常用固定液的配制.docx
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常用固定液的配制
常用固定液的配制
常用固定液的配制
1.福尔马林-醋酸-酒精固定液（FAA）
50%或70%酒精90ml+冰醋酸5ml+福尔马林（37%~40%甲醛）5ml
可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。
幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。
若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。
若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。
久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。
此液又可作保存液。
固定时间最多10h。
如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：
50%酒精89ml+冰醋酸6ml+福尔马林5ml
2.福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）
福尔马林5ml+丙酸5ml+70%酒精90ml
固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。
3.酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoyfixative）
配方Ⅰ：
纯酒精3份+乙酸1份
配方Ⅱ：
纯酒精6份+乙酸1份+氯仿3份
配方Ⅲ：
甲醇6份+乙酸1份+氯仿3份
适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。
固定时间不宜过久。
4.酒精-福尔马林固定液
福尔马林2~6（6~10）ml+70%酒精100ml
固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。
通常固定24h，亦可长久保存。
5.酒精-福尔马林-甘油固定液
95%酒精150ml+5%福尔马林100ml+甘油50ml
此液也可长期储存材料。
6.铬酸-醋酸固定液
根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：
（1）弱液配方：
10%铬酸2.5ml+10%醋酸5ml+蒸馏水92.5ml
（2）中液配方：
10%铬酸7ml+10%醋酸10ml+蒸馏水83ml
（3）强液配方：
10%铬酸10ml+10%醋酸30ml+蒸馏水60ml
弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。
固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12~24h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至1h。
中液配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。
为了易于渗透，可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。
固定时间12~24h。
强液配方用于固定木质根、茎、成熟子房等。
为了易于渗透，可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。
固定时间12~24h或更长。
7.铬酸-醋酸-福尔马林混合液
这3种药品混合在一起所配成的各种固定液，通常称纳瓦申固定液（Nawashinfixative），简称Craf。
配方见下表：
常备液
纳瓦申
原液（ml）
纳瓦申固定液（ml）
桑弗利斯液（ml）
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
甲
液
1%铬酸
40
40
40
10%铬酸
15
8
10
13
铬酸
15
20
20
60
70
冰醋酸
10
8
蒸馏水
75
45
40
40
32
20
79
乙
液
福尔马林
40
10
10
10
20
30
64
蒸馏水
60
90
90
80
80
70
36
甲、乙两液均为贮备液，使用之前才将二者混合。
适用于组织学和细胞学的研究材料。
柔嫩而含水多的材料，可选用Ⅰ或Ⅱ固定，坚韧而成熟的材料，可用高浓度的Ⅳ或Ⅴ，一般材料多用Ⅲ。
制作染色体和有丝分裂的纺锤体标本时，常用桑弗利斯固定液。
Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ固定液的固定时间为12~48h，桑弗利斯液固定时间为4~6h。
8.铬酸-锇酸-醋酸固定液（Flemmingfixative）
强液：
10%铬酸水溶液3.1ml+2%锇酸的铬酸（2%）水溶液12ml+10%醋酸水溶液30ml+蒸馏水11.9ml
中液：
10%铬酸水溶液0.33ml+2%锇酸的铬酸（2%）水溶液0.62ml+10%醋酸水溶液3ml+蒸馏水6.27ml
弱液：
10%铬酸水溶液1.5ml+2%锇酸的铬酸
原液B：
将10mlA液加入到90ml5%苯酚水溶液中。
原液C：
将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。
染色液：
取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。
7.间苯三酚染液
将5g间苯三酚溶入100ml95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。
8.中性红染液
将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。
9.钌红染液
将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。
10.龙胆紫染液
将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。
现常用结晶紫代替。
必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。
11.铁醋酸洋红染液
先将100ml45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g洋红粉末（切记不可一次倒入）。
待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。
静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。
12.苏木精染液
苏木精的配方很多，常用的有如下3种：
配方Ⅰ：
苏木精水溶液
0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。
配方Ⅱ：
代氏苏木精（Delarfield’shaematoxylin）
甲液：
苏木精1g+无水酒精6ml
乙液：
硫酸铝铵（铵矾）10g+蒸馏水100ml
丙液：
甘油25ml+甲醇25ml
分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加入丙液，混匀后静置1~2月，至颜色变为深紫色后，过滤备用，可长期保存。
配方Ⅲ：
爱氏苏木精（Ehrlich’shaematoxylin）
苏木精1g+无水或95%酒精50ml+蒸馏水50ml+甘油50ml+冰醋酸5ml+硫酸铝钾（钾矾）3~5g。
配制时，先将苏木精溶于酒精中，然后依次加入蒸馏水、甘油和冰醋酸，最后加入研细的钾矾，边加边搅拌，直到瓶底出现钾矾结晶为止。
混合后溶液颜色呈淡红色，放入广口瓶中，用纱布封口，自然氧化1~2月，至颜色变为深红色时即可过滤备用，可长期保存。
13.席夫试剂（Schiff’sregent）
将0.5g碱性品红溶入煮沸的蒸馏水，搅拌使其充分溶解。
冷却至50℃时，过滤于棕色细口瓶中，加入10ml1mol/L盐酸。
冷却至25℃左右，加入1g偏亚硫酸钾或钠（Na2S2O5或K2S2O5），振荡使其溶解，密封瓶口，置于黑暗低温处过夜。
次日检查，若染色液透明无色或呈淡茶色，即可使用。
若染色较深，可加入少量优质活性炭（0.5~2g），振荡1min，置于4℃冰箱中过夜，过滤使用。
此液配好后，应塞紧瓶塞，外包黑纸，贮藏于冰箱中。
14.硫堇染液
将0.25g硫堇粉末，溶于100ml蒸馏水中，即可使用。
使用此液时。
需用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片，能产生多色反应。
15.亚甲基蓝染液
0.1g亚甲基蓝溶入100ml蒸馏水即可。
16.詹纳斯绿B（JanusgreenB）染液
5.18g詹纳斯绿溶入100ml蒸馏水，配成饱和水溶液。
用时需稀释，稀释倍数应视材料而异。
17.苏木精-曙红（HE）染液
曙红（Eosin），酸性染料，为最优良的动物细胞染料，与苏木精配合使用（复染）对动物组织进行对比染色。
苏木精的染液的配方同上。
曙红有以下配制方法：
配方Ⅰ：
曙红0.5g+95%酒精100ml
配方Ⅱ：
曙红0.5g+蒸馏水100ml
配方Ⅲ：
曙红0.5g+95%酒精25ml+蒸馏水75ml
18．蛋白胶亦称梅氏蛋白的制作
将鸡蛋一个打破让蛋清流入烧杯内，用筷子充分条大雪花状泡沫，然后将它用双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，过滤出透明的蛋白液，此时再加入等量的甘油，稍稍振摇使两者混合，最后加入麝香草酚（thymol）（1:
100）做防腐作用，可保存几个月到一年（4℃冰箱中）。
载玻片和盖玻片的清洗方法
新载玻片的洗涤可分别将载玻片逐片投入到洗液中浸泡数小时，取出后先用自来水冲洗干净洗液，然后再用蒸馏水清洗两遍，最后投入95％酒精中备用，用时取出在玻片用干净的纱布擦干即可。
陈旧的切片标本，如再用其载玻片，可将其浸泡在肥皂水中煮30min左右，然后在热水中洗去残留的树胶及浆糊等，用清水冲洗干净放入洗液中浸1h，然后自来水冲洗干净洗液，再用蒸馏水清洗两遍，最后投入95％酒精中备用。
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