Waters UPLC I Class SYNAPT G2 S操作规程.docx

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WatersUPLCIClassSYNAPTG2S操作规程

文件编号：

HX-QT002

第1页，共61页

WatersUPLCI-ClassSYNAPT

标题：

操作规程G2-S

第A版第0次修订

发布日期：

2013年4月25日

WatersUPLCI-ClassSYNAPTG2-S

操作规程

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日期：

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审核人：

日期：

批准人：

文件编号：

HX-QT002

第2页，共61页

WatersUPLCI-ClassSYNAPT

标题：

G2-S操作规程

第A版第0次修订

发布日期：

2013年4月25日

术语说明

UltraPerformanceLiquidChromatography

UPLC

超高效液相色谱仪

IonSourceSource

离子源

TimeofFlightTOF

飞行时间质谱

QuadrupoleQuad

四级杆

Fullscan

全扫描模式Scan

文件编号：

HX-QT002

第3页，共61页

WatersUPLCI-ClassSYNAPT

标题：

操作规程G2-S

第A版第0次修订

发布日期：

2013年4月25日

1.目的......................................................................................4

2.适用范围..............................................................................4

3.设备、化学试剂、实验室备件.........................................4

4.仪器操作步骤......................................................................4

5.维护保养............................................................................60

6.记录....................................................................................61

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第4页，共61页

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2013年4月25日操作规程G2-S

WatersUPLCI-ClassSYNAPTG2-S操作规程

1.目的

规范WatersUPLCI-ClassSYNAPTG2-S联用仪操作管理工作，确保技术人员对该仪器进行安全、熟练、高效、有序的操作。

2.适用范围

适用于WatersUPLCI-ClassSYNAPTG2-S的操作管理工作。

3.设备、化学试剂、实验室备件

3.1设备：

序号设备名称型号

7890A安捷伦气相色谱1

WatersUPLCI-Class沃特世超高效液相色谱仪2

WatersSYNAPTG2-S

沃特世四级杆3-飞行时间质谱3.2化学试剂：

亮脑啡肽（leucineenkephalin）：

CAS:

58822-25-6；甲酸钠（NaFA）：

CAS:

141-53-7

4.仪器操作步骤

4.1UPLCSYNAPTG2-S联用仪的开启

4.1.1打开电脑，输入用户名：

waters，密码：

waters。

4.1.2打开液相各个模块电源（没有顺序）。

4.1.3打开氮气发生器的电源，确认压力指示100psi；打开氩气减压阀确认压力指示在7

psi；高分辨质谱还需打开氦气减压阀确认压力指示在7psi，此时关闭samplecone的isolation

valve。

4.1.4打开质谱电源开关，在质谱背面板右侧位置有四个黑色可以上下搬动的开关，按照从下到上的顺序依次将这四个开关搬到向上的位置。

4.1.5等待约5分钟，待仪器与电脑网络通讯连接好，双击桌面MasslynxV4.1图标，打开Masslynx软件，等待软件主窗口状态栏中部偏右位置出现NotScanning的信息。

，在右侧QTOF/IntellistartG2Synapt窗口，左边栏依次选中ConsoleMS打开4.1.6

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窗口中点击operate快捷图标。

（点击operate图标后应该能听到外置真空泵发出很大噪音，随后声音逐渐变小）

4.1.7打开MStune窗口，单击氩气的控制开关，关闭氩气。

等待右下角红色方块变为绿色，表明仪器可以工作了（通常这个过程需要7-8个小时。

可以从MStune/view/vacuum-6时，右下角红色方块会变成绿色），此的真空度小于1.2e10中观察真空度的变化，当TOF时可打开isolationvalve。

4.2液相系统的灌注

准备流动相，如用到缓冲盐流动相需用0.22μm的滤膜过滤，所有缓冲盐流动相和超纯水都要新配置，且使用不得超过两天；所有样品都要用初始流动相来溶解，并用0.22μm的滤膜过滤。

在MassLynx软件主界面点击MassConsole图标，打开液相控制台窗口。

选择ACQUITYUPLCSystem界面下的Control/PrimeA/Bsolvents，分别灌注A1、B1和A2、B2流路3min；然后选择ACQUITYUPLCSystem界面下的Control/PrimeSealWash，灌注Seal

Wash流路，观察SealWash管路没有气泡后，点击PrimeSealWash，停止灌注SealWash；选择ACQUITYUPLCSystem目录树的SampleManager，点击右侧的Control/Primesyringes，灌注进样针和洗针系统。

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4.3新项目的建立

注：

如在已有的项目下进行试验，此步骤可以不做。

4.3.1在MassLynx主窗口选择File/ProjectWizard。

4.3.2当出现以下窗口时，点击Yes。

。

Next输入项目名称，点击4.3.3

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4.3.4选择Createusingexistingprojectastemplate，点击Browse，选择新建项目的模板，点击Next。

4.4.质谱质量数粗校

在MassLynx主界面点击MassTune图标进入MassTune界面，LockSprayFlow

按设定流速进样、下的三个按钮功能从左至右依次为：

Control停止进样、灌

注管路。

将实时校正液放在设置瓶号位置，点击灌注管路，排除气泡。

点击Sprayer

Position设定挡板位置在LockSpray；设定Reservoir为实时校正液瓶号位置（B）；设定Flow

State为Infusion模式；设定InfusionFlowRate，通常为5μL/min；点击按钮，进样，如图

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+的准确质LE+H）ES+时，（实时校正液（4.4.1LE）进样，信号稳定后观察主峰的质量数，-的准确质量数为554.2615），观察实测质量数与理论准确LE-H量数为556.2771，ES-时，（质量数的差别，如果其差值在±0.1则可省去粗校步骤；如果差值较大，进行粗校。

4.4.2点击MSTune主界面上部菜单的Setup，弹出下拉菜单，点击SystemView，在弹出的窗口输入密码：

access，点击OK，进入systemview模式。

4.4.3在systemview模式下点击上部菜单的System，弹出下拉菜单，点击AcquisitionSettings，弹出质量数粗校窗口，如图

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4.4.4在质量数粗校窗口右侧，勾选CalculateandsetVeff，设定计算并设置Veff值；Reference

Mass：

输入LE（实时校正液）在该模式下的准确质量数，MeasuredMass：

输入刚观察到的实际检测质量数，点击Calculate，然后点击Update，质量数粗校完成。

点击Close退出粗校窗口。

4.4.5在SystemView窗口点击上部菜单的Setup，弹出下拉菜单，点击SystemView，弹出系统参数保存窗口，点击保存BothTuningParametersandSystemSetting，点击OK退出模式。

SystemView

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4.5.质谱质量轴校正

4.5.1在MassLynx主界面点击MassTune图标，进入MassTune界面。

设置挡板位置Sprayer

Position为Sample，设置SampleFlowControl参数，先将质量轴校正液NaFA放在对应位

置，点击灌注图标排除管路气泡。

设定InfusionFlowRate，通常为5-10μL/min，Flow

。

State为Infusion，Reservoir为校正液所放位置，灌注完成后点击进样按钮4.5.2在MassLynx主界面点击MassConsole图标，进入MassConsole界面，点击左边的目录树SYNAPTG2-S展开其目录，选中IntelliStart，点击右部菜单栏的Configure下拉菜单，按钮，如图Start，单击界面右部的CreateCalibration，选中ConfigureMode单击

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4.5.3弹出校正文件编辑向导。

点击左下角CalibrationProfileEditor按钮，进入Calibration

ProfileEditor界面，点击File\New，建立新的校正文件，输入校正文件名称，如图。

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4.5.4编辑校正文件。

在MassRange右侧点击Edit按钮，编辑质量数范围，通常设定质量，如图50-1200Da数范围．

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设定校正类型，通常选择自动校正，如图。

4.5.5

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4.5.6点击正离子模式或负离子模式右下角的Edit键，编辑用于校正正离子模式或负离子模式校准物质，如图。

通常选择甲酸钠为质谱质量轴校正物质，编辑完成后如图，点击OK退出校正文件编辑界面。

．

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4.5.7点击File\Exit，又出现校正文件编辑向导首页，此时选中的校正文件就是刚编辑好的校正文件，点击Next。

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4.5.8校正设置。

此时选中的校正是正离子模式下灵敏度（Sensitivity）、分辨率（Resolution）、高分辨率（HighResolution）三种模式的质量轴校正，选择要做的模式，通过右边的勾去掉。

Next不需要模式下的校正；当需要做不止一种模式的质量轴较正时最好分开做。

点击

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4.5.9校正数据采集参数设置，该界面可选择单级质谱模式或串联质谱模式；如果选择了串，如图Next，需打开碰撞压并设置其能量，点击）MSMS联质谱模式（．

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界面的参数设置进样。

MSTune，按照TunePage校正液流路设置，选择4.5.10

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4.5.11设置校正文件可接受标准，选择ppm，在Threshold（ppm）输入1，表示各个质量数开始校正，如图Start，出现准备校正窗口，点击Next。

点击1ppm的允许残差为

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4.5.12校正完成后自动弹出校正报告，显示Pass，表明校正通过。

4.5.13校正完成后，到MSTune点击NaFA停止进样图标停止进样。

4.6.实时校正离子源优化

4.6.1在MassLynx主界面点击MassTune图标，进入MassTune界面，设置LockSprayFlow

Control参数。

先将实时校正液LE放在对应位置，点击灌注图标排除管路气泡。

设定SprayerPosition为LockSpray，设定InfusionFlowRate，通常为5μL/min，FlowState为

Infusion，Reservoir为实时校正液所放位置，灌注完成后点击进样按钮。

4.6.2与质谱质量轴校正相同，在MassConsole界面的ConfigureMode模式下，点击LockSpraySourcesetup，点击右部的Start按钮，进入到LockSpraySourcesetup编辑向导，。

Next编辑窗口，点击LockSpraySourcesetup进入Next点击

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4.6.3在此页面点击左下部的LockSprayProfileEditor，编辑实时校正文件，弹出LockMass

，建立新的实时校正文件。

File/New窗口，点击Editor

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4.6.4实时校正文件编辑窗口，如图。

在此页面编辑实时校正文件的名称，设定实时校正的参考物质（通常实时校正参考物质为LE），设定质谱模式（单质谱或串联质谱），设定正离子模式或负离子模式，选择相应的质量数。

例如做单级质谱正离子模式的实时校正文件，见，退出编辑窗口。

OK下图。

参数设置完成后，点击

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注：

如果设定为单质谱模式（Mode：

MS），正离子模式选择质量数556.2771，负离子模式选择质量数554.2615；如果设定为串联质谱模式（Mode：

MSMS），则需开启碰撞能量，正负离子模式除了单质谱模式选择的质量数外，可再添加一个响应较高的质量数。

4.6.5此时自动弹出LockMassEditor窗口，点击File/Exit退出。

，如图Next编辑向导界面，点击LockSpray回到4.6.6

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4.6.7进入LockSpraySetup设置，设置自动或自定义Setup类型，选择Custom，点击Next，如图

4.6.8设定LockSpray的锥孔电压及分析器传输，选择TunePage的编辑好的参数，点击Next，如图

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4.6.9设置实时校正样品流路，选择TunePage，点击Next，如图

。

LockSpraySourceSetup，开始运行Start弹出窗口如下，点击4.6.10

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4.6.11实时校正完成后自动弹出报告，显示Pass，表明实时校正通过。

4.6.12实时校正设定完成后回到MSTune界面，点击LE停止进样图标停止进样。

4.7.检测器设置

4.7.1同4.6.1，设置LE进样参数。

4.7.2在MSConsole界面的Configure模式下，点击DetectorSetup，点击右部Start按钮，如图

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4.7.3进入DetectorSetup向导，点击Next

，如图Next编辑界面，点击DetectorSetup进入4.7.4

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4.7.5设置DetectorSetup的样品流路，选择TunePage，点击Next，如图

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4.7.6弹出如下界面，点击Start。

4.7.7DetectorSetup完成后自动弹出报告。

4.7.8回到MSTune界面，点击LE停止进样。

停止进样图标4.8.数据的采集

4.8.1液相方法的编辑