实验室常用培养基的配制方法.docx

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实验室常用培养基的配制方法

五、实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin（氨卡青霉素）（100mg/ml）

组份浓度100mg/mlAmpicillin

配制量50ml

配制方法1.称量5gAmpicillin置于50ml离心管中。

2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml

3.用0.22m过滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1ml/份）后,-20T保存。

IPTG（异丙基-B-D-硫代半乳糖苷）（24mg/ml）

组份浓度24mg/mLIPTG

配制量50mL

配制方法1.称1.2gIPTG置于50ml离心管中。

2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml

3.用022m过滤膜过滤除菌。

4小份分装（1ml，份）后,-20E保存。

X-Gal（20mg/ml）

组份浓度20mg/mlX-Gal

配制量50ml

配制方法1.称量IgX-Gal置于50ml离心管中。

2.加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50ml

3.小份分装（1ml/份）后，-20C避光保存。

ID拉差甘

LB培养基

组份浓度1%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨），0.5%（W/V）YeastExtract（酵母提取物），

1%（W/V）NaCI

配制量1L

配制方法1.称取下列试剂，置于lL烧杯中。

Tryptone

10g

YeastExtract

5g

NaCl

10g

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2m1），调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1Lo

5咼温咼压火菌后，4。

C保存。

LB/Amp培养基

组份浓度

0.5%（W/V）

YeastExtract

1%（W/V）

NaCl

0.1mg/ml

Ampicillin

配制量1L

配制方法1•称取下列试剂，置于IL烧杯中

Tryptone

10g

YeastExtract

5g

NaCl

10g

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL）。

调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定谷至1Lo

5.咼温咼压火菌后，冷却至室温。

6.加入1mlAmpicillin（100mg/ml）后均匀混合。

7.4°C保存。

TO拉差甘

IB培养基

1.2%（W/V）

Tryptone

2.4%（W/V）

YeastExtract

0.4%（V/V）

Glycerol

17mM

KH2PO4

72mM

K2HPOa

配制量1.L

配制方法1.配制磷酸盐缓；中液（0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4）100ml。

溶解2.31gKH2PC4和l2.54gK2HPO4于90ml的去离子水中，搅

拌溶解后，加去离子水定容至100ml，咼温咼压火菌2.称取下列试剂，置于lL烧杯中。

Tryptone

12g

YeastExtract

24g

Glycerol

4m

3.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，咼温咼压火菌。

5.待溶液冷却至60C以下时，；加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6.4C保存。

TB/Amp培养基

组份浓度

1.2%（W/V）

Tryptone

2.4%（W/V）

YeastExtract

0.4%（V/V）

Glycerol

17mM

KH2PO4

72mM

K2HPO4

0.1mg/ml

Ampicillin

配制量

配制方法

SOB培养基

组份浓度

配制量

配制方法

压灭菌。

SOC培养基

组份浓度

1L

1•配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4）100ml。

溶解2.31gKH2PO4,和12.54gK2HPO4于90ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100ml，咼温咼压火菌。

2.称取下列试剂，置于IL烧杯中。

Tryptone

12g

YeastExtract

24g

Glycerol

4ml

3.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至IL后，咼温咼压火菌。

5.待溶液冷却至60C以下时，加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6.均匀混合后4C保存。

在90ml的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100ml。

2.配制2MMgCl2溶液。

在90ml去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100ml，高温高

4.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

5.量取10m1250mMKCl溶液，加入到烧杯中。

6.滴加5NNaOH溶液（约0.2m1），调节pH值至7.0。

7.加入去离子水将培养基定容至lL0

8.高温高压灭菌后，4C保存。

9.使用前加入5ml灭菌的2MMgCl2溶液。

2%（W/V）

Tryptone

0.5%（W/V）

YeastExtract

0.05%（W/V）

NaCl

2.5mM

KCl

10mM

MgCl2

20mM

Glucose

配制量100mL

配制方法1.配制IMGlucose溶液。

将18gGlucose溶于90ml去离子水中，充分溶解后定容至100ml。

用0.22何滤膜过滤除菌。

2.向I00mlSOB培养基中加入除菌的1MGlucose溶液2ml，均匀混合。

3.4C保存。

28T培养基

组份浓度1.6%（WV）Tryptone,1%（W/V）YeastExtract,0.5%（W/V）NaCI配制量1L

配制方法1.称取下列试剂，置于lL烧杯中。

Tryptone

16g

YeastExtract

10g

NaCl

5g

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解

3.滴力卩5NNaOH,调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1Lo

5.咼温咼压火菌后，4C保存。

①bxbroth

组份浓度2%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）YeastExtract，o

5%（W/V）MgSO47H2O

配制量1L

配制方法1.称取下列试剂，置于lL烧杯中。

Tryptone

20g

YeastExtract

5g

MgSO47H2O

5g

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解

3.滴加1NKOH。

调节pH值至7.5o

4.加去离子水将培养基定容至1Lo

5.咼温咼压火菌后，4C保存。

NZCYM培养基

0.5%（WV）

YeastExtract

0.1%（WV）

CasaminoAcid（酪蛋白氨基酸）

1%（WV）

NZ胺

0.5%（WV）

NaCl

0.2%（WV）

MgSO47Ho

1L

1•称取下列试剂。

置于IL烧杯中

YeastExtract

5g

CasaminoAcid

1g

NZ胺

10g

NaCl

5g

MgSO47Ho

2g

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2ml），调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定谷至1Lo

5.咼温咼压火菌后，4C保存。

组份浓度

配制量

配制方法

NZYM培养基

组份浓度

0.5%（WV）

YeastExtract

1%（WV）

NZ胺

0.1%（WV）

NaCl

0.2%（WV）

MgSO47Ho

配制方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid外，其他成份与NZCYM培养基相同。

NZM培养基

组份浓度

1%（WV）

NZ胺

0.1%（WV）

NaCl

0.2%（WV）

MgSO47Ho

配制方法NZM培养基除不含YeastExtract酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。

一般固体培养基的配制

配制方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。

Agar（琼脂；铺制平板用）

15g/L

Agar（琼脂；配制顶层琼脂用）

7g/L

Agarose（琼脂糖；铺制平板用）

15g/L

Agarose（琼脂糖；配制顶层琼脂用）

7g/L

2.高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂

糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。

3.待培养基冷却至50~60°C时，加入热不稳定物质（如抗生素等）,摇动容器充分混匀。

4.铺制平板（30~35ml培养基/90mm培养皿）。

LB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基组份浓度

1%（W/V）

Tryptone

0.5%（W/V）

YeastExtract

1%（W/V）

NaCl

0.1mg/ml

Ampicillin

0.024mg/ml

IPTG

0.04mg/ml

X-GaL

1.5%（W/V）

Agar

配制量1L

配制方法1•称取下列试剂，置于lL烧杯中

Tryptone

10g

YeastExtract

5g

NaCl

10g

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5.高温高压灭菌后，冷却至60C左右。

6.加入1mlAmpicillin（100mg/ml）、1mlIPTG（24mg/ml）、2mlX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7.铺制平板（30~35ml/90mm培养皿）。

8.4C避光保存。

TB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基组份浓度

1.2%（W/V）

Tryptone

2.4%（W/V）

YeastExtract

0.4%（V/V）

Glycerol

17mM

KH2PO4

72mM

K2HPO4

0.1mg/ml

Ampicillin

0.024mg/ml

IPTG

0.04mg/mL

X-GaL

1.5%（W/V）

Agar

配制量1L

配制方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100ml。

溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90ml的去离子水中，搅

拌溶解后，加去离子水定容至100ml,咼温咼压火菌

2.称取下列试剂，置于IL烧杯中。

Tryptone

12g

YeastExtract

24g

Glycerol

4ml

3.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解