完整word版LC20AT高效液相色谱仪验证方案.docx

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完整word版LC20AT高效液相色谱仪验证方案

LC-20AT高效液相色谱仪

验证方案

规格型号

LC-20AT

设备编号

023

使用岗位

中药制剂室药检岗位

制造厂商

岛津企业管理（中国）有限公司

本公司所用的LC-20AT高效液相色谱仪是由工作站软件（N2000）、二元泵（LC-20AT）、手动进样器（20微升定量环）、控制器（CBM-20A）、柱温箱（IN-150）、紫外检测器（SPD-20AT）以及相关管路等组成。

主要用于本公司在药物含量检测。

1.参与验证的相关部门及其职责

1.1验证小组成员及职责

部门

验证人员

职务

验证分工

药检科

温铭刚

组长

负责起草验证方案审核、组织协调验证

王凯

化验员

负责撰写LC-20AT型高效液相色谱仪及验证报告

刘丹妮

化验员

保证设备正常运转

1.2验证方案起草

起草部门

签名

日期

药检科

年月日

1.3验证方案批准

批准人

签名

日期

药剂科主任

年月日

2.验证目的

确认LC-20AT高效液相色谱仪的运行环境、性能等各项指标符合器所设计的性能指标。

确保使用该仪器的所检测数据真实可靠，为日常检验提供准确的检测结果。

3.验证依据判断标准：

3.1验证依据

3.1.1《药品GMP指南》2010年版

3.1.2《LC-20AT型高效液相色谱仪标准操作规程》

3.1.3《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》

3.1.4《中国药典》2010年版二部附录

3.2验证评判标准

3.2.1安装环境确认判断标准

确认安装符合《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》说明书要求。

3.2.2运行确认判断标准

安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。

3.2.3性能确认判断标准

使用样品检测符合《中国药典》2010年版二部附录要求和LC-20AT型高效液相色谱仪性能指标。

4.验证内容

4.1安装环境的确认

项目

要求

检查情况

位置

应无强震动源,无强电磁干扰源,通风良好，无明火

环

境

洁净度

室内应保持清洁,无腐蚀性气体

温度

15～35℃，全天温度变化较小

光线

无阳光直射

相对湿度

45～85%

电

路

电源

AC220V±22V、50HZ±1HZ

接地

应接地

单项结论：

_________________________________________________________

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.2运行确认：

严格按《LC-210AT高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表中。

操作步骤

合格标准

结果

操作前准备

1.打开电源，仪器自动完成初始化

2.将排液阀旋钮逆时钟旋转180°以打开排液阀，按“purge”，泵运行，泵指示灯亮

3.清洗完成后，按一次“func”，以改变流速，将流速设定为5ml/min,顺时针方向旋转排液阀旋钮关闭排液阀

4.按“pump”，泵运行，泵指示灯亮；约15分钟后，再次按“pump”，泵停止，泵指示灯灭

5.以上程序完成后，操作的准备工作完成

检查压力值

1.将流动相倒入贮液瓶，吸滤头放入贮液瓶中，排液管的一端放入废液瓶中

2.打开排液阀，逆时钟方向旋转排液阀旋钮180°，按“CE”返回初始屏幕，检查显示压力值是否在-0.3至0.3MPa之间

3.检查压力上下限的值是否合适，必要时更改这些值到符合要求

4.按“purge”以记录的流速开始送液，观察从排液管末端流出的流动相约10秒钟，流动相应持续流动且没有气泡，按“purge”泵停止，泵指示灯灭

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.3性能确认

4.3.1泵性能确认

1）流量准确性确认

泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR

流量设定值（ml/min）

0.5

1.0

2.0

测量次数

3

3

3

流动相收集时间（min）

10

5

5

允许误差

SS

5%

3%

2%

SR

3%

2%

2%

启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式

（1）、

（2）计算SS和SR，结果记录在下表中；

流量（ml/min）

次数

W1

W2

W2-W1

SS

SR

0.5

1

2

3

1.0

1

2

3

2.0

1

2

3

注：

Ss=（

-Fs）/Fs×100%式

（1）

SR=（Fmax-Fmin）/

×100%式

（2）

式中：

Fm——Fm=（W2-W1）/（ρ•t），流量实测值，ml/min；

W2——容量瓶+流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；

ρ——试验温度下流动相的密度，g/mL；t——收集流动相的时间，min；

——同一组测量的算术平均值，mL/min；FS——流量设定值，mL/min；

Fmax——同一组测量中流量最大值，mL/min；Fmin——同一组测量中流量最小值，ml/min。

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

2）压力范围

可执行标准：

±0.2MPa设定值

测试方法：

在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用OD1.6的盲管封住。

启动泵，使压力升至所设定的压力，观察仪器是否自动停泵。

次数

设置压力

（Mpa）

停止压力

（Mpa）

误差

（Mpa）

1

10

2

20

3

30

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.4柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定

将温度计（已校验，分度值为0.1℃）放置在柱温箱内，选择35℃、40℃和45℃进行检定，按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值，平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC，结果记录在下表，柱温箱温度设定值误差ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃；

设定温度

（℃）

次数

首测温度

（℃）

平均温度

（℃）

ΔTS

（℃）

TC

结果

35℃

1

2

3

4

5

6

7

40℃

1

2

3

4

5

6

7

45℃

1

2

3

4

5

6

7

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.5紫外检测器

4.5.1基线噪音和基线漂移

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，二极管阵列检测器的波长设定为254nm，待仪器稳定后，记录基线30min，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度，计算基线噪音，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示，基线噪音应不超过5×10-4；

衰减倍数

测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度

基线噪音

结果

注：

Nd=KB

式中：

K：

衰减倍数；B：

测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度

基线漂移在1h内偏离原点的值为（AU/h），应不超过5×10-3AU/h。

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.5.2最小检测浓度

采用依替巴肽分析色谱条件，进样量20µl；取适量的依替巴肽，用甲醇稀释制成1×10-6g/ml的溶液，连续进样6次，记录依替巴肽/甲醇溶液的色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰—峰高，按下式来计算最小检测浓度（CL），应不超过1×10-6g/ml，结果记录在下表；

依替巴肽的称样量

稀释倍数

依替巴肽的色谱峰高

平均峰高

最小检测浓度

结果

注：

CL=

2Nd×c×V

H×20

式中：

Nd：

基线噪声峰—峰高；c：

标准溶液浓度；H：

标准溶液的色谱峰高；V：

进样体积

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.6整机性能

在4.4.2所记录的色谱图中，按下式计算Rsd值，Rsd≤2.0%，并将结果记录在下表中；

品名

称样量

项目指标

实验结果

结果

分离度（R）≥1.5

Rsd≤2%

图谱文件名

峰面积（A）

平均数（M）

Rsd值

结果

注：

M=（A1+A2+……An）/n

Rsd=

式中：

M：

峰面积平均数；A：

峰面积；n：

测量次数

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

5.验证结果及分析评价

结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

6.再验证要求

6.1再验证周期

6.1.1设备大修后需再校验。

6.1.2由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。

6.1.3高效液相色谱仪的验证周期为一年，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。

6.2再验证内容

进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。

验证证书

名称：

LC-20AT高效液相色谱仪

编号：

023

经验证：

LC-20AT高效液相色谱仪各项技术指标符合要求，准许投入生产。

总负责人：

时间：

LC-20AT高效液相色谱仪

验证方案

规格型号

LC-20AT

设备编号

023

使用岗位

中药制剂室药检岗位

制造厂商

岛津企业管理（中国）有限公司

本公司所用的LC-20AT高效液相色谱仪是由工作站软件（N2000）、二元泵（LC-20AT）、手动进样器（20微升定量环）、控制器（CBM-20A）、柱温箱（IN-150）、紫外检测器（SPD-20AT）以及相关管路等组成。

主要用于本公司在药物含量检测。

1.参与验证的相关部门及其职责

1.1验证小组成员及职责

部门

验证人员

职务

验证分工

药检科

温铭刚

组长

负责起草验证方案审核、组织协调验证

王凯

化验员

负责撰写LC-20AT型高效液相色谱仪及验证报告

刘丹妮

化验员

保证设备正常运转

1.2验证方案起草

起草部门

签名

日期

药检科

年月日

1.3验证方案批准

批准人

签名

日期

药剂科主任

年月日

2.验证目的

确认LC-20AT高效液相色谱仪的运行环境、性能等各项指标符合器所设计的性能指标。

确保使用该仪器的所检测数据真实可靠，为日常检验提供准确的检测结果。

3.验证依据判断标准：

3.1验证依据

3.1.1《药品GMP指南》2010年版

3.1.2《LC-20AT型高效液相色谱仪标准操作规程》

3.1.3《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》

3.1.4《中国药典》2010年版二部附录

3.2验证评判标准

3.2.1安装环境确认判断标准

确认安装符合《LC-20AT型高效液相色谱仪安装使用说明》说明书要求。

3.2.2运行确认判断标准

安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。

3.2.3性能确认判断标准

使用样品检测符合《中国药典》2010年版二部附录要求和LC-20AT型高效液相色谱仪性能指标。

4.验证内容

4.1安装环境的确认

项目

要求

检查情况

位置

应无强震动源,无强电磁干扰源,通风良好，无明火

环

境

洁净度

室内应保持清洁,无腐蚀性气体

温度

15～35℃，全天温度变化较小

光线

无阳光直射

相对湿度

45～85%

电

路

电源

AC220V±22V、50HZ±1HZ

接地

应接地

单项结论：

_________________________________________________________

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.2运行确认：

严格按《LC-210AT高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表中。

操作步骤

合格标准

结果

操作前准备

1.打开电源，仪器自动完成初始化

2.将排液阀旋钮逆时钟旋转180°以打开排液阀，按“purge”，泵运行，泵指示灯亮

3.清洗完成后，按一次“func”，以改变流速，将流速设定为5ml/min,顺时针方向旋转排液阀旋钮关闭排液阀

4.按“pump”，泵运行，泵指示灯亮；约15分钟后，再次按“pump”，泵停止，泵指示灯灭

5.以上程序完成后，操作的准备工作完成

检查压力值

1.将流动相倒入贮液瓶，吸滤头放入贮液瓶中，排液管的一端放入废液瓶中

2.打开排液阀，逆时钟方向旋转排液阀旋钮180°，按“CE”返回初始屏幕，检查显示压力值是否在-0.3至0.3MPa之间

3.检查压力上下限的值是否合适，必要时更改这些值到符合要求

4.按“purge”以记录的流速开始送液，观察从排液管末端流出的流动相约10秒钟，流动相应持续流动且没有气泡，按“purge”泵停止，泵指示灯灭

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.3性能确认

4.3.1泵性能确认

3）流量准确性确认

泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR

流量设定值（ml/min）

0.5

1.0

2.0

测量次数

3

3

3

流动相收集时间（min）

10

5

5

允许误差

SS

5%

3%

2%

SR

3%

2%

2%

启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式

（1）、

（2）计算SS和SR，结果记录在下表中；

流量（ml/min）

次数

W1

W2

W2-W1

SS

SR

0.5

1

2

3

1.0

1

2

3

2.0

1

2

3

注：

Ss=（

-Fs）/Fs×100%式

（1）

SR=（Fmax-Fmin）/

×100%式

（2）

式中：

Fm——Fm=（W2-W1）/（ρ•t），流量实测值，ml/min；

W2——容量瓶+流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；

ρ——试验温度下流动相的密度，g/mL；t——收集流动相的时间，min；

——同一组测量的算术平均值，mL/min；FS——流量设定值，mL/min；

Fmax——同一组测量中流量最大值，mL/min；Fmin——同一组测量中流量最小值，ml/min。

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4）压力范围

可执行标准：

±0.2MPa设定值

测试方法：

在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用OD1.6的盲管封住。

启动泵，使压力升至所设定的压力，观察仪器是否自动停泵。

次数

设置压力

（Mpa）

停止压力

（Mpa）

误差

（Mpa）

1

10

2

20

3

30

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.4柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定

将温度计（已校验，分度值为0.1℃）放置在柱温箱内，选择35℃、40℃和45℃进行检定，按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值，平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC，结果记录在下表，柱温箱温度设定值误差ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃；

设定温度

（℃）

次数

首测温度

（℃）

平均温度

（℃）

ΔTS

（℃）

TC

结果

35℃

1

2

3

4

5

6

7

40℃

1

2

3

4

5

6

7

45℃

1

2

3

4

5

6

7

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.5紫外检测器

4.5.1基线噪音和基线漂移

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，二极管阵列检测器的波长设定为254nm，待仪器稳定后，记录基线30min，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度，计算基线噪音，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示，基线噪音应不超过5×10-4；

衰减倍数

测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度

基线噪音

结果

注：

Nd=KB

式中：

K：

衰减倍数；B：

测得的基线峰—峰高对应的记录仪标度

基线漂移在1h内偏离原点的值为（AU/h），应不超过5×10-3AU/h。

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.5.2最小检测浓度

采用依替巴肽分析色谱条件，进样量20µl；取适量的依替巴肽，用甲醇稀释制成1×10-6g/ml的溶液，连续进样6次，记录依替巴肽/甲醇溶液的色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰—峰高，按下式来计算最小检测浓度（CL），应不超过1×10-6g/ml，结果记录在下表；

依替巴肽的称样量

稀释倍数

依替巴肽的色谱峰高

平均峰高

最小检测浓度

结果

注：

CL=

2Nd×c×V

H×20

式中：

Nd：

基线噪声峰—峰高；c：

标准溶液浓度；H：

标准溶液的色谱峰高；V：

进样体积

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

4.6整机性能

在4.4.2所记录的色谱图中，按下式计算Rsd值，Rsd≤2.0%，并将结果记录在下表中；

品名

称样量

项目指标

实验结果

结果

分离度（R）≥1.5

Rsd≤2%

图谱文件名

峰面积（A）

平均数（M）

Rsd值

结果

注：

M=（A1+A2+……An）/n

Rsd=

式中：

M：

峰面积平均数；A：

峰面积；n：

测量次数

单项结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

5.验证结果及分析评价

结论：

检测人：

日期：

年月日

复核人：

日期：

年月日

6.再验证要求

6.1再验证周期

6.1.1设备大修后需再校验。

6.1.2由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。

6.1.3高效液相色谱仪的验证周期为一年，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。

6.2再验证内容

进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。