分子实验常用试剂缓冲液配制.docx

1、分子实验常用试剂缓冲液配制分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl（pH7.4，7.6，8.0 ）组份浓度 1 M Tris-HCl配制量1L配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH值。浓HCIpH值7.47.6约 70mL约 60mL8.0约 42mL4.将溶解定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。pH值随温度的变化差很大， 温度每升高C,溶注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH值，因为Tris溶液的液的pH值大约降低0.03个单位。2、1.5 M Tris-HCI组份浓

2、度 1.5 M Tris-HCI(pH8.8 )配置方法配制量1L1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调pH值至8.8。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大， 温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。3、10 XTE Buffer（pH 7.4 , 7.6 ,8.0）组份浓度 100 mM Tris-HCl ，10 mM EDTA配制量1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1 M Tris-HCl Buff

3、er （pH7.4，7.6，8.0 ） 100mL500 mM EDTA ( pH8.0 ) 20mL2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。4、3 M 醋酸钠组份浓度3 M醋酸钠(PH5.2 )配置方法配制量100mL1.称取40.8gNaOAc WH20置于100200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。2.加入冰乙酸调节 pH值至5.2。3.加入去离子水将溶液定容至100mL 。4.高温高压灭菌后，室温保存。5、PBS Buffer组份浓度 137 mM NaCl2.7mM KCl ，10 mM Na2HPO4 ，2

4、mM KH2PO4配制量1L配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。NaClKCl0.2g1.42 gNa2HPO40.27gKH2PO42.向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加HCI将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至 1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1mM CaCI2和0.5 mM MgCI2 。6、 10 M 醋酸铵 组份浓度10 M醋酸铵配制量100mL配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定

5、容至 100mL。3.使用0.22 口滤膜过滤除菌。4.密圭寸瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7、 Tris- HCl平衡苯酚 配置方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在 160 C对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致 RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防

6、护镜等。所有操作均应在通 风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性 pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：1液化苯酚应贮存于-20 C,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使 其达到室温，然后在68 C水浴中使苯酚充分溶解。2加入羟基喹啉(8-Quinolinol )至终浓度0.1 %。该化合物是一种还原剂、 RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。3加入等体积的1M Tris-HCl ( pH8

7、.0 )，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除 去上层水相。4重复操作步骤。5加入等体积的0.1M Tris-HCl ( pH8.0 )，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除 去上层水相。6重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。7使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。8将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。8、 苯酚/氯仿/异戊醇 配置方法1.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯 /酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)氯仿可使蛋白(2524 : 1)质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配置方法：将 Tris-HC

8、l平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1)均匀混合后，移入棕色玻璃瓶 中4 C保存。9、 10 %( W/V ) SDS 组份浓度 10 %( W/V ) SDS配制量 100mL配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68 C加热溶 解。2.10、2 N NaOH配置方法滴加数滴浓盐酸调节 pH值至7.2。3.将溶液定容至100mL后，室温保存组份浓度2N NaOH配制量100mL1.量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）2.称取8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加

9、边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至 100mL。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、 2.5 N HCl 组份浓度 2.5 N HCl配制量100mL配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N ），均匀混合。2.室温保存。12、 5 M NaCl 组份浓度 5 M NaCl配制量1L配置方法1.称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4 C保存。13、 20 %（ W/V ） Glucose 组份浓度 20 %（ W/V

10、 ） Glucose配制量100mL配置方法1.称取20g Glucose 置于100 200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至 100mL。3.高温高压灭菌后，4 C保存。14、Solution I 组份浓度 25 mM Tris-HCI （ pH8.0 ），10mM EDTA ，50mM Glucose（质粒提取用） 配制量1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中1M Tris-HCl (pH8.0 ) 25mL0.5 M EDTA ( pH8.0 )20 % Glucose (1.11M )dH2O2.高温高压灭菌后，4 C保存。3.20mL

11、45mL910mL中加入 2mL 的 RNase A (20mg/mL )15、 Solution II组份浓度250mM NaOH，1 %( W/V ) SDS（质粒提取用）配制量500mL配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中10 % SDS50mL2N NaOH50mL16、Solution III（质粒提取用）2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。组份浓度 3M KOAc ，5M CH3COOH 配制量500mL使用前每 50 mL 的 Soliution I配置方法1.量取下列溶液置于500m

12、L烧杯中。KOAcCH3COOH147g57.5mL2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至 500mL。4.高温高压灭菌后，4 C保存。17、0.5M EDTA(pH8.0)配置方法组份浓度 0.5 M EDTA配制量1L1.称取 186.1g Na2EDTA ?2H2O，置于 1L 烧杯中。2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。3.用 NaOH 调节 pH 值值 8.0 (约 20g NaOH )。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。18、1 M DTT组份浓度 1 M D

13、TT配置方法配制量20mL1.称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。2.加 20mL 的 0.01 M 的 NaOAc (pH5.2 )，溶解后使用 0.22滤器过滤除菌。19、10mM ATP3.适量分成小份后，-20 C保存。组份浓度 10mM ATP配制量20mL配置方法1.称取121mg Na2ATP ?3H2O，加入到50mL塑料离心管内。2.加 20mL 的25mM Tris-HCl ( pH8.0 )，搅拌溶解。3.适量分成小份，-20 C保存。 分子生物学实验常用培养基的配制方法1、Ampicillin(100mg/ml组份浓度 100mg/ml Ampicill

14、in 配制量50mL配置方法1.称量5g Ampicillin 置于50mL离心管中。2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至3.用0.22 口滤膜过滤除菌。4.小份分装(1mL/份)后，-20 C保存。50mL 。2、IPTG(24mg/mL配置方法组份浓度24mg/mL IPTG 配制量50mL1.3、X- Gal(20mg/mL )称量1.2g IPTG 置于50mL离心管中。2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至 用0.22 口滤膜过滤除菌。小份分装(1mL/份)后，-20 C保存。组份浓度 20mg/mL X- Gal配制量50mL50mL 。3.配置方法1.称取1g

15、X-Gal置于50mL离心管中。2.50mL加入40mL DMF (二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至3.小份分装(1mL/份)后，-20 C保存。4、LB培养基NaCI组份浓度 1 % (W/V ) Tryptone , 0.5 % (W/V ) Yeast Extract , 1 % (W/V )配制量1L配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10g10g5、LB/Amp 培养基配置方法6、TB培养基4mLYeast ExtractNaCl2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5N NaOH (约 0.2mL )，调节 pH 值至 7.0。4.高温高

16、压灭菌后，4 C保存。组份浓度 1 %( W/V )Tryptone0.5 %( W/V)Yeast Extract5g配制量1L1.称量下列试剂，置于1L烧杯中1 %( W/V)0.1mg/mLTryptoneYeast ExtractNaCl2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5N NaOH (约 0.2mL )，调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至1L o5.高温高压灭菌后，冷却至室温。6.加入 1mL Ampicillin (100mg/mL )后均匀混合。7. 4 C保存。组份浓度1.2 %( W/V配制量1L配置方法1.配制磷酸盐缓冲液(0.1

17、7M KH2PO4NaClAmpicillin10g5g10gTryptone2.4 %0.4 %17mM72mM(W/V )(V/V ),0.72M K2HPO42.称取下列试剂，置于1L烧杯中。TryptoneYeast ExtractGlycerolYeast ExtractGlycerolKH2PO4K2HPO4100mL o24g12g1L后，高温高压灭菌。加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。7、TB/Apm 培养基组份浓度1.2 %( W/VTryptone2.4 %(W/V )Yeast Extract3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至5

18、.待溶液冷却至60 C以下时,6.4 C保存。配置方法配制量1L0.4 %(V/V )Glycerol17mM72mM0.1mg/mLKH2PO4K2HPO4Ampicillin1.配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4 ，0.72M K2HPO4 ) 100mL。溶解 2.31g KH2PO4 和2.54g K2HPO4 于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gYeast Extract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至 1L后

19、，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至60 C以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和6.均匀混合后4 C保存。1mL Ampicillin(100mg/mL )。8、SOB培养基组份浓度2 %( W/V )Tryptone0.5 %(W/V )Yeast Extract0.05 %( W /VNaCIKCl2.5mM10mMMgCl2配制量1L配置方法1.配制250mM KCl 溶液。2.配制2M MgCl2溶液。在3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。1.86g KCl 后，定容至 100mL。在90mL的去离子水中溶解90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高温高压灭

20、菌。20g5g0.5gYeast ExtractNaClKClMgCl2葡萄糖100mL，用0.22 口 滤膜过TryptoneYeast Extract NaCl4.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。5量取10mL 250 mM KCl 溶液，加入到烧杯中。6.滴加5N NaOH 溶液(约0.2mL )，调节pH值至7.0。7.加入去离子水将培养基定容至 1L o8.高温高压灭菌后，4 C保存。9.使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2 溶液。9. SOC培养基 组份浓度 2 %( W/V ) Tryptone0.5 %( W/V ) 0.05 %( W /V ) 2.5mM10mM

21、20mM配制量 100mL配置方法1.配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至滤除菌。2.向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。C保存。3. 410、2 &T培养基组份浓度 1.6 % (W/V ) Tryptone ， 1 % (W/V ) Yeast Extract ，0.5 % (W/V ) NaCI配制量1L配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。TryptoneYeast Extract16g10gNaCI5g11、2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加1N KOH，调节pH值至7.0。4.加水离子水

22、将培养基定容至5.高温高压后，4 C保存。1L。b xbroth 培养基 组份浓度 2 %( W/V ) Tryptone ，0.5 %( W/V ) Yeast Extract , 0.5 %( W/V )5g20g3.滴加1N KOH，调节2.加入约800mL的去离子水,pH值至7.5 o4.加水离子水将培养基定容至MgSO4 ?7H2O充分搅拌溶解。1L。5g12、NZCYM培养基5.高温高压后，4 C保存。组份浓度 0.5 %( W/V )Yeast Extract0.1 %( W/V )Casamino Acid1 %( W /V )NZ胺0.5 %( W /V )NaCI0.2 %

23、( W /V )MgSO4?7H2OMgSO4 ?7H2O配制量1L配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。TryptoneYeast Extract配制量1L配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Yeast Extract5gCasamino Acid1gNZ胺NaCI10g5gMgSO4?7H2O2g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5N NaOH 溶液(约0.2mL )，调节pH4.加水离子水将培养基定容至1L o值至7.0。13、5.高温高压后，4 C保存。NZYM培养基 组份浓度0.5 %( W/V )Yeast Extract1 %( W /V )0.5

24、%( W /V )0.2 %( W /V )NZ胺NaCIMgSO4 ?7H2O配置方法NZYM培养基除不含 Casamino Acid （酪蛋白氨基酸）夕卜，其他成份与14、NZM 培养基 组份浓度 1 %（W /V ） NZ胺1 %(W /V)0.5 %( W /V )NZCYM培养基相同。NaClMgSO4 NH2ONZYM 培养基相同。15、一般固体培养基的 列试剂中的一种。配制Agar （琼脂：铺制平板用）Agar （琼脂：配制顶层琼脂用）Agarose （琼脂糖：铺制平板用）Agarose （琼脂糖：配制顶层琼脂用）15 g/L15g/L7g/L7g/L4.铺制平板（3035mL培

25、养基/90mm 培养皿）。16、LB/Amp/X-Gal/IPTG组份浓度1 %( W /V )Tryptone平板培养基0.5 %( W/V )Yeast Extract1%( W/V )NaCl0.1mg/mLAmpicillin0.5 %( W /V )IPTG0.04mg/mLX-Gal1.5 %( W /V )Agar配制量1L配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone10gYeast ExtractNaCl2.高温高压灭菌后，带上手套取岀培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基 温度很高，小心烫伤）。3.待培养基冷却至5060 C时，加入热不稳定物质（如抗

26、生素），摇动容器充分混匀5g10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5N NaOH 溶液（约0.2mL ），调节pH值至7.0。4.加水离子水将培养基定容至 1L后，加入15gAgar。5.高温高压灭菌后，冷却至 60 C左右。6.加入 1mL Ampicillin （ 100mg/mL ）、 1mL IPTG （ 24mg/mL ）、2mL X-Gal （20mg/mL ）后均匀混合。7.铺制平板（3035mL培养基/90mm 培养基）。8.4 C保存平板。17、TB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度1.2 %( W /V ) Tryptone平板培养基 2.4 %

27、( W/V )Yeast Extract0.4 %(W/V )Glycerol17mMKH2PO472mM0.1mg/mLK2HPO4Ampicillin0.2 %（ W /V ）配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract （酵母提取物）夕卜，其他成份与配置方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下0.024mg/mLIPTG0.04mg/mL X-Gal1.5 %(W /V ) Agar配制量1L配置方法 1配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4 , 0.72M K2HPO4 ) 100mL。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tryptone12gY

28、east ExtractGlycerol3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。4.加水离子水将培养基定容至 1L后，加入15gAgar。5.高温高压灭菌后，冷却至 60 C左右。6.加入100mL 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、 1mL Ampicillin (100mg/mLIPTG (24mg/mL )、2mL X-Gal ( 20mg/mL )后均匀混合。7.铺制平板(3035mL培养基/90mm 培养基)。8.4 C保存平板。生物化学实验常用试剂的配制方法24g4mL）、1mL1、0.5mol/L 氢氧化钠溶液 组份浓度0.5mol/L配制量2L配置方法1.准确称取氢氧化钠40g o

29、2.用去离子水溶解并稀释至2Lo2、0.5mol/L盐酸溶液组份浓度 0.5mol/L配制量2L配置方法1.准确量取盐酸83.4mL o2.用去离子水稀释至2L o4、0.2 %葡萄糖标准溶液组份浓度0.2 %配制量1L配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70 C干燥2小时。2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重3.准确称取葡萄糖2.000g o4.用去离子水溶解并定容至1L5.于4 C保存。5、250 pg/mL 牛血清白蛋白标准液组份浓度250 p/mL配制量2L配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白2.用0.03mol/LpH7.8 的磷酸缓冲液溶解并定容至 1L3.4 C保存6、Folin 试剂甲配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水