涤后用蒸馏水定容至500ml，转入细口试剂瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

6、有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：

盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇，烟酸,甘氨酸，用蒸馏水溶解后，定容200ml转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

7、植物生长物质母液制备naa母液:

准确称取10mg,用少量1mol/lnaoh溶解后加蒸馏水定容至100ml,即配制成0.1mg/ml的naa母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

6–ba母液配制方法相似，浓度为2mg/ml

五、试验结果分析及注意事项

1、kh2po4是吸热溶解，可以把烧杯浸在温水中溶解。

2、制作标签时只能能用铅笔写。

实验二、培养基的制备与灭菌

一、实验目的

1、学习母液法配制培养基。

2、学习用牛皮纸包三角瓶口的防污染方法。

3、学习灭菌锅的使用。

二、实验原理

为防止组织培养各物质发生反应所以把微量和铁盐混在一起，为了避免物质的反应，所以要迅速倒入沸腾的蒸馏水中，琼脂应慢慢倒入，并边搅拌边倒入。

组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。

三、实验材料、试剂和仪器设备

1.试剂：

琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/lnaoh,各类母液2.仪器设备：

电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，ph试纸，锥形瓶，牛皮纸，棉塞等。

四、实验步骤

1.准备将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定置。

2..大量的量取取50ml量筒一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，篇三：

植物组织培养实验报告

植

组织培养验报告

班级：

学号：

2011192017姓名：

李

鹏

物

实

植物组织培养实验报告

实验一植物组织培养母液的配制

一、实验目的

1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。

2.学习掌握植物组织培养ms培养基的配制方法。

二、实验原理

培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。

大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。

无机盐类由大量元素和微量元素组成。

大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。

微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。

培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。

有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。

培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。

培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。

蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。

在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。

一般包括vb1、b6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、vc。

肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。

常用的植物生长调节物质包括以下三类：

①生长素类：

吲哚乙酸（iaa）、萘乙酸（naa）、二氯苯氧乙酸（2,4-d）②细胞分裂素：

玉米素（zt）6-苄基嘌呤（6-ba）和激动素（kt）。

③赤霉素：

组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（ga3）。

培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。

其中最为常见的为酵母提取物。

琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。

植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。

目前普遍使用的是ms培养基。

ms固体培养基可用于诱导遇上组织，或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。

ms培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基，也是它被普遍使用的原因之一。

三、实验材料、试剂、配方和仪器设备1．试剂

nh4no3,kno3,kh2po4,cacl2·2h2o,mgso4·7h2o,feso4·7h2ona2-edta,mnso4·4h2o,znso4·7h2o,h3bo3,ki,na2moo4·2h2o

cuso4·5h2o,cocl2·6h2o,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。

2.仪器设备

电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶（1000ml、500ml、100ml），移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药匙，称量纸等。

3、培养基配方

化合物名称nh4no3kno3kh2po4化合物名称mnso4·4h2oznso4·7h2oh3bo3ki

na2moo4·2h2ocuso4·5h2ococl2·6h2o化合物名称feso4·7h2ona2-edta

化合物名称肌醇甘氨酸

烟酸硫胺素盐酸吡哆醇烟酸ms培养基有机物质母液的配制

培养基浓度（mg/l）称取质量（g）100220.20.480.5100.510ms培养基大量元素母液配制培养基浓度（mg/l）称取质量（g）165041.25190047.501704.25ms培养基微量元素母液配制培养基浓度（mg/l）称取质量（g）22.355.78.621.56.211.50.8320.750.256.250.00250.6250.00250.625ms培养基铁盐母液配制培养基浓度（mg/l）称取质量（g）

27.86.9537.39.32

四、实验步骤

1.、计算：

计算各化学成分所需要的量。

大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。

有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。

计算后制成配方表。

2、制定标签：

裁取适当大小的牛皮纸，用铅笔写上ms，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期以大量为例如图：

3、大量元素母液的配制：

先用量筒量取300ml蒸馏水放入500ml烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：

nh4no3,kno3,kh2po4,待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并置于冰箱中低温保存备用。

4、微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平依次称取mnso4·4h2o,znso4·7h2o，h3bo3,ki,na2moo4·2h2o。

cuso4·5h2o和cocl2·6h2o先稀释后用移液管吸取,按制备母液i的方法逐个溶解，转移至容量瓶中，洗涤烧杯，然后定容至500ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

5、铁盐母液的制备把feso4·7h2o和na2-edta分别置于适量蒸馏水中，加热搅拌使之完全溶解，保持加热，把feso4倒入na2-edta溶液中并搅拌，接近沸腾时停止加热，冷却后调ph到5.5，将溶液转移至500ml容量瓶中，洗涤后用蒸馏水定容至500ml，转入细口试剂瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

6、有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取：

盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇，烟酸,甘氨酸，用蒸馏水溶解后，定容200ml转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

7、植物生长物质母液制备naa母液:

准确称取10mg,用少量1mol/lnaoh溶解后加蒸馏水定容至100ml,即配制成0.1mg/ml的naa母液，转入细口试

剂瓶中，贴上标签，注明母液名称，放大倍数，配制日期，配制人，并置于冰箱中保存备用。

6–ba母液配制方法相似，浓度为2mg/ml五、试验结果分析及注意事项

1、配制母液时注意药品只能出不能进。

2、制作标签时只能能用铅笔写，防止油性笔字迹在高压灭菌后模糊不清。

实验二、培养基的制备与灭菌

一、实验目的

1、学习母液法配制培养基。

2、学习用牛皮纸包三角瓶口的防污染方法。

3、学习并熟悉自动化灭菌锅的操作和保护。

二、实验原理

为防止组织培养各物质发生反应所以把微量和铁盐混在一起，为了避免物质的反应，所以要迅速倒入沸腾的蒸馏水中，琼脂应慢慢倒入，并边搅拌边倒入。

组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。

三、实验材料、试剂和仪器设备

1.试剂：

琼脂，蔗糖，蒸馏水，1mol/lnaoh,各类母液

2.仪器设备：

电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，ph试纸，锥形瓶，牛皮纸，棉塞等。

四、实验步骤

1.准备将所需的各种母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿放在指定置。

2.大量的量取取50ml量筒一个，将大量、有机、肌醇、镁盐，钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入500ml烧杯中。

3.微量铁盐的量取取50ml量筒一个，将微量和铁盐按配方表中的用量称取并倒入100ml烧杯中。

4.培养基配制取瓷盆一个，加入1.5l蒸馏水，置于电磁炉上加热，将称量好的所有母液倒入瓷盆中，用玻璃棒不断搅拌。

再称量琼脂16克，白砂糖60克，依次倒入瓷盆中，边倒入边搅拌，待琼脂和白砂糖完全溶解后，，并定容至2l。

5、调ph用1mol/lnaoh和1mol／lhcl调ph至6.0。

6、分装把培养基分装到三角瓶中，每瓶约50ml，用棉塞塞好再用牛皮纸，细绳包扎好，待灭菌。

7、灭菌将所有的三角瓶整齐的放在灭菌锅的铁丝篮中，将温度调为121℃灭菌20min。

灭完后摆放在水平的实验桌上勿动。

五、试验结果分析及注意事项

1、配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。

2、三角瓶灭菌时注意要放干净冷空气。

3、加的药品种类较多，切忌加错。

4、注意把三角瓶用棉塞塞好和用牛皮纸包好。

5、灭完菌的三角瓶勿动，等待培养基冷却凝固。

6、琼脂不可加太快，以防加太快琼脂结块。

实验三无菌植株的建立一、实验目的

1、通过实验，初步掌握外植体材料的消毒。

2、学习超净工作台灭菌方法和操作要求。

篇四：

植物组织培养综合实验报告模块（2012年3月）

《植物组织培养大实验》综合报告书写说明

植物组织培养这一个综合性很强的大实验，《植物组织培养大实验》课程实验由7个分实验组成：

①实验用具的洗涤和灭菌，②ms培养基母液的配制，③ms培养基的配制和灭菌，④植物外植体消毒和接种，⑤愈伤组织的诱导（又称原代培养或初代培养），⑥愈伤组织的继代培养，⑦愈伤组织的生根培养（植株再生）。

实验报告是对实验观察、比较所得结果的真实记载，是科学的记录。

实验报告的形式可以根据实验风容的不同而分文字描述、绘图和列表3种形式。

为了减少实验报告写作过程中的重复性和减轻学生完成实验报告的负担，《植物组织培养大实验》课程实验报告由5次综合实验报告组成，即：

1、《植物组织培养大实验》综合报告

（一）（必做）：

实验用具的洗涤和灭菌、ms培养基母液及ms培养基的配制和灭菌；

2、《植物组织培养大实验》综合报告

（二）（必做）：

植物外植体消毒和接种；

3、《植物组织培养大实验》综合报告（三）（必做）：

愈伤组织的诱导（又称原代培养或初代培养）；

4、《植物组织培养大实验》综合报告（四）（必做）：

愈伤组织的继代培养；

5、《植物组织培养大实验》综合报告（五）（选做）：

愈伤组织的生根培养（植株再生）。

学生在写《植物组织培养大实验》综合报告时，实验报告中的实验内容、实验目的、实验原理、仪器设备和试剂等4部分可按照教师拟定的《植物组织培养大实验》综合报告

（一）至（五）中的内容写。

实验方法部分可参照教师编写的实验指导。

实验结果与分析是学生对自已实验结果的真实记载和分析，思考题是教师为了让学生加深对植物组织培养的原理与技术的理解和掌握而设计的。

因此，综合报告中的实验结果与分析、思考题2部分内容，要求学生必需独立完成。

《植物组织培养大实验》综合报告

（一）（必做）

【实验内容】实验用具的洗涤和灭菌、ms培养基母液及ms培养基的配制和灭菌

【实验目的】

1、掌握植物组织培养中常用实验用具的洗涤、灭菌方法及注意事项；

2、掌握ms培养基母液的配制方法和注意事项；

3、掌握ms培养基的配制、灭菌方法和注意事项。

【实验原理】

对植物外植体进行离体培养时，培养基提供生长所需的营养成分等。

培养基的主要成分包括无机营养物、碳源、维生素、植物生长物质和有机附加物等。

配制培养基通常都按配方浓度的若干倍称量，配制成一系列的母液置于冰箱保存，使用时按比例稀释