分子实验常用试剂缓冲液配制.docx

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分子实验常用试剂缓冲液配制

分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法

1、1MTris-HCl

（pH7.4，7.6，8.0）

组份浓度1MTris-HCl

配制量1L

配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

浓HCI

pH值

7.4

7.6

约70mL

约60mL

8.0

约42mL

4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

pH值随温度的变化差很大，温度每升高「C,溶

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的

液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTris-HCI

组份浓度1.5MTris-HCI

（pH8.8）

配置方法

配制量1L

1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升

高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10XTEBuffer

（pH7.4,7.6,

8.0）

组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA

配制量1L

配置方法1.

量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

500mMEDTA（pH8.0）20mL

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3M醋酸钠

组份浓度3M醋酸钠

（PH5.2）

配置方法

配制量100mL

1.

称取40.8gNaOAcWH20置于100〜200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至

100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer

组份浓度137mMNaCl

2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4

配制量1L

配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl

KCl

0.2g

1.42g

Na2HPO4

0.27g

KH2PO4

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加HCI将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCI2和0.5mMMgCI2。

6、10M醋酸铵组份浓度10M醋酸铵

配制量100mL

配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100〜200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.使用0.22口滤膜过滤除菌。

4.密圭寸瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris-HCl平衡苯酚配置方法

1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化

苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160'C对其进行重蒸馏除去

诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量

对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

1液化苯酚应贮存于-20C,此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68C水浴中使苯酚充分溶解。

2加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制

剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

3加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

4重复操作步骤③。

5加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

6重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

7使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

8将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇配置方法

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）氯仿可使蛋白（25

24:

1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配置方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:

1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4C保存。

9、10%（W/V）SDS组份浓度10%（W/V）SDS

配制量100mL

配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100〜200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68C加热溶解。

2.

10、2NNaOH

配置方法

滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

3.将溶液定容至100mL后，室温保存

组份浓度2NNaOH

配制量100mL

1.量取80mL去离子水置于100〜200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5NHCl组份浓度2.5NHCl

配制量100mL

配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

12、5MNaCl组份浓度5MNaCl

配制量1L

配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4'C保存。

13、20%（W/V）Glucose组份浓度20%（W/V）Glucose

配制量100mL

配置方法1.称取20gGlucose置于100~200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.高温高压灭菌后，4C保存。

14、SolutionI组份浓度25mMTris-HCI（pH8.0），10mMEDTA，50mMGlucose

（质粒提取用）配制量1L

配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中

1MTris-HCl（pH8.0）25mL

0.5MEDTA（pH8.0）

20%Glucose（1.11M）

dH2O

2.高温高压灭菌后，4C保存。

3.

20mL

45mL

910mL

中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）

15、SolutionII

组份浓度250mMNaOH

，1%（W/V）SDS

（质粒提取用）

配制量500mL

配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中

10%SDS

50mL

2NNaOH

50mL

16、SolutionIII

（质粒提取用）

2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

3.室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月

注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH配制量500mL

使用前每50mL的SoliutionI

配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc

CH3COOH

147g

57.5mL

2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500mL。

4.高温高压灭菌后，4C保存。

17、

0.5MEDTA

（pH8.0）

配置方法

组份浓度0.5MEDTA

配制量1L

1.

称取186.1gNa2EDTA?

2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

18、

1MDTT

组份浓度1MDTT

配置方法

配制量20mL

1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的0.01M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22

滤器过滤除

菌。

19、

10mMATP

3.适量分成小份后，-20C保存。

组份浓度10mMATP

配制量20mL

配置方法1.称取121mgNa2ATP?

3H2O，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份，-20C保存。

分子生物学实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin

（100mg/ml

组份浓度100mg/mlAmpicillin配制量50mL

配置方法

1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至

3.用0.22口滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20C保存。

50mL。

2、IPTG

（24mg/mL

配置方法

组份浓度24mg/mLIPTG配制量50mL

1.

3、X-Gal

（20mg/mL）

称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至用0.22口滤膜过滤除菌。

小份分装（1mL/份）后，-20C保存。

组份浓度20mg/mLX-Gal

配制量50mL

50mL。

3.

配置方法1.

称取1gX-Gal置于50mL离心管中。

2.

50mL

加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至

3.小份分装（1mL/份）后，-20°C保存。

4、LB培养基

NaCI

组份浓度1%（W/V）Tryptone,0.5%（W/V）YeastExtract,1%（W/V）

配制量1L

配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone

10g

10g

5、LB/Amp培养基

配置方法

6、TB培养基

4mL

YeastExtract

NaCl

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.高温高压灭菌后，4C保存。

组份浓度1%（W/V）

Tryptone

0.5%（W/V）

YeastExtract

5g

配制量1L

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

1%（W/V）

0.1mg/mL

Tryptone

YeastExtract

NaCl

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至

1Lo

5.高温高压灭菌后，冷却至室温。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）后均匀混合。

7.4C保存。

组份浓度

1.2%（W/V

配制量1L

配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4

NaCl

Ampicillin

10g

5g

10g

Tryptone

2.4%

0.4%

17mM

72mM

（W/V）

（V/V）

0.72MK2HPO4

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone

YeastExtract

Glycerol

YeastExtract

Glycerol

KH2PO4

K2HPO4

100mLo

24g

12g

1L后，高温高压灭菌。

加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

7、TB/Apm培养基

组份浓度1.2%（W/V

Tryptone

2.4%（W/V）

YeastExtract

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至

5.待溶液冷却至60'C以下时,

6.4C保存。

配置方法

配制量1L

0.4%（V/V）

Glycerol

17mM

72mM

0.1mg/mL

KH2PO4

K2HPO4

Ampicillin

1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至

100mL，高温高压灭菌。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone

12g

YeastExtract

24g

Glycerol

4mL

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60'C以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和

6.均匀混合后4C保存。

1mLAmpicillin

（100mg/mL）。

8、SOB培养基

组份浓度2%（W/V）

Tryptone

0.5%（W/V）

YeastExtract

0.05%（W/V

NaCI

KCl

2.5mM

10mM

MgCl2

配制量1L

配置方法

1.配制250mMKCl溶液。

2.配制2MMgCl2溶液。

在

3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

1.86gKCl后，定容至100mL。

在90mL的去离子水中溶解

90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。

20g

5g

0.5g

YeastExtract

NaCl

KCl

MgCl2

葡萄糖

100mL，用0.22口滤膜过

Tryptone

YeastExtractNaCl

4.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

5量取10mL250mMKCl溶液，加入到烧杯中。

6.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

7.加入去离子水将培养基定容至1Lo

8.高温高压灭菌后，4C保存。

9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。

9.SOC培养基组份浓度2%（W/V）Tryptone

0.5%（W/V）0.05%（W/V）2.5mM

10mM

20mM

配制量100mL

配置方法

1.配制1M葡萄糖溶液。

将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至

滤除菌。

2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。

C保存。

3.4

10、

2&T培养基

组份浓度1.6%（W/V）Tryptone，1%（W/V）YeastExtract，0.5%（W/V）NaCI

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone

YeastExtract

16g

10g

NaCI

5g

11、

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加1NKOH，调节pH值至7.0。

4..加水离子水将培养基定容至

5.高温高压后，4'C保存。

1L。

①bxbroth培养基组份浓度2%（W/V）Tryptone，

0.5%（W/V）YeastExtract,0.5%（W/V）

5g

20g

3.滴加1NKOH，调节

2.加入约800mL的去离子水,

pH值至7.5o

4..加水离子水将培养基定容至

MgSO4?

7H2O

充分搅拌溶解。

1L。

5g

12、NZCYM培养基

5.高温高压后，4C保存。

组份浓度0.5%（W/V）

YeastExtract

0.1%（W/V）

CasaminoAcid

1%（W/V）

NZ胺

0.5%（W/V）

NaCI

0.2%（W/V）

MgSO4

?

7H2O

MgSO4?

7H2O

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone

YeastExtract

配制量1L

配置方法

1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

YeastExtract

5g

CasaminoAcid

1g

NZ胺

NaCI

10g

5g

MgSO4

?

7H2O

2g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH

4..加水离子水将培养基定容至

1Lo

值至7.0。

13、

5.高温高压后，4C保存。

NZYM培养基组份浓度

0.5%（W/V）

YeastExtract

1%（W/V）

0.5%（W/V）

0.2%（W/V）

NZ胺

NaCI

MgSO4?

7H2O

配置方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid（酪蛋白氨基酸）夕卜，其他成份与

14、NZM培养基组份浓度1%（W/V）NZ胺

1%（W/V）

0.5%（W/V）

NZCYM培养基相同。

NaCl

MgSO4NH2O

NZYM培养基相同。

15、一般固体培养基的列试剂中的一种。

配制

Agar（琼脂：

铺制平板用）

Agar（琼脂：

配制顶层琼脂用）

Agarose（琼脂糖：

铺制平板用）

Agarose（琼脂糖：

配制顶层琼脂用）

15g/L

15g/L

7g/L

7g/L

4..铺制平板（30〜35mL培养基/90mm培养皿）。

16、

LB/Amp/X-Gal/IPTG

组份浓度

1%（W/V）

Tryptone

平板培养基

0.5%（W/V）

YeastExtract

1%（W/V）

NaCl

0.1mg/mL

Ampicillin

0.5%（W/V）

IPTG

0.04mg/mL

X-Gal

1.5%（W/V）

Agar

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，

置于1L

烧杯中。

Tryptone

10g

YeastExtract

NaCl

2.高温高压灭菌后，带上手套取岀培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。

3.待培养基冷却至50〜60C时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀

5g

10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5.高温高压灭菌后，冷却至60'C左右。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）、1mLIPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7.铺制平板（30〜35mL培养基/90mm培养基）。

8.4C保存平板。

17、TB/Amp/X-Gal/IPTG组份浓度

1.2%（W/V）Tryptone

平板培养基2.4%（W/V）

YeastExtract

0.4%（W/V）

Glycerol

17mM

KH2PO4

72mM

0.1mg/mL

K2HPO4

Ampicillin

0.2%（W/V）

配置方法NZM培养基除不含YeastExtract（酵母提取物）夕卜，其他成份与

配置方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下

0.024mg/mL

IPTG

0.04mg/mLX-Gal

1.5%（W/V）Agar

配制量1L

配置方法1•配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4）100mL。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone

12g

YeastExtract

Glycerol

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5.高温高压灭菌后，冷却至60'C左右。

6.加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mLAmpicillin（100mg/mL

IPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7.铺制平板（30〜35mL培养基/90mm培养基）。

8.4C保存平板。

生物化学实验常用试剂的配制方法

24g

4mL

）、1mL

1、0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L

配制量

2L

配置方法

1.准确称取氢氧化钠40go

2.用去离子水溶解并稀释至

2Lo

2、0.5mol/L

盐酸溶液

组份浓度0.5mol/L

配制量

2L

配置方法

1.准确量取盐酸83.4mLo

2.用去离子水稀释至

2Lo

4、0.2%葡萄糖标准溶液

组份浓度0.2%

配制量

1L

配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70C干燥2小时。

2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重

3.准确称取葡萄糖2.000go

4.用去离子水溶解并定容至1L

5.于4C保存。

5、250pg/mL牛血清

白蛋白标准液

组份浓度250p/mL

配制量2L

配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白

2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L

3.4C保存

6、Folin试剂甲

配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水