实验室常用培养基的配制方法.docx

1、实验室常用培养基的配制方法五、实验室常用培养基的配制方法Ampicillin（氨卡青霉素）（100 mg/ml）组份浓度 100 mg/ml Ampicillin配制量 50 ml配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml3.用0.22 m过滤膜过滤除菌。4.小份分装（1 ml/份）后,-20T保存。IPTG（异丙基-B -D-硫代半乳糖苷）（24 mg/ml）组份浓度 24 mg/mL IPTG配制量 50 mL配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。2.加入40 ml灭菌水，充分混合

2、溶解后，定容至 50 ml3.用0 22 m过滤膜过滤除菌。4小份分装（1 ml，份）后,-20E保存。X-Gal （20 mg/ml）组份浓度 20 mg/ml X-Gal配制量 50 ml配制方法 1.称量I g X-Gal置于50 ml离心管中。2.加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50 ml3.小份分装（1 ml/份）后，-20C避光保存。I D拉差甘LB培养基组份浓度 1%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨），0.5%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物），1%（W/V）NaCI配制量 1 L配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。Tr

3、ypt one10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH（约 0.2 m1），调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至1 L o5咼温咼压火菌后，4。C保存。LB/Amp培养基组份浓度0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpicilli n配制量 1 L配制方法 1称取下列试剂，置于I L烧杯中Trypt one10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH(约

4、 0.2 mL)。调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定谷至1 L o5.咼温咼压火菌后，冷却至室温。6.加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。7.4C保存。TO拉差甘IB培养基1.2%(W/V)Trypt one2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPOa配制量 1.L配制方法 1.配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH 2PO4, 0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PC4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅拌溶解 后，

5、加去离子水定容至100 ml，咼温咼压火菌 2.称取下列试剂，置于l L烧杯中。Trypt one12 gYeast Extract24 gGlycerol4 m3.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1 L后，咼温咼压火菌。5.待溶液冷却至60C以下时，；加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲 液。6.4C保存。TB/Amp培养基组份浓度1.2%(W/V)Trypt one2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH 2PO472 mMK2HPO40.1 mg/mlAmpicilli n配制量配制方法SOB培养

6、基组份浓度配制量配制方法压灭菌。SOC培养基组份浓度1 L1配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH 2PO4, 0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4,和 12.54g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅 拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，咼温咼压火菌。2.称取下列试剂，置于I L烧杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 ml3.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至I L后，咼温咼压火菌。5.待溶液冷却至60C以下时，加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲 液。6.均匀

7、混合后4C保存。在90 ml的去离子水中溶解1.86 g KCl后，定容至100 ml。2.配制2 M MgCl2溶液。在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，高温高4.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。5.量取10 m1 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。6.滴加5 N NaOH溶液(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。7.加入去离子水将培养基定容至l L 08.高温高压灭菌后，4C保存。9.使用前加入5 ml灭菌的2 M MgCl 2溶液。2%(W/V)Trypt one0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl

8、2.5 mMKCl10 mMMgCl220 mMGlucose配制量 100 mL配制方法 1.配制I M Glucose溶液。将18 g Glucose溶于90 ml去离子水中，充分溶解后定容至100 ml。 用0.22 何滤膜过滤除菌。2.向I 00 ml SOB培养基中加入除菌的1 M Glucose溶液2 ml，均匀 混合。3.4C保存。2 8T培养基组份浓度 1.6%(WV)Tryptone , 1%(W/V)Yeast Extract, 0.5%(W/V)NaCI 配制量 1 L配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。Trypt one16 gYeast Extract10

9、gNaCl5 g2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解3.滴力卩5 N NaOH,调节pH值至7.0。4.加去离子水将培养基定容至1 L o5.咼温咼压火菌后，4C保存。 bx broth组份浓度 2%(W/V)Tryptone ， 0.5%(W/V)Yeast Extract ， o5%(W/V)MgSO 4 7H2O配制量 1 L配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。Trypt one20 gYeast Extract5 gMgSO4 7H2O5 g2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解3.滴加1 N KOH。调节pH值至7.5o4.加去离子水将培养基定容至1 L

10、o5.咼温咼压火菌后，4C保存。NZCYM培养基0.5%(WV)Yeast Extract0.1%(WV)Casamino Acid （酪蛋白氨基酸）1%(WV)NZ胺0.5%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4 7Ho1 L1称取下列试剂。置于I L烧杯中Yeast Extract5 gCasam ino Acid1 gNZ胺10 gNaCl5 gMgSO4 7Ho2 g2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH（约 0.2 ml），调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定谷至1 L o5.咼温咼压火菌后，4C保存。组份浓度配制量配制方法NZY

11、M培养基组份浓度0.5%(WV)Yeast Extract1%(WV)NZ胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4 7Ho配制方法NZYM培养基除不含Casamino Acid外，其他成份与 NZCYM培养 基相同。NZM培养基组份浓度1%(WV)NZ胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4 7Ho配制方法 NZM培养基除不含Yeast Extract酵母提取物）外，其他成份与NZYM 培养基相同。一般固体培养基的配制配制方法 1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加 入下列 试剂中的一种。Agar（琼脂；铺制平板用）15 g/LAgar（琼脂；配制

12、顶层琼脂用）7 g/LAgarose（琼脂糖；铺制平板用）15 g/LAgarose（琼脂糖；配制顶层琼脂用）7 g/L2.高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。3.待培养基冷却至5060C时，加入热不稳定物质（如抗生素等）, 摇动容器充分混匀。4.铺制平板（3035 ml 培养基 /90 mm培养皿）。LB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培 养基 组份浓度1%(W/V)Trypt one0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpicilli n0.024mg/mlIPTG0.04

13、 mg/mlX-GaL1.5%(W/V)Agar配制量 1 L配制方法 1称取下列试剂，置于l L烧杯中Trypt one10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH（约 0.2 mL），调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至1 L后，加入15 g Agar。5.高温高压灭菌后，冷却至 60 C左右。6.加入 1 ml Ampicillin（100 mg/ml）、1 ml IPTG（24 mg/ml）、2 ml X-Gal（20 mg/mL）后均匀混合。7. 铺制平板（3035 ml /90

14、mm培养皿）。8.4C避光保存。TB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培 养基 组份浓度1.2%(W/V)Trypt one2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH 2PO472 mMK2HPO40.1 mg/mlAmpicilli n0.024 mg/mlIPTG0.04mg/mLX-GaL1.5%(W/V)Agar配制量 1 L配制方法 1.配制磷酸盐缓冲液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）100 ml。溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅 拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml,咼温咼压火菌2.称取下列试剂，置于I L烧杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 ml3.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解